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制备了伤寒Vi多糖疫苗.ppt

1、 细菌性疫苗细菌性疫苗 杨丽华杨丽华 20112011年年3 3月月 1.1.死疫苗死疫苗 2.2.活疫苗活疫苗 3.3.蛋白类疫苗蛋白类疫苗 4.4.多糖类疫苗多糖类疫苗 5.5.多糖蛋白结合疫苗多糖蛋白结合疫苗 细菌性疫苗细菌性疫苗 细菌性疫苗种类细菌性疫苗种类 2 3 白喉白喉 破伤风破伤风 百日咳百日咳 疫苗疫苗 4 5 1 霍乱霍乱 伤寒伤寒 副伤寒副伤寒 百日咳百日咳 疫苗疫苗 卡介苗卡介苗 鼠疫鼠疫 布氏杆菌布氏杆菌 伤寒伤寒 痢疾痢疾 霍乱霍乱 疫苗疫苗 脑膜炎脑膜炎 伤寒伤寒vivi 肺炎肺炎 流感嗜流感嗜 血杆菌血杆菌 多糖疫多糖疫苗苗 ACAC脑膜脑膜炎球菌炎球菌多糖结多

2、糖结合疫苗合疫苗HIBHIB 脑膜炎脑膜炎 伤寒伤寒vivi 流感嗜流感嗜 血杆菌血杆菌 多糖疫多糖疫苗苗 百日咳疫苗百日咳疫苗 伤寒疫苗伤寒疫苗 结合疫苗结合疫苗 白喉疫苗白喉疫苗 白喉疫苗白喉疫苗 一、白喉概述一、白喉概述 二、病原学二、病原学 三、白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学三、白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学 四、白喉毒素四、白喉毒素 五、白喉类毒素五、白喉类毒素 六、生产工艺六、生产工艺 七、类毒素的质量检定七、类毒素的质量检定 外毒素外毒素 对神经对神经 系统损系统损 害害 细菌产生细菌产生 的外毒素的外毒素 对心肌损对心肌损 害害 外毒素外毒素 对肾脏对肾脏 损害损害 白

3、喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。白喉曾经是对儿童威胁非常大的传染病。它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病它是由白喉棒状杆菌引起的一种呼吸道传染病 主要临床表现为上呼吸道发炎主要临床表现为上呼吸道发炎,常常表现在咽部,有时在鼻腔、喉部和气管,常常表现在咽部,有时在鼻腔、喉部和气管,白喉疫苗白喉疫苗 白喉流行特点白喉流行特点 1.1.传染原:白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌传染原:白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌 没有中间宿主,病人及带菌者是唯没有中间宿主,病人及带菌者是唯 一的传染原。一的传染原。2.2.传播途径:主要是呼吸道飞沫传播,也可通传播途径:主要是呼吸道飞沫传播,也可通 过被污的器具

4、和食物传播。过被污的器具和食物传播。3.3.易感人群:人对白喉普遍易感,新生儿易感人群:人对白喉普遍易感,新生儿1 1岁时岁时 白喉易感性达高峰。白喉易感性达高峰。二、病原学二、病原学 1.1.细菌形态细菌形态 白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈 棒状,有着色较深的异染颗粒,革兰棒状,有着色较深的异染颗粒,革兰 氏染色阳性,白喉杆菌无动力,无荚氏染色阳性,白喉杆菌无动力,无荚 膜,不形成芽孢。膜,不形成芽孢。白喉棒状杆菌显微镜下形态白喉棒状杆菌显微镜下形态 白喉棒状杆菌显微镜下形态白喉棒状杆菌显微镜下形态 2.2.培养特性培养特性 白喉杆菌是需氧菌,最适温度为白喉

5、杆菌是需氧菌,最适温度为34343535。能分解。能分解 葡萄糖、麦芽糖和糊精,产酸不产气,能还原硝酸葡萄糖、麦芽糖和糊精,产酸不产气,能还原硝酸 盐,不产生吲哚,不消化蛋白。盐,不产生吲哚,不消化蛋白。3.3.抵抗力抵抗力 .白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感,对青霉素和白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感,对青霉素和 红霉素极敏感。红霉素极敏感。.对消毒剂抵抗力弱,对消毒剂抵抗力弱,3 3苯酚苯酚10min10min可将该菌杀死可将该菌杀死 .不耐热,不耐热,58 10mi58 10mi或或100 1min100 1min即可被杀死。即可被杀死。二、病原学二、病原学 三、白喉杆菌的致病力及毒素产生遗

