1、关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 红细胞血型理论与实验技术红细胞血型理论与实验技术 长春博德生物技术有限责任公司 童 军 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 主要内容主要内容 红细胞血型相容性检测红细胞血型相容性检测 红细胞血型血清学检测方法红细胞血型血清学检测方法 红细胞血型系统介绍红细胞血型系统介绍 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志红细胞血型抗原为同种异型抗原，是人类遗传多态性标志之一。之一。自二十世纪初自二十世纪初LandsteinerLandsteiner发现发现ABOABO血型以来，已陆续发现血型以来，已陆续发现了许多新的红细胞
2、血型抗原。国际输血协会（了许多新的红细胞血型抗原。国际输血协会（ISBT ISBT）20082008年报告中已确认了年报告中已确认了308308个红细胞血型抗原。并将其分为血型个红细胞血型抗原。并将其分为血型系统、血型集合和血型系列。系统、血型集合和血型系列。输血关系最大的是输血关系最大的是ABOABO及及RhRh血型系统血型系统。人类红细胞血型人类红细胞血型 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 研研 究究 背背 景景 血型系统血型系统 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 血型系统血型系统 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABO血型发现历史血型发现历史 19011901年，年，Landst
3、einerLandsteiner把几份血液标本中把几份血液标本中的红细胞分别与他人的血清交叉混合后，的红细胞分别与他人的血清交叉混合后，发现有的血液之间发生凝集反应，有的则发现有的血液之间发生凝集反应，有的则不发生。将人的红细胞血型分为不发生。将人的红细胞血型分为A A、B B、C(C(后称为后称为O)O)三种类型。三种类型。19021902年他的学生年他的学生DecastelloDecastello及及SturliSturli发发现了第现了第4 4种血型，即种血型，即ABAB型。型。ABOABO血型的发现血型的发现，开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪，开启了血液免疫学及免疫遗传学的新纪元。元
4、。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABH抗原的生化结构抗原的生化结构 编编 码码 岩藻糖转移酶岩藻糖转移酶 添加岩藻糖到添加岩藻糖到 血型多聚糖前体的血型多聚糖前体的终端半乳糖上终端半乳糖上 特异性特异性H H抗原抗原 形成形成 编编 码码 A A或或B B转移酶转移酶 构建完成构建完成 A A或或B B抗原抗原 H H基因基因 ABOABO基因基因 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABO抗原的发育抗原的发育 在胚胎早期在胚胎早期A A和和B B抗原就开始产生。但到抗原就开始产生。但到 出生时，还没有完全发育，与抗
5、出生时，还没有完全发育，与抗A A和抗和抗B B试剂试剂 血清反应比成人弱，血清反应比成人弱，2 24 4岁时才能充分表现出岁时才能充分表现出 抗原性。抗原性。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABO抗体的发育抗体的发育 出生时，正常的抗出生时，正常的抗A A和抗和抗B B还没产生或较还没产生或较弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一弱，到三个月时，反应基本上与成年人的一样。样。5 51010岁时，抗体的产生达到高峰，具岁时，抗体的产生达到高峰，具有较高效价。有较高效价。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 孟买型与类孟买型孟买型与类孟买型 孟买型孟买型 B
6、ombay phenotypeBombay phenotype 红细胞上没有红细胞上没有A A、B B、H H 抗原，血清中存在抗原，血清中存在 抗抗-A A、抗、抗-B B 和抗和抗-H H 抗体。抗体。表型标记为：表型标记为：OhOOhO、OhAOhA、OhBOhB、OhABOhAB 类孟买型类孟买型 BombayBombay-like phenotype like phenotype 表型标记为表型标记为:Ah:Ah、BhBh、ABhABh 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABO血型的亚型血型的亚型 ABOABO亚型亚型 （subgroups)subgroups)，也称变异型，红细胞
7、同属于一种血，也称变异型，红细胞同属于一种血型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于型抗原，但在结构上有一定的差异，性能也不完全相同。由于抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时抗原弱，在用已知抗体检测抗原和用已知抗原检测被检血清时不符合血清学反应特征。不符合血清学反应特征。A A亚型：亚型：A1A1和和A2A2是血型血清学方法确定的最重要的是血型血清学方法确定的最重要的A A型红细胞亚型红细胞亚型，一般认为有两种抗原型，一般认为有两种抗原A A和和A1A1，A1A1型人红细胞上有这两种抗型人红细胞上有这两种抗原，原，A2A2型人红细胞只有型人红细胞只有A A抗原。
8、亚洲人中抗原。亚洲人中A1A1型约占型约占27%27%；A2A2型人型人稀少。其它稀少。其它A A亚型：亚型：A3A3、AxAx、AendAend、AmAm、AyAy和和AelAel。B B亚型一般比亚型一般比A A亚型更少：亚型更少：B3B3、BxBx、BmBm和和BelBel 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 几种几种A亚型红细胞上的亚型红细胞上的A抗原抗原 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 A1与与A2的区分的区分 A1A1型红细胞：型红细胞：A A抗原和抗原和A1A1抗原抗原 A2A2型红细胞：型红细胞：A A抗原抗原 双花扁豆（双花扁豆（Dolichos biflous)Doli
9、chos biflous)种子提取液种子提取液 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 Rh血型系统血型系统 19391939LevineLevine及及StetsonStetson在一個新生在一個新生儿儿溶血疾病的溶血疾病的母母亲亲的血清中，的血清中，发现发现可凝集可凝集85%85%白种人白种人的的红红血球抗血球抗体体。19401940LandsteinerLandsteiner及及WienerWiener以以恒恒河猴河猴(Rhesus(Rhesus monkey)monkey)的的红红血球免疫兔子血球免疫兔子产产生抗生抗体体，也可凝集，也可凝集85%85%白种人白种人的的红红血球。因此命名血球
