1、马拉篇一：6种中草药对马拉色菌的阻碍学科分类号二级18021本科学生毕业论文标题 6种中草药抗马拉色菌的体外药敏试验姓 名 李繁梅学 号 094120236院、 系 生命科学学院专 业 生物科学指导老师 张 田职称学历副教授硕士研究生6种中草药抗马拉色菌的体外药敏试验出生日期：1990年6月12日出生地：云南省曲靖市会泽县：269382864电子邮箱：269382864号码：15198771591专业：生物科学.2关键词.2材料、设备及仪器.2方法.3结果.4讨论.5参考文献.6英文标题、及关键词.7：马拉色菌是一种条件致病性真菌，它会引起花斑藓、马拉色菌毛囊炎、银屑病、脂溢性皮炎等。目的：是
2、挑选有效抑制马拉色菌的中草药。方法：采纳微量稀释法与贴片法进展体外药敏实验。 结果：6种中草药侧柏叶、三颗针、黄芩、丁香、何首乌、胡黄连中侧柏叶和三颗针对马拉色菌有较强的抑制造用；黄芩和丁香对马拉色菌有一定的抑制造用；何首乌和胡黄连对马拉色菌没有抑制造用。关键词：中草药； 马拉色菌； 抑制造用； 抑菌圈马拉色菌Malassezia)是人类及温血动物的正常菌群。是一种条件性致病性真菌，常驻皮肤的外表，具有酵母态和菌丝态。研究说明，该菌属与花斑糠诊、马拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎、特应性皮炎及一些银屑病的发生、开展亲密相关1。到二十世纪中期，人们基于形态学、超微构造、生理生化特征以及分子生物学的研究，
3、将马拉色菌分为厚皮马拉色菌M.Pachydermatis)、合轴马拉色菌(M.sympodialis)、糠秕马拉色菌(M.furfur)、钝性马拉色菌(M.obtusa)、球形马拉色菌(M.globosa)、限制性马拉色菌(M.restricta)、斯洛菲马拉色菌(M.slooffiae)等七种2-3。近年来，Sugita等利用巢式PCR及PCR限制性片段长度多态RFLP等又觉察3个新菌种。随着如今临床上所用的纯西药抗头皮屑药物如氟康唑、酮康唑等对此虽有一定的效果，但从高效低毒以及耐药性等方面的评价，没有一种药物可以令人满意。抗真菌中药的挑选研究已开展多年，相比传统的唑类药物具有不良反响小、来
4、源广、价格低廉、较小出现耐药等优点。开展针对马拉色菌的体外药敏实验挑选中 药，可以指导临床医生合理用药已遭到越来越多的关注。1材料、设备及仪器1.1菌株马拉色菌估计35株，取自正常人1.2培养基橄榄油培养基：蛋白胨10g、葡萄糖40ml、酵母浸膏0.1g、单硬脂酸甘油酯2.5g、吐温-80 重庆川江化学试剂厂；PH50g/L,25):5.0-7.0)2.0ml、橄榄油olive oil折光率：1.468-1.471；皂化值：175-195；酸价：1-3；碘值：79-88以不饱和脂肪酸为主;中国科学院昆明植物研究所)40g、琼脂18g、水1L8。1.3药品：侧柏叶、三颗针、丁香、黄芩、何首乌、胡
5、黄连。1.4阳性对照药品酮康唑口服抗真菌药，片装，每片含酮康唑0.2g；消费厂家：西安杨森制药；产品批号：090115144；批准文号：国药准字H10930212.，储藏液用二甲基亚砜溶液配制。基于以往研究结果，配制酮康唑储藏液质量浓度为320mg/l，氟康唑储藏液质量浓度为1280mg/l。使用往常用无菌水稀释10倍。1.5设备及仪器1.5.1设备电子天平，超净工作台，恒温烘箱，显微镜，手提式压力蒸汽灭菌锅(消费厂家：浙江新丰医疗器械，超声震荡机(Ultrasonic Cleaner,型号：DAS300-GL2-16L)。1.5.2仪器锥形瓶，小烧杯，玻璃棒，注射器，小勺，培养皿，移液枪，载
6、玻片，盖玻片，滴管，量筒，小药瓶容量：5ml和10ml)，微孔过滤器，打孔器。2.方法2.1配制培养基100ml详细步骤如下：在每次配制培养基之前都要对培养皿进展灭菌处理；2.1.1称量:蛋白胨：1g ； 葡萄糖：4g ； 酵母菌膏：0.01g ；单硬脂酸甘油脂：0.25g； 吐温80：0.2ml ； 橄榄油：4ml ； 氯霉素：0.005g 蒸馏水：100ml2.1.2定容到100ml2.1.3 灭菌：高压121,40min灭菌。2.1.4倒平板:培养皿规格：100mm；高度：20mm；生长面积：55cm2 。2.2对头皮屑进展镜检2.2.1 配制体积分数为10%的KOH溶液和50%的双翎墨
7、水昆明市墨水厂出品溶液2.2.2 头皮屑经体积分数为10%KOH溶液处理，再用体积分数为50%的翎墨墨水溶液染色后在光镜下观察。2.3菌种的培养2.3.1 将头皮屑拨至预先消毒的纸片上，淋洒少量体积分数为75%的酒精于头皮屑上，待酒精挥发干后用无菌接菌针拨落头皮屑接种到含氯霉素的抗性橄榄油培养基上。在34倒置培养了6天。2.3.2 再次对培养出来的菌种进展鉴定2.4菌种的传代培养2.4.1 将菌种稀释为四个浓度梯度用移液枪接种到编好号的培养基中,用涂布器 涂布均匀,放在34的恒温箱中进展培养,培养3天后,再一次进展传代培养。2.4.2菌种的保存：斜面划线法进展接种培养，培养两天后放在4的冰箱里
