1、医院消毒灭菌的效果监测医院消毒灭菌的效果监测 河北医科大学第二医院河北医科大学第二医院 史利克史利克 一一、前言前言：1.医院消毒是预防医院内感染的医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一重要措施之一 2.消毒效果的监测是评价消毒效果的监测是评价 3.消毒设备运转是否正常消毒设备运转是否正常 4.消毒药剂是否有效消毒药剂是否有效 5.消毒方法是否合理消毒方法是否合理 6.消毒效果是否达标的唯一手段消毒效果是否达标的唯一手段 医院消毒效果监测时需遵循以下原则医院消毒效果监测时需遵循以下原则 监测人员需经过专业培训监测人员需经过专业培训，掌握一定的消毒知识；掌握一定的消毒知识；熟悉消毒设备和药剂性能
2、熟悉消毒设备和药剂性能;具备熟练的检验技能具备熟练的检验技能;选择合理的采样时间选择合理的采样时间(消毒后消毒后、使用前使用前);遵循严格的无菌操作遵循严格的无菌操作。二、热力灭菌效果的监测方法二、热力灭菌效果的监测方法 （一一）压力蒸汽灭菌效果监测方法压力蒸汽灭菌效果监测方法 1 1、化学监测法化学监测法:化学指示卡化学指示卡(管管)监测方法监测方法 既能指示蒸汽温度既能指示蒸汽温度，又能指示温度持又能指示温度持续时间续时间 化学指示管化学指示管(卡卡)放入放入大包和难以消毒大包和难以消毒部位部位的的物品包中央物品包中央 （旧版消毒技术规范是放入每一待灭旧版消毒技术规范是放入每一待灭菌的物品
3、包中央菌的物品包中央）化学指示胶带监测法：化学指示胶带监测法：将化学指示胶带粘贴于每将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外一待灭菌物品包外 BD试验试验 对预真空和脉动真空压力蒸汽灭对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次菌，每日进行一次B-D试验。试验。设计原理设计原理 a.使实验包成为灭菌器内残留空气使实验包成为灭菌器内残留空气的聚焦点，它相对较大的面积和可透气的聚焦点，它相对较大的面积和可透气布料易吸附、“捕捉”残留空气。布料易吸附、“捕捉”残留空气。b.真空测试图上的化学试剂对残留真空测试图上的化学试剂对残留空气具有敏感性。空气具有敏感性。BD试验方法试验方法 将测试图置于实验包中
4、间位将测试图置于实验包中间位置；置；然后，将实验包放于灭菌器然后，将实验包放于灭菌器室内排气口处，关闭柜门；室内排气口处，关闭柜门；进行进行1345分钟灭菌处理分钟灭菌处理完毕，打开柜门，观察测试结果。完毕，打开柜门，观察测试结果。BD实验包的制备实验包的制备 实验包由实验包由4650cm8090cm纯棉纯棉布巾组成，布巾先横折为三层，再纵折布巾组成，布巾先横折为三层，再纵折成六层。将折好的布巾一条摞一条至成六层。将折好的布巾一条摞一条至25cm高度。摞放时，各层布巾按折叠侧高度。摞放时，各层布巾按折叠侧左右交替摆好，以使两侧厚度相等。布左右交替摆好，以使两侧厚度相等。布巾摆好后，将真空测试图
5、夹放于中央布巾摆好后，将真空测试图夹放于中央布巾之间，然后用布包巾包好，外面用化巾之间，然后用布包巾包好，外面用化学指示胶带固定好，成为一个实验包。学指示胶带固定好，成为一个实验包。整个实验包的大小高约整个实验包的大小高约25cm，宽约宽约23cm，长约长约27cm，重约重约5kg。BD实验条件 实验规定在实验规定在134蒸汽条件蒸汽条件下，使用下，使用3.5分钟观察结果，最长不分钟观察结果，最长不超超4分钟。分钟。测试图必须夹放于布包的中测试图必须夹放于布包的中央层位置。央层位置。实验包放在灭菌器底层，靠实验包放在灭菌器底层，靠近柜门与排气口处。近柜门与排气口处。实验在每天第一次灭菌前空实验
6、在每天第一次灭菌前空锅进行。锅进行。结果判断结果判断 结果判断结果判断 合格：合格：测试图变黑且均匀，即中央部测试图变黑且均匀，即中央部分和边缘部分颜色一致，表示灭菌分和边缘部分颜色一致，表示灭菌器抽真空系统良好。器抽真空系统良好。不合格：不合格：测试图变色不均匀，通常中测试图变色不均匀，通常中央比边缘部分颜色浅，表示空气排央比边缘部分颜色浅，表示空气排除不彻底，须检查、修理后使用除不彻底，须检查、修理后使用.B-D测试失败原因分析测试失败原因分析 真空泵效果下降真空泵效果下降 自控系统失灵自控系统失灵,抽气时间缩短抽气时间缩短 柜室密封性能下降柜室密封性能下降,不能维持规定的负压不能维持规定
