1、综合实训三综合实训三 水中菌落总数及大肠菌群数的测定水中菌落总数及大肠菌群数的测定 任务二任务二 水中大肠菌群数的测定水中大肠菌群数的测定 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 水中总大肠菌群的测定水中总大肠菌群的测定 检验依据：GB/T5750.12-2006 方法：多管发酵法 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 总大肠菌群总大肠菌群 总大肠菌群 3737、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏、发酵乳糖、需氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢杆菌阴性、无芽孢杆菌 粪大肠菌群（耐热粪大肠菌群（耐热-）总大肠菌群 非粪大肠菌群非粪大肠菌群 EC肉汤肉汤 44.5士士0.5 项目九 综合实训-水中总
2、大肠菌群的测定 总大肠菌群总大肠菌群 MPN（most probable number）最可能数或最近似数最可能数或最近似数 总大肠菌群MPN 100mL100mL水样中所含的总大肠菌群的最近似数水样中所含的总大肠菌群的最近似数或最可能数或最可能数 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 指示菌（总大肠菌群）指示菌（总大肠菌群）指示菌应具有的条件 和肠道致病菌的来源相同和肠道致病菌的来源相同 在外界环境中的生存时间长在外界环境中的生存时间长 检验方法比较简便检验方法比较简便 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验目标实验目标 掌握生活饮用水总大肠菌群的测定方法 掌握水源水总大肠菌群的测定
3、方法 判定水被肠道致病菌污染的程度和水的卫生质量 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验内容实验内容 1 1 乳糖发酵试验乳糖发酵试验 4 4 证实试验证实试验 5 5 结果分析与报告结果分析与报告 1 1 培养基制备培养基制备 2 2 乳糖发酵试验乳糖发酵试验 3 3 分离培养分离培养 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验器材实验器材 水样 生活饮用水、水源水生活饮用水、水源水 培养基 乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基 试剂 革兰氏染色液、稀释剂等革兰氏染色液、稀释剂等 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 实验器材实验器材 其他 无菌工作台、
4、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、无菌工作台、酒精灯、稀释液、灭菌吸管、灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒灭菌试管、小倒管、试管架、接种环、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香温培养箱、高压蒸汽灭菌器、载玻片、香柏油、平皿、天平、电炉等柏油、平皿、天平、电炉等 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 培养基制备培养基制备 乳糖发酵管 双料管双料管 单料管单料管 伊红美兰平板 放置放置小倒小倒管并管并排气排气 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 检验程序检验程序 生活饮用水接种 乳糖发酵试验 分离培养 证实试验 结果报告 水源水稀释与接种 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一、乳糖发酵（初
5、发酵）试验一、乳糖发酵（初发酵）试验 自来水 直接接种直接接种10mL10mL水样于双料培养基，每个水水样于双料培养基，每个水样共接种样共接种5 5管管 水源水 加大稀释度，每个稀释度接种加大稀释度，每个稀释度接种5 5管，每个管，每个水样共接种水样共接种1515管管 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 各10ml 1ml 各1ml 水样 1:10稀释水 各1ml 乳糖发酵试验 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一、乳糖发酵（初发酵）试验一、乳糖发酵（初发酵）试验 培养 3636士士ll 24h24h士士2h2h 观察产酸产气情况 不产酸产气不产酸产气 产酸产气产酸产气 项目九 综合
6、实训-水中总大肠菌群的测定 第二天第二天 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 二、分离培养二、分离培养 产酸产气的发酵管分别转种EMB平板（分区划线）3636士士ll 24h24h士士2h2h 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 第三天第三天 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 三、证实试验（复发酵试验）三、证实试验（复发酵试验）观察EMB平板菌落形态 深紫黑色、具有金属光深紫黑色、具有金属光泽的菌落泽的菌落 紫黑色、不带或略带金紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落属光泽的菌落 淡紫红色、中心较深的淡紫红色、中心较深的菌落菌落 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 一半进行涂片、染色
7、、镜检 另一半进行接种（证实试验用）项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 三、证实试验（复发酵试验）三、证实试验（复发酵试验）只有染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌才接种乳糖蛋白胨管 3636士士ll 24h24h士士2h2h 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 第四天第四天 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告四、结果报告 观察乳糖发酵管产气情况 产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在 查MPN 检索表 根据证实为总大肠菌群阳性的管数根据证实为总大肠菌群阳性的管数 报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）项目九 综合实训-水中总大肠
8、菌群的测定 四、结果报告四、结果报告 5管法结果见表1，15管法结果见表2 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告四、结果报告 表表1 1 用用5 5份份10mL10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN)MPN)5个10mL管中阳性管数 最可能数（MPN）0 16.0 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告 表表2 2 总大肠菌群总大肠菌群MPNMPN检索表检索表(部分）部分）（总接种量（总接种量55.5mL55.5mL，其中，其中5 5份份10mL10mL水样，水样，5 5份份1mL1mL水样，水样，5 5
9、份份0.1mL0.1mL水样）水样）接种量接种量/mL/mL 总大肠总大肠菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL)100mL)接种量接种量/mL/mL 总大肠总大肠菌群菌群/(MPN/(MPN/100mL)100mL)10ml10ml管管 1ml1ml管管 0.1ml0.1ml管管 10ml10ml管管 1ml1ml管管 0.1ml0.1ml管管 0 0 0 2 1 0 0 2 0 0 1 2 1 0 1 4 0 0 2 4 1 0 2 6 0 0 3 5 1 0 3 8 0 0 4 7 1 0 4 10 0 0 5 9 1 0 5 12 项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告
10、 稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数 表表2 2采用采用3 3个稀释度（个稀释度（10mL10mL、1mL 1mL 和和0.1mL),0.1mL),每每个稀释度个稀释度5 5管管 表表2 2内所列接种量如改用内所列接种量如改用100mL100mL、10mL10mL和和1mL1mL时，时，表内数字应相应降低表内数字应相应降低1010倍；如改为倍；如改为1mL1mL、0.1mL0.1mL和和 0.01mL0.01mL时时,则表内数字应相应增加则表内数字应相应增加1010倍。其余可类推。倍。其余可类推。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 四、结果报告四、结果报告 所有乳糖发酵管均阴性，可报告总大
11、肠菌群未检出。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 注意事项注意事项 1.无菌操作。2.每递增稀释一次，即换一支1mL灭菌吸管。3.培养基使用前应先检查培养基内小倒管中有无气泡。4.接种量在1ml及以下时用单料培养基，接种量超过1ml时用双料培养基。5.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 习题作业习题作业 1.判断食品是否被肠道致病菌所污染及其污染程度时，常用总大肠菌群作为指示菌来表示，该指示菌应具备的条件有哪些。2.总大肠菌群和粪大肠菌群有什么区别？如何区分粪大肠菌群和非粪大肠菌群。项目九 综合实训-水中总大肠菌群的测定 习题作业习题作业 3.检样从开始稀释到接种所用时间不宜超过15min，为什么？4.单料和双料培养基有什么区别？什么时候使用双料培养基？5.生活饮用水的菌落总数、总大肠菌群标准是多少？畜禽饮用水总大肠菌群标准是多少？