1、流式细胞仪（流式细胞仪（Flow Cytometer)基础简介基础简介 中科院生物物理研究所 中国科学院蛋白质科学研究平台 2005年3月 刘春春 主要内容主要内容 流式细胞仪概要 流式细胞仪的工作原理 流式细胞仪测量的对象 什么是流式细胞仪什么是流式细胞仪 流式细胞仪实物流式细胞仪实物 BD FACSVantage BD-Calibur 流式细胞仪基本结构 FCMFCM的定义的定义 流式细胞仪是指，使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，幵对各参数进行关联分析的一种仪器。对比 流式细胞仪是一种特殊的显微镜 流式细胞仪 显微镜 流动的
2、细胞 静止的细胞样本 数量大 数量少 高速分选 样本难以再利用 细胞群体特征量分布 可以揭示细胞内部结构信息 流式细胞仪 蛋白胶 多参数 单参数 量化的分布 平均值 容易检测各个参数间的相关性 不容易 功能特点 （1）多参数定量分析每一个细胞；（2）细胞分选；高纯度：99%以上；可分析小于1/10000比例的稀有细胞群；单细胞克隆等。（3）高通量（分析分选）分析150，000个/秒 分选100，000个/秒 应用领域 疾病诊断 生物学基础研究 环境监测 海洋微生物研究 农业领域应用 等等 70年代美国为攻克癌症而建造。厂商：Becton-Dickson Coulter-Beckman DOCy
3、tomation 已成为一个几十亿美金的产业 流式细胞仪工作原理流式细胞仪工作原理 流体动力学聚焦 流动室 激光聚焦 液流与光源 探测光路聚焦 二色镜 1 2 3 带通滤波片 光电倍增管 激光束 细胞 收集透镜 前向散射光 侧向散射光，荧光 光信号分离，导向，各探测通道PMT接收幵转化为电信号。光信号收集 数据处理数据处理 FSC SSC FL1 FL2 FL3 对数对数 线性线性 线性线性 线性线性 对数对数 脉冲处理，模数转换 光信号 电信号 记录数据，显示结果（面积，峰高，宽度）流式细胞仪产生的信号流式细胞仪产生的信号 非荧光信号 颗粒度 细胞大小 散射光信号区分裂解后的外周血细胞群 荧
4、光信号 荧光染料被激发而发射的光信号。定量染色 荧光信号大小 被标记组分含量的定量 多荧光标记胞内多种组分，实现多参数测量 PIAnnexinV细胞凋亡检测 DNA含量-PI Annexin-V CD45 FITC(log)R1=单核细胞(CD14+ve)R2=淋巴细胞(CD45单核细胞)R3=中性粒细胞(CD45单核细胞)CD14 PE(log)前向散射光(linear)侧向散射光(linear)PEFITC荧光标记检测外周血裂解后细胞群 细胞分选 流式细胞仪的测量对象流式细胞仪的测量对象 大小 悬浮在溶液中的相互离散颗粒。大小范围：0.2uM-300uM。对象类型 细胞类型：（1）高等真核
5、细胞；（2）酵母；（3）细菌；（4）多细胞的聚集体，如胰岛等。非生命颗粒：细胞核、染色体、和其它细胞器以及乳化微球等。流式细胞仪能够检测的细胞属性和组分举例 1）不需染色：大小，胞浆颗粒度，细胞自发荧光，色素，细胞精确计数。2）需染色或标记：细胞组分：细胞膜：流动性，通透性，膜电位 细胞内离子：H+（可检测PH值），Na+，K+，Ca2+（结合的和 自由 的）。核酸：DNA含量，DNA成分，DNA合成，RNA，染色质结构等 总蛋白质 蛋白质分子间相互作用 抗原 细胞骨架成分 受体 功能属性：酶活性 细胞凋亡 细胞坏死 细胞活性 氢硫基 凝血素结合位点 药物动力学.经验之谈：凡细胞内能进行荧光标
6、记的成分或者某种变化，都可用流式细胞仪进行检测。G1 S phase G2 M G1 1 2 1 DNA含量 DNA 含量 细胞周期时相 G0/1 G2/M S 细胞数 细胞周期分析 Hoechst 33258（AT）Chromomycin A3 （GC）白血病患者 2 4 5 6 X 8 9-12 7 recip 9-22 13 14 15 16 17 Y 18 20 19 22 21 Ph 1/3 染色体组型测定 1 3 生物物理所现有流式细胞仪生物物理所现有流式细胞仪 型号：BD FACSVantage SE 参数：分析10，000个/秒，分选7，000个/秒；激光：488nm，UV；四色荧光通道。地点：1406 联系方式：电话64839306 或：64862503 电子邮件