7、的负压 空气起始温度低空气起始温度低,重力作用明显重力作用明显 送入蒸汽动能偏高送入蒸汽动能偏高,将过多的空气挤入试验包将过多的空气挤入试验包 试验包与柜室容量相比过小试验包与柜室容量相比过小,产生小装量效应产生小装量效应 B-D试验未按规定进行试验未按规定进行 2 2、生物监测法、生物监测法 指示菌株：指示菌株：指示菌株为耐热的嗜指示菌株为耐热的嗜热脂肪杆菌芽孢热脂肪杆菌芽孢(ATCCATCC 79537953或或SSIKSSIK 3131株株)，菌片含 菌 量 为菌片含 菌 量 为 5 5.O Ol l0 05 5cfu/cfu/片片 5 5.O Ol l0 06 6cfucfu片片，在在
8、121121O O.5 5条条件下件下，D D值值（杀灭杀灭9090%微生物所需时间微生物所需时间）为为 1 1.3 3 minmin1 1.9 9minmin，杀 灭 时 间杀 灭 时 间(KTKT值值)1 91 9 minmin，存 活 时 间存 活 时 间(STST 值值)为为3 3.9 9minmin。培养基：培养基：试验用培养基为溴甲酚试验用培养基为溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基紫葡萄糖蛋白胨水培养基。检测方法检测方法 将两个嗜热脂肪杆菌芽孢菌片分别将两个嗜热脂肪杆菌芽孢菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。心部位。在下排气压力蒸汽灭菌柜室
9、内，排在下排气压力蒸汽灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包气口上方放置一个标准试验包(由由3 3件平件平纹长袖手术衣，纹长袖手术衣，4 4块小手术巾，块小手术巾，2 2块中手块中手术巾，术巾，1 1块大毛巾，块大毛巾，3030块块lOcmlOcmlOcm 8lOcm 8层纱布敷料包裹成层纱布敷料包裹成(25(25cmcm30cm30cm30cm30cm大小大小)。预真空和脉动真空压力蒸汽预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌器 预真空和脉动真空压力蒸汽灭预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气门上方放置菌器灭菌柜室内，排气门上方放置一个标准测试包一个标准测试包(由由16条全棉手术巾条全棉
10、手术巾4lcm66cm，将每条手术巾的长边将每条手术巾的长边先折成先折成3层，短边折成层，短边折成2层然后叠放，层然后叠放，作成作成23cm23cml5cm大小的测试大小的测试包包)。手提压力蒸汽灭菌器手提压力蒸汽灭菌器 手提压力蒸汽灭菌器用通手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒气贮物盒(22cml3cm6cm)代代替标准试验包替标准试验包，盒内盛满中试管盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两只灭指示菌片放于中心部位的两只灭菌试管内菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸试管口用灭菌牛皮纸包封包封)，将贮物盒平放于手提压将贮物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部力蒸汽灭菌器底部。检测方法检测方法 经一个灭菌周期后经
11、一个灭菌周期后，在无菌在无菌条件下条件下，取出标准试验包或通气取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片贮物盒中的指示菌片，投入溴甲投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经经56561 1培养培养7 7d(d(自含式生物自含式生物指示物按说明书执行指示物按说明书执行)，观察培养观察培养基颜色变化基颜色变化。检测时设阴性对照检测时设阴性对照和阳性对照和阳性对照。快速检测快速检测(24小时出结果小时出结果)结果判定结果判定 每个指示菌片接种的溴甲酚紫每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色蛋白胨水培养基都不变色，判定为判定为灭菌合格：指示菌片之一接种的溴灭菌合格：指示菌
