1、实验三实验三 人体人体x-染色质的观察染色质的观察 一一.实验目的实验目的 观察与区别观察与区别X染色质染色质：通过实验：通过实验初步掌握简易方法，识别其形态及所初步掌握简易方法，识别其形态及所在部位，为进一步研究人体染色质的在部位，为进一步研究人体染色质的畸变与疾病提供参考条件。畸变与疾病提供参考条件。1949年年Barr等发现，在等发现，在雌猫的神经细雌猫的神经细胞核间期胞核间期有一个凝缩的深染小体，而在雄有一个凝缩的深染小体，而在雄性的细胞中没有。性的细胞中没有。后来了解，在雌体中的两条后来了解，在雌体中的两条X染色体在染色体在间期时有一条间期时有一条(或这条的大部分或这条的大部分)处于
2、凝集而处于凝集而不活动状态，从而形成了这种不活动状态，从而形成了这种X-染色质染色质(或或称性染色质、称性染色质、Barr小体小体)。二二.实验原理实验原理 1932年美国遗传学家年美国遗传学家H.J.Muller首先在首先在果蝇果蝇中发现了中发现了剂量补偿效应剂量补偿效应，并把它看作，并把它看作是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特有的一种遗传效应。有的一种遗传效应。剂量补偿效应剂量补偿效应：在：在XY型性别决定机制型性别决定机制的生物中，使性连锁基因在两种性别中有的生物中，使性连锁基因在两种性别中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。相等或近乎相等的有效剂
3、量的遗传效应。进一步研究发现，进一步研究发现，所有哺乳类雌所有哺乳类雌体细胞中体细胞中都都有一条有一条这种表现的这种表现的X染色体；染色体；Lyon假说假说：1961年由年由Lyon提出，又称单个活性提出，又称单个活性X染色体假说。染色体假说。1正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中染色体中只有一条有活性只有一条有活性(activation X,Xa)，另一条失活，另一条失活(inactivation X,Xi)；2失活是随机的；失活是随机的；3失活发生在胚胎发育的早期；失活发生在胚胎发育的早期；4杂合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体。杂合体雌性在伴性基因的
4、作用上是嵌合体。人类正常的男女体细胞中，分别有人类正常的男女体细胞中，分别有XY和和XX性染色体，性染色体，女性女性的两条的两条X染色体中，染色体中，在间期也有在间期也有一条一条不表现活性而保持不表现活性而保持浓缩浓缩状态，状态，因此易于用适当的染料加以显示，成为便于因此易于用适当的染料加以显示，成为便于观察的观察的X-染色质（染色质（Barr小体）。小体）。在个别的雌或雄体中，有多于在个别的雌或雄体中，有多于2条条X染色染色体时，在间期细胞内除一条外，其余都将形体时，在间期细胞内除一条外，其余都将形成成X-染色质，以维持剂量补偿。染色质，以维持剂量补偿。X-染色质的形态染色质的形态：1.结构
5、致密的浓染小体，轮廓清楚；结构致密的浓染小体，轮廓清楚；2.大小约大小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠左右，常附着于核膜边缘或靠近内侧；近内侧；3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形及双球形；形及双球形；MALE FEMALE 三三.实验材料实验材料 1.女性女性口腔颊部黏膜细胞口腔颊部黏膜细胞 2.毛发根部细胞毛发根部细胞 四四.实验仪器及试剂实验仪器及试剂 仪器仪器:显微镜显微镜 试剂试剂:1M盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红 五五.实验方法和步骤实验方法和步骤 1.口腔颊部黏膜细胞的观察：口腔颊部黏膜细胞的观察：a.刮取口腔黏膜细胞
6、刮取口腔黏膜细胞:漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞，原位刮细胞，原位刮2-3次，分别涂抹在干净载片上，每次，分别涂抹在干净载片上，每次可涂次可涂1-2片，涂抹范围约盖片大小片，涂抹范围约盖片大小(男性做对照男性做对照)。b.染色染色:待稍干后，滴加待稍干后，滴加1-2滴改良苯酚品红，染色滴改良苯酚品红，染色10-15分分钟。钟。c.压片压片:加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。d.镜检镜检:镜下检测典型的可数细胞，标准是：镜下检测典型的可数细胞，标准是：核质呈网状或细颗粒状分布；核质呈网状或细颗粒状分布
7、；核膜清晰、无缺损；核膜清晰、无缺损；染色适度；染色适度；周围无杂质。周围无杂质。2毛发根部细胞的观察：毛发根部细胞的观察：拔取一根带有毛根的头发，自基部截取拔取一根带有毛根的头发，自基部截取2cm左右置载片上，再加一滴左右置载片上，再加一滴1M盐酸解离盐酸解离5-7分钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水分钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水清洗清洗3-5次，滴加一滴染液染次，滴加一滴染液染10-15分钟，吸取分钟，吸取多余的染料，再覆以盖片，隔一片吸水纸用多余的染料，再覆以盖片，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。手指轻度加压后镜检。六六.实验结果实验结果 1.观察观察50个女性可数细胞，同时
8、观察个女性可数细胞，同时观察50个男个男性者为对照，分别计算显示性者为对照，分别计算显示X-染色质细胞染色质细胞所占的百分比。所占的百分比。2.观察中选绘观察中选绘4-5个典型细胞，示明个典型细胞，示明X-染色质染色质的形态部位。的形态部位。Barr小体小体 Barr小体小体 Detection of sex chromatin by Thionin stain 400 七七.实验分析与讨论实验分析与讨论 1.分析此次实验成败的原因。分析此次实验成败的原因。2.此次实验有哪些地方可以改进此次实验有哪些地方可以改进?八八.思考题思考题 为什么雄性的一条为什么雄性的一条X-染色体不浓缩？染色体不浓缩？它的合理的解释是什么？它的遗传学意义它的合理的解释是什么？它的遗传学意义是什么？是什么？九九.参考文献参考文献 1.遗传学实验遗传学实验 高等教育出版社高等教育出版社 2.遗传学实验方法和技术遗传学实验方法和技术 高等教育出版社高等教育出版社