6、传学三、白喉杆菌的致病力及毒素产生遗传学 1.1.致病力致病力 自然界中动物不感染白喉,只能在敏感动物中造成自然界中动物不感染白喉,只能在敏感动物中造成 人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验 室常用的动物是家室常用的动物是家兔、豚鼠和兔、豚鼠和NIHNIH小鼠小鼠。2.2.毒素产生遗传学毒素产生遗传学 白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的。白喉是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的。白喉杆菌的产毒基因是由白喉杆菌的产毒基因是由嗜菌体携带。嗜菌体携带。嗜菌嗜菌 体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体DNADNA与细菌与细菌DNA

7、DNA整合,整合,形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力(形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力(PW8PW8株目前株目前 用于白喉类毒素生产用于白喉类毒素生产)。四、白喉毒素四、白喉毒素 1.1.白喉外毒素为棒状杆菌白喉外毒素为棒状杆菌-噬菌体噬菌体toxtox基因表达基因表达 产物产物,可与细胞表面的特异性受体结合可与细胞表面的特异性受体结合,干扰蛋干扰蛋 白质的合成,对人和动物都引起致死性毒性,白质的合成,对人和动物都引起致死性毒性,如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均 受到损害。受到损害。2.2.白喉毒素是单一多肽,由白喉毒素是单一多肽,由560560个

8、氨基酸组成,个氨基酸组成,分子量为分子量为62kDa62kDa,等电点等电点pH4.1pH4.1,在,在pH6pH6时加热时加热5555 很快失活。很快失活。3.3.通过物理和化学方法将其纯化。通过物理和化学方法将其纯化。细细 菌菌 毒毒 素素 甲醛甲醛 类毒素类毒素 毒素经毒素经甲醛处理后去除毒性甲醛处理后去除毒性 而保留免疫原性而保留免疫原性 五、白喉类毒素五、白喉类毒素 甲醛甲醛 浓度浓度 温度温度 PH 脱毒脱毒 影响脱毒因素影响脱毒因素 温度、温度、pHpH和甲醛浓度等均影响脱毒效果和甲醛浓度等均影响脱毒效果 .温度越高脱毒越快,超过温度越高脱毒越快,超过4040影响抗原性,影响抗原

9、性,一般一般373738 38。.在酸性时脱毒较慢,但游离甲醛含量高,在在酸性时脱毒较慢,但游离甲醛含量高,在 保存过程中由于甲醛的继续作用,可导致脱保存过程中由于甲醛的继续作用,可导致脱 毒过甚,并影响毒素的稳定性;在碱性时脱毒过甚,并影响毒素的稳定性;在碱性时脱 毒快,但抗原性损失较大,一般采用毒快,但抗原性损失较大,一般采用弱碱性。弱碱性。.甲醛浓度大则脱毒快,但抗原损失大。甲醛浓度大则脱毒快,但抗原损失大。温度升高温度升高 游离甲醛的浓度低游离甲醛的浓度低 毒素纯度高毒素纯度高 易发生毒易发生毒性逆转性逆转 提高甲醛浓度、脱毒提高甲醛浓度、脱毒pHpH、脱毒温度和延长脱毒时间;脱毒温度

10、和延长脱毒时间;增加非蛋白氮含量(于精制增加非蛋白氮含量(于精制 毒素中加入赖氨酸、精氨酸毒素中加入赖氨酸、精氨酸等)等)防止或减防止或减轻毒性逆轻毒性逆转转 类毒素的毒性逆转类毒素的毒性逆转 六、白喉疫苗工艺流程六、白喉疫苗工艺流程 菌种(菌种(PW8PW8株株 )传代扩增传代扩增 3 34 4代代 发酵罐培养发酵罐培养 34343535培养对数生长培养对数生长 末期收获,甲苯杀菌。末期收获,甲苯杀菌。离心去菌体离心去菌体 收集清液收集清液 超滤浓缩超滤浓缩 硫酸铵两段盐析硫酸铵两段盐析 除盐除菌除盐除菌 氨离子及无菌检查氨离子及无菌检查 脱毒脱毒 甲醛液甲醛液 37 37 脱毒试验(家兔)

11、脱毒试验(家兔)原液原液 检定(浓度、纯度、安全等)检定(浓度、纯度、安全等)Al(OH)Al(OH)3 3吸附吸附 成品成品 检定检定(安全、效价等)(安全、效价等)七、类毒素的质量检定七、类毒素的质量检定 1 1 絮状单位(絮状单位(LfLf)是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位,只能代表是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位,只能代表“量量”而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定而不能完全代表活性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定类毒素的絮状单位。类毒素的絮状单位。絮状单位测定絮状单位测定 毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度反