12、片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基甲酚紫蛋白胨水培养基，由紫色变由紫色变为黄色时为黄色时，则灭菌过程不合格则灭菌过程不合格。注意事项：注意事项：监测所用菌片须经监测所用菌片须经卫生部认可卫生部认可，并在有效期内使用并在有效期内使用，生物指示物监测应生物指示物监测应1 1月月1 1次次。、干热灭菌效果监测方法、干热灭菌效果监测方法 1 1、化学检测法化学检测法 检测方法：检测方法：将既能指示温度又将既能指示温度又能指示温度持续时间的化学指示剂能指示温度持续时间的化学指示剂3 3个个5 5个分别放入待灭菌的物品中，并个分别放入待灭菌的物品中，并置于灭菌器最难达到灭菌的部位。经一置于灭菌器最难达到灭
13、菌的部位。经一个灭菌周期后，取出化学指示剂，据其个灭菌周期后，取出化学指示剂，据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。件。结果判定结果判定 检测时，所放置的指示管检测时，所放置的指示管的颜色及性状均变至规定的条件，的颜色及性状均变至规定的条件，则判为达到灭菌条件；若其中之则判为达到灭菌条件；若其中之一未达到规定的条件，则判为未一未达到规定的条件，则判为未达到灭菌条件。达到灭菌条件。2 2、物理检测法：、物理检测法：(热电偶检测法热电偶检测法)检测方法：检测方法：检测时检测时，将多点温度将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层检测仪的多个探头分别放于灭菌器
14、各层内内、中中、外各点外各点。关好柜门关好柜门，将导线引将导线引出出，由记录仪中观察温度上升与持续时由记录仪中观察温度上升与持续时间间。结果判定：结果判定：若所示温度若所示温度(曲线曲线)达达到顶置温度，则灭菌温度合格。到顶置温度，则灭菌温度合格。生物检测法生物检测法 指示菌株：指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽枯草杆菌黑色变种芽孢孢(ATCCATCC93729372)，菌 片 含 菌 量 为菌 片 含 菌 量 为5 5.0 010105 5cfu/cfu/片片 5 5.0 010106 6cfu/cfu/片片。其抗其抗力要求同上力要求同上。检测方法：检测方法：将枯草杆菌芽孢菌片将枯草杆菌芽孢菌片分
15、别装入灭菌中试管内分别装入灭菌中试管内(1(1片片/管管)。灭菌。灭菌器与每层门把手对角线内，外角处放置器与每层门把手对角线内，外角处放置2 2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至降至8080时，加盖试管帽后取出试管。时，加盖试管帽后取出试管。在无菌条件下在无菌条件下 ，加入普通营养肉汤培养基加入普通营养肉汤培养基(5 5mlml管管)，以以36361 1培养培养4848h h，观察初步观察初步结果结果，无菌生长管继续培养至第七日无菌生长管继续培养至第七日。结果判定结果判定:若每个指示菌片接
16、种的肉汤若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清管均澄清，判为灭菌合格判为灭菌合格，若指示菌片之一若指示菌片之一接种的肉汤管混浊接种的肉汤管混浊，判为不合格判为不合格。对难以判定的肉汤管，取对难以判定的肉汤管，取o o1ml1ml接种于营养接种于营养琼脂甲板，用灭菌琼脂甲板，用灭菌L L棒涂匀，放棒涂匀，放363611培培养养4848h h，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。菌合格。三、环氧乙烷三、环氧乙烷(EO)灭菌效果监测灭菌效果监测 灭菌效果监测灭菌效果监测 每次每次灭菌均应进行程序监测灭菌均应进行程序监测 每个每个灭菌物品的外包装应粘贴包外灭菌物品的外包装应粘贴包外化学指示胶带化学指示胶带，作为灭菌过程的标志；作为灭菌过程的标志；包内放置化学指示卡包内放置化学指示卡，作为灭菌效果的作为灭菌效果的参考参考。每月每月应做生物监测，移植物必须等应做生物监测，移植物必须等生物监测结果为阴性时方可使用。生物监