1、 实验实验 生物组织中糖类脂生物组织中糖类脂肪和蛋白肪和蛋白质鉴定质鉴定 思考题：1、糖类、脂肪、蛋白质鉴定的实验原理 2、常见的还原糖有哪些？取材的要求 3、斐林试剂的组成，使用时的注意事项 4、双缩脲试剂的组成，使用时注意事项 5、斐林试剂和双缩脲试剂的比较 6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用 7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何 1.实验原理实验原理：化学试剂化学试剂+有机化合物有机化合物特定的颜色特定的颜色(1)还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂 水浴加热水浴加热砖红色砖红色 沉淀沉淀(2)脂肪脂肪+苏丹苏丹橘黄色橘黄色 脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色(3
2、)蛋白质蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色紫色 2、常见的还原糖有哪些？取材的要求 还原糖还原糖：可被氧化充当还原剂的糖。：可被氧化充当还原剂的糖。(常见的有：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、常见的有：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖半乳糖)注意：蔗糖不是还原糖注意：蔗糖不是还原糖 3、斐林试剂的组成，使用时注意事项、斐林试剂的组成，使用时注意事项 斐林试剂：甲液：斐林试剂：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液 乙液：乙液：0.05g/mL的的CuSO4溶液溶液 使用注意事项：等量使用注意事项：等量混合，混合，现配现用现配现用（NaOH+CuSO4）1.点拨：点拨：还原糖还原糖+斐林试剂斐林
3、试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀 可溶性可溶性还原糖还原糖与与斐林试剂斐林试剂发生作用，可生发生作用，可生 成成砖红色砖红色的的CuCu2 2OO沉淀沉淀。（放在放在盛有盛有5050-6565温水的大烧杯）温水的大烧杯）水浴水浴 加热加热 颜色变化：浅蓝色 棕色 砖红色 1步骤：步骤：样液制备样液制备:（取材取材5g，加入石英砂和加入石英砂和 5ml水水）(1)取样液取样液2ml于试管中于试管中 (2)加入新配制的斐林试剂加入新配制的斐林试剂1ml（甲液甲液和乙液和乙液等量混合等量混合均匀后再加入均匀后再加入）盛有盛有5050-6565温水的大烧杯温水的大烧杯）(3)水浴加热水浴加热2min左右左右
4、(（4）观察颜色观察颜色变化变化（浅蓝色浅蓝色棕色棕色砖红色砖红色）注意事项：注意事项：（1）材料的选取：还原糖含材料的选取：还原糖含量高量高，白色或近于白色白色或近于白色，如苹果如苹果梨梨白萝卜白萝卜。思考：西瓜思考：西瓜、甘蔗甘蔗、甜菜可以吗甜菜可以吗？为为什么什么？（2）试剂：斐林试剂试剂：斐林试剂(等量混合等量混合、现配现现配现用用)甲液：甲液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液 乙液：乙液：0.05g/ml的的CuSO4溶液溶液 4、双缩脲试剂组成，使用时注意事项 双缩脲试剂组成：双缩脲试剂组成：A液：液：0.1g/mL的的NaOH溶液溶液 B液：液：0.01g/mL的的CuSO4溶
5、液溶液 使用注意事项：使用注意事项：先加先加A液液1mL于样液中，于样液中，再加再加B液液4滴滴于样液中于样液中（1）蛋白质）蛋白质+双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色紫色 2 2步骤：步骤：（1 1）试管中加样液试管中加样液2 2mLmL （2 2）加双缩脲试剂加双缩脲试剂A A液液1 1mLmL（造成碱性环造成碱性环 境境），摇匀摇匀 （3 3）加双缩脲试剂加双缩脲试剂B B液液4 4滴滴，摇匀摇匀 （4 4）观察颜色变化观察颜色变化（紫色紫色）注：注：样液浓度不宜过高样液浓度不宜过高，以免实验后黏住试以免实验后黏住试管壁管壁，洗不干净洗不干净。B B液不能过量液不能过量，多余的多余的B B液会与
6、液会与A A液反应液反应成蓝色成蓝色，而掩盖生成的紫色而掩盖生成的紫色。斐林试剂斐林试剂 双缩脲试剂双缩脲试剂 甲液甲液 乙液乙液 A A液液 B B液液 成分成分 鉴定物鉴定物质质 添加顺添加顺序方法序方法 反应条反应条件件 反应现反应现象象 5.比较比较斐林试剂斐林试剂和和双缩脲试剂双缩脲试剂 0.1g/mLNaOH 同甲液 0.01g/mLCuSO4 0.05g/mLCuSO4 还原性糖还原性糖 蛋白质蛋白质 等量混合后等量混合后再加入再加入 先加先加A A液液1mL1mL，摇匀，摇匀，再加再加B B液液4 4滴滴 5050-6565水浴加热水浴加热 砖红色砖红色沉淀沉淀 紫色紫色络合物