10、。因此命名为为RhRh抗原。抗原。（恒（恒河猴河猴LWLW抗原）抗原）关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 RhRh血型系统抗原血型系统抗原 RHRH血型系统抗原血型系统抗原4646个，其中个，其中D D、C C、E E、c c、e e为主要的血为主要的血型抗原。型抗原。D D抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞抗原：只存在与人红细胞膜，不存在与其它组织细胞中，体液分泌中也无中，体液分泌中也无D D抗原。抗原。D D抗原分类：根据抗原分类：根据D D抗原的数量和质量不同以及抗原性不抗原的数量和质量不同以及抗原性不同，将同，将D D抗原分类为抗原分类为5 5种：常见种：常见D D抗原、弱
11、抗原、弱D D、不完全型、不完全型D D、不完全型弱不完全型弱D D及增强及增强D D。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 RhRh血型系统抗原频率血型系统抗原频率 D antigen D antigen 85%85%C antigen C antigen 70%70%c antigen c antigen 80%80%E antigen E antigen 30%30%e antigen e antigen 98%98%关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 RhRh血型系统抗体血型系统抗体 RhRh抗体主要通过输血和妊娠免疫产生。一般在初次免抗体主要通过输血和妊娠免疫产生。一般在初次免疫后疫后
12、2 2-6 6个月内出现。对个月内出现。对Rh(D)Rh(D)初次免疫的人，经再次初次免疫的人，经再次免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。免疫后，在三周内抗体浓度可达最高峰。同种异型抗体：同种异型抗体：RhDRhD阴性人输用阴性人输用D D阳性血而产生的抗阳性血而产生的抗-D D抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是抗体。绝大部分人血清同种异体抗体都是IgGIgG类抗体，类抗体，多数在盐水介质中不发生直接凝集。多数在盐水介质中不发生直接凝集。单克隆抗单克隆抗-D D：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。：人鼠或人人淋巴细胞杂交瘤制备而成。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 红细胞血型相容性检测红细
13、胞血型相容性检测 交叉配血交叉配血 血型检测血型检测 抗体筛检及鉴定抗体筛检及鉴定 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 红细胞血型血清学反应红细胞血型血清学反应 已知红细胞：已知红细胞：反定型红细胞反定型红细胞 不规则抗体检测红细胞不规则抗体检测红细胞 谱红细胞谱红细胞 已知抗体：已知抗体：抗抗A A 抗抗B B 抗抗D D 抗抗M M、抗、抗N N AHGAHG 用已知的检测未知的用已知的检测未知的 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 血型检测血型检测 血型检测：确定待检者的血型检测：确定待检者的ABOABO、RhDRhD血型。血型。ABOABO血型定型：血型定型：正定型：是用已知特异性抗体
14、来测定红细胞上有无相正定型：是用已知特异性抗体来测定红细胞上有无相应的抗原。应的抗原。反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相反定型：是用已知抗原的红细胞来测定血清中有无相应的抗体。应的抗体。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABOABO血型定型血型定型 抗A 抗B A细胞 B细胞 结果(试剂)(待检者)A B 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 ABOABO血型定型血型定型 正定型正定型 反定型反定型 血血型型 比例比例%（亚洲）（亚洲）抗抗-A A 抗抗-B B A A细胞细胞 B B细胞细胞 -+O O 4343 +-ABAB 5 5 +-+A A 2727 -+-B B 252
15、5 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 RhDRhD抗原检测抗原检测 抗抗D D 结果结果 (试剂试剂)(待检者待检者)D D阳性阳性 关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 我国临床常规我国临床常规RhDRhD血型的检测，应用不识别血型的检测，应用不识别D DVIVI型型D D抗原的抗原的单克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为单克隆抗体。对不出现凝集的标本判断为RhDRhD阴性；对出阴性；对出现弱反应（凝集反应强度现弱反应（凝集反应强度2+2+）的病人（受血者），将其）的病人（受血者），将其视为视为RhDRhD阴性，只能输用阴性，只能输用RhDRhD阴性的红细胞；对弱反应的献阴性的红细胞；对弱反应
16、的献血者视为血者视为RhDRhD阳性。阳性。初筛初筛RhDRhD阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其阴性和弱反应的标本，应该进一步研究确定其RhDRhD表型，应用能够识别表型，应用能够识别D DVIVI型的单克隆抗体；同时进行吸收型的单克隆抗体；同时进行吸收放散实验，以排除放散实验，以排除D Delel型。型。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 亚型鉴定方法亚型鉴定方法 凝集抑制试验：可溶性抗原与相应已知抗体结合能够全凝集抑制试验：可溶性抗原与相应已知抗体结合能够全部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异部或部分抑制抗体活性，通过此试验可确定抗原的特异性。又称唾液分泌试验。性。又称唾液分泌试验。吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集吸收放散试验：抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时，或致敏，但这种结合是可逆的，如改变某些物理条件时，抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法抗体又可以从结合的红细胞上解脱下来，这种试验方法叫做吸收放散试验。叫做吸收放散试验。关爱生命关爱生命 呵护健康呵护健康 放散技术放散技术 关爱