12、应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合,产生肉反应时间等条件下可在试管中发生抗原抗体结合,产生肉眼可见的絮状凝集反应,眼可见的絮状凝集反应,根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位(根据抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位(LfLf)值。)值。2 2 纯度:纯度:1500Lf/mgPN1500Lf/mgPN 3 3 安全性试验(豚鼠)安全性试验(豚鼠)七、类毒素的质量检定七、类毒素的质量检定 4 4效价测定效价测定 类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗类毒素刺激机体产生特异性抗体的免疫应答和对相应抗 体的特异性结合反应。体的特异性结合反应。小鼠小鼠VeroVero细胞

13、法细胞法 将标准和待检类毒素将标准和待检类毒素2 2倍稀释倍稀释3 35 5个稀释度,皮下免疫个稀释度,皮下免疫N N IHIH小鼠小鼠8 8只(只(0.5ml/0.5ml/只只),免疫,免疫5 5周采血,根据周采血,根据verovero细胞细胞 生长情况,以标准品的效价为标准,用平行线分析法进生长情况,以标准品的效价为标准,用平行线分析法进 行结果计算。行结果计算。豚鼠毒素攻击法豚鼠毒素攻击法 皮下免疫豚鼠皮下免疫豚鼠1010只(只(1ml/1ml/只),免疫只),免疫4 4周后用毒素攻击,周后用毒素攻击,观察观察5 5天根据存活率以标准品的效价为标准,用平行线分天根据存活率以标准品的效价为

14、标准,用平行线分 析法进行结果计算。析法进行结果计算。百日咳疫苗百日咳疫苗 一、百日咳概述一、百日咳概述 二、病原学二、病原学 三、百日咳疫苗发展简史三、百日咳疫苗发展简史 四、无细胞百日咳疫苗四、无细胞百日咳疫苗 、生产工艺流程、生产工艺流程 、质量检定、质量检定、APVAPV的效果的效果 、接种不良反应、接种不良反应 急性脑炎、急性脑炎、呕吐、痉挛呕吐、痉挛和昏迷,死和昏迷,死亡或脑损伤亡或脑损伤 并发症肺炎并发症肺炎 形成肺气肿形成肺气肿 肺不张,甚肺不张,甚 至死亡。至死亡。营养缺营养缺 乏症乏症 百日咳是对儿童威胁非常大的传染病,百日咳是对儿童威胁非常大的传染病,它是由百日咳杆菌引起

15、的一种呼吸道传染病。它是由百日咳杆菌引起的一种呼吸道传染病。典型症状为突然阵发性痉咳,并带有吸气性尾典型症状为突然阵发性痉咳,并带有吸气性尾 声或伴有呕吐,可持续数月。声或伴有呕吐,可持续数月。百日咳概述百日咳概述 百日咳流行特点百日咳流行特点 1.1.传染原:人是百日咳唯一的天然宿主百日咳传染原:人是百日咳唯一的天然宿主百日咳 病人是传染原。病人是传染原。2.2.传播途径:主要是呼吸道飞沫传播,也可通传播途径:主要是呼吸道飞沫传播,也可通 过被污的器具和食物传播。过被污的器具和食物传播。3.3.易感人群:主要传染对象是易感人群:主要传染对象是6 6岁以下儿童,岁以下儿童,1 1 岁以内婴幼儿

16、发病率岁以内婴幼儿发病率50%50%。二、病原学二、病原学 细菌形态细菌形态 百日咳菌呈革兰氏染色阴性,短杆状或椭圆形百日咳菌呈革兰氏染色阴性,短杆状或椭圆形 生长特性生长特性 1.1.百日咳菌可分四种相变,百日咳菌可分四种相变,相菌毒力最强有免相菌毒力最强有免 疫原性疫原性;相菌毒力消失,无免疫原性;相菌毒力消失,无免疫原性;相菌介于相菌介于 相之间。相之间。2.2.百日咳菌是需氧菌,最适温度为百日咳菌是需氧菌,最适温度为353536,36,最最 适适pH6.8pH6.8-7.07.0。3.3.不发酵任何糖类、不分解糊精,尿素盐,不液不发酵任何糖类、不分解糊精,尿素盐,不液 化明胶不产生吲哚,不利用枸橼酸盐。化明胶不产生吲哚,不利用枸橼酸盐。作用作用 PTPT FHAFHA AggsAggs PRNPRN ACAC TCTTCT HLTHLT 呼吸道粘附作用呼吸道粘附作用 -细胞毒性细胞毒性 免疫原性免疫原性 -1 1百日咳百日咳相菌有两大类抗原相菌有两大类抗原 菌体菌体O O抗原抗原 表面表面K K抗原(荚膜物质)抗原(荚膜物质)2 2百日咳菌可产生百日咳菌可产生 外毒素外毒素(P

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