7、络合物 不需不需加热，摇匀加热，摇匀 6、脂肪鉴定中酒精的用法和作用 7、脂肪鉴定中能否直接观察颜色？借助什么来观察？3.脂肪脂肪+苏丹苏丹橘黄色橘黄色 脂肪脂肪+苏丹苏丹红色红色（2）步骤）步骤 材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。材料的选取：含脂肪量高的组织，如花生的子叶。取材：取材：取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮取一粒浸泡过的花生种子，去掉种皮 切片切片 制片：（切片越薄越好）将制片：（切片越薄越好）将最薄最薄的花生切片放的花生切片放在载玻片中央在载玻片中央 染色：滴染色：滴23滴苏丹滴苏丹染液，染色染液，染色3min，用吸，用吸水纸吸去染液，再滴水纸吸去染液，再滴体积分数体积
8、分数50%的的酒精洗去浮酒精洗去浮色色，再用吸水纸吸去多余的酒精（苏丹，再用吸水纸吸去多余的酒精（苏丹易溶于易溶于酒精中，避免影响实验结果），滴酒精中，避免影响实验结果），滴12滴清水于滴清水于材料切片上材料切片上盖上盖玻片盖上盖玻片 镜检镜检观察：光学观察：光学显微镜显微镜对光对光低倍镜寻找着色低倍镜寻找着色圆形小颗粒圆形小颗粒高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒 8、如何鉴定淀粉，颜色反应如何 用试管取用试管取2mL2mL待测组织样液，向试管待测组织样液，向试管内滴加内滴加1 12 2滴碘液，观察颜色变化。滴碘液，观察颜色变化。4、淀粉、淀粉+碘碘蓝色蓝色 加加12
9、滴碘液滴碘液 1.1.鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂鉴定生物组织中可溶性还原糖的试剂 A A斐林试剂斐林试剂 B B双缩脲试剂双缩脲试剂 C C苏丹苏丹染液染液 D D苏丹苏丹染液染液 2.2.能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是能与斐林试剂反应产生砖红色沉淀的是 A A淀粉淀粉 B B果糖果糖 C C蔗糖蔗糖 D D纤维素纤维素 3.3.下列哪个实验用到显微镜（下列哪个实验用到显微镜（）A A可溶性还原糖的鉴定可溶性还原糖的鉴定 B B蛋白质的鉴定蛋白质的鉴定 C C脂肪的鉴定脂肪的鉴定 D D淀粉的鉴定淀粉的鉴定 A C B 4.4.用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶用斐林试剂鉴定可溶性还原
10、糖时，溶液颜色的变化过程为（液颜色的变化过程为（）A A无色一砖红色（沉淀）无色一砖红色（沉淀）B B浅蓝色一砖红色（沉淀）浅蓝色一砖红色（沉淀）C C浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）浅蓝色一蓝色一砖红色（沉淀）D D浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）浅蓝色一棕色一砖红色（沉淀）5.5.下列物质中，能被苏丹下列物质中，能被苏丹IVIV染液染成染液染成红色的是（红色的是（）A A马铃薯块茎马铃薯块茎 B B浸软的蓖麻种子浸软的蓖麻种子 C C蛋清液蛋清液 D D苹果苹果 D B 6.6.还原糖的实验中，加入斐林试剂时必须要还原糖的实验中，加入斐林试剂时必须要 A A先加入斐林试剂甲液，后加入乙液先加入斐林
11、试剂甲液，后加入乙液 B B先加入斐林试剂乙液，后加入甲液先加入斐林试剂乙液，后加入甲液 C C将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再加 D D以上以上A A、B B、C C三种操作方法都正确三种操作方法都正确 7.7.鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂正确做鉴定蛋白质样品时加双缩脲试剂正确做法是法是 A A先加先加A A液，混合后再加液，混合后再加B B液摇匀观察液摇匀观察 B B先加先加B B液，混合后再加液，混合后再加A A液摇匀观察液摇匀观察 C CA A、B B液混合后加入，摇匀后观察液混合后加入，摇匀后观察 D DA A、B B液同时加入样液，摇匀后观察液
12、同时加入样液，摇匀后观察 C A 即：还原糖中的醛基（即：还原糖中的醛基（CHO）被被 Cu(OH)2氧化氧化，Cu(OH)2被还原被还原成成砖红色砖红色的的Cu2O沉淀沉淀 还原糖的鉴定原理：还原糖还原糖+斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀 斐林试剂斐林试剂 双缩脲试剂双缩脲试剂 甲液甲液 乙液乙液 A A液液 B B液液 成分成分 鉴定物质鉴定物质 添加顺序方添加顺序方法法 反应条件反应条件 反应现象反应现象 5.比较比较斐林试剂斐林试剂和和双缩脲试剂双缩脲试剂 0.1g/mL的NaOH溶液 0.1g/mL的NaOH溶液 0.01g/mLCuSO4溶液 0.05g/mL的CuSO4溶液
13、还原性糖还原性糖 蛋白质蛋白质 甲液和乙液等量混甲液和乙液等量混合均匀后再加入合均匀后再加入 先加双缩脲试剂先加双缩脲试剂A A液液1mL1mL，摇匀，再加双缩脲试剂摇匀，再加双缩脲试剂B B液液4 4滴滴 5050-6565水浴加热水浴加热 砖红色沉淀砖红色沉淀 紫色络合物紫色络合物 不需加热，摇匀即可不需加热，摇匀即可 蛋白质的鉴定原理：蛋白质的鉴定原理：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。色反应。蛋白质分子中含有很多蛋白质分子中含有很多肽键肽键，在在碱性溶液（即碱性溶液（即A A液可造成碱性液可造成碱性环境）环境）中能与双缩脲试剂中的中能与双缩脲试剂中的CuCu2+2+作用，产生紫色络合物。作用，产生紫色络合物。