8、进 行保存备用。2.5药品的提取及灭菌2.5.1超声提取2.5.1.1称取药品：何首乌、黄芩、三颗针和侧柏叶的粉末各5g放入塑料袋中每个塑料袋中参加50ml的蒸馏水，并密封。2.5.1.2超声提取：接通电源；调形式MOOE调时间SET TIME：20min；调温度SET TEMP：50 温度到50后，把药品放入超声提取机中，进展提取。2.5.1.3过滤：滤网+烧杯进展过滤2.5.1.4离心：药液放入离心管中，配平，离心，离心后取上清液，放入药瓶中。2.5.1.5巴氏消毒法进展灭菌：超声提取机中进展，调温度为60，把药品放入其中，时间为30min。2.5.1.6阳性药物的制备：阳性药品酮康唑用二
9、甲基亚砜稀释，初始浓度为40mg/ml；最适初始浓度为0.032mg/ml.用微孔过滤微孔滤膜的孔径是0.45um,规格是25m/m批号：2023年4月8日，消费厂家：上海兴亚净化材料厂的方法来进展灭菌。2.5.2煮沸法称取药品：何首乌、黄芩、三颗针和侧柏叶各2g放入塑料袋中每个塑料袋中参加10ml的蒸馏水，并密封。用沸水煮15min,过滤、离心;巴氏消毒法进展灭菌。2.6接种:贴片法2.6.1配制培养基2.6.2药液的稀释： 把药液用无菌水稀释10倍，即初始浓度为10mg/ml(1ml药液+9ml无菌水；把稀释用的小药瓶分别编号：1，2，10；1号参加1000ul的药液，210参加500ul
10、的无菌水，自第一孔吸500ul的药液参加2号小药瓶中，混匀，并依次递倍稀释，每个小药瓶中放入3片滤纸片(直径R为6mm)进展浸泡，用一个小药瓶装500ul的蒸馏水并放入14片滤纸片(直径R为6mm)浸泡，用一个小药瓶(容量：5ml)装500ul的菌液并放入14片滤纸片浸泡，2.6.3涂布： 一种药设置3个平行对照组，每个培养基上都做好标记并编号；用稀释好的菌液进展涂布，在涂布时留意器具的灭菌。共重复5次。2.6.4贴滤纸片：在相应的培养基上对应着编号进展贴片。2.6.5 培养:34培养72h，每天观察菌体生长情况，以菌体生长对照生长是否良好为标准。2.6.6结果判读：肉眼观察到菌体生长对照孔菌
11、落生长良好，有菌落生长为无抑制造用，无菌落生长为有抑制造用。用游标卡尺来测量抑菌圈的大小。2.7质控方法：每次试验的同时，以两种方法进展敏感性测定。每次结果显示其MIC总是介于同一范围，且各药物每次测定的MIC值波动不超过一个稀释度，方认为实验操作精确无误。3结果3.1头皮屑镜检结果：看到一些蓝紫色的点。孢子壁厚、单级出芽；初步推断为马拉色菌。3.2对培养出来的菌种进展鉴定：培养出了两种真菌菌落。3.2.1 肉眼观察：篇二：修辞学 马拉碦什中的三段论运用As You See ItWith the finishing of the University Entrance Examination,
12、 I have remembered the last class of mine in senior high school again. Different from others days, the days we all addicted to the book, the exercise, the discussion. We were so silent that even we can hear the breath of each other, but the voice from the man, who always called antique by us, is my
13、head teacher.Out of the window, the rain was washing the leaves; the wind was sweeping the top of tree, the birds up and down was seeking their nest. Inner the window, everyone lower their head, I guessed that some of them were weeping with the last song when I walked through your window sung by a g
14、irl. Listened the voice, my heart like a stone fall into water-plop, I cannot help myself from crying. Suddenly, the sound was interrupted by a rushed voice out of the door, the bell rang, and we had known that we had to finish the class.A study of logos, pathos and ethos applied in “MarrakechFor Aristotle, logic deals with universal and verifiable truth, while rhetoric deals with probable truth, that is, opinion and beliefs that can be advanced with greater or lesser certainty. As to the latter one, it called artistic proof