1、大肠菌群类检测方法介绍 大肠菌群大肠菌群(Coliform)粪大肠菌群粪大肠菌群(Fecal Coliform)大肠杆菌大肠杆菌(E.coli)肠杆菌科肠杆菌科(Enterobactericeae)肠杆菌科四种指标菌的范围肠杆菌科四种指标菌的范围（隶属关系）（隶属关系）食品中大肠菌群类及其检验食品中大肠菌群类及其检验 大肠菌群（大肠菌群（coliforms）：）：指一群在指一群在36条件下培养条件下培养48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧和能发酵乳糖、产酸产气的需氧和 兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌群主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评该菌群主要来源于人
2、畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评 价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。粪大肠菌群（粪大肠菌群（Faecal coliform）：）：系指一群在系指一群在44.5培养培养24h48h能发酵乳糖、产酸产气的需氧能发酵乳糖、产酸产气的需氧 和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠杆菌（大肠杆菌（Escherichia coli）：）：大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在大肠杆菌广泛存在于是人和温血动物的肠道中，能够在44.5 发酵乳糖产酸产气、发酵乳糖产酸产气、IMViC生化试验为生化试验
3、为+-或或-+-。包括：产肠毒素（包括：产肠毒素（ETECETEC）肠致病性（）肠致病性（EPECEPEC）肠侵袭性）肠侵袭性(EIEC)(EIEC)肠出血性肠出血性(EHEC)(EHEC)主要菌型：主要菌型：O157:H7 大肠菌群类检测方法大肠菌群类检测方法 GB SN 日本方法 VRB固体平板法 Deso固体平板法 显色培养基法 3M Petrifilm 测试片法 MPN Table 革兰氏染色 242h 44.50.5 粪大肠菌群检测的GB法 乳糖胆盐发酵管产气的培养物 EC肉汤 不产气 粪大肠菌群阴性 产气 EMB平板 18-24h 有典型菌落报告为阳性 361 back 44.50
4、.5 IMVIC back 营养琼脂斜面18-24h back back back back 法国标准化协会（法国标准化协会（AFNOR）认证）认证 美国农业部（美国农业部（USDA）认证）认证 美国食品和药品管理局（美国食品和药品管理局（US FDA）认证）认证 美国食品安全与检测机构（美国食品安全与检测机构（USDA FSIS）认证）认证 日本食品安全法规标准分析方法日本食品安全法规标准分析方法 北美国家认证北美国家认证 加拿大健康保护协会认证加拿大健康保护协会认证 澳大利亚和新西兰食品安全认可方法澳大利亚和新西兰食品安全认可方法 波兰标准化委员会（波兰标准化委员会（PKN）认证）认证 智
5、利农业部（智利农业部（SAG）认证）认证 中国的中国的GB和和SN即将发布实施即将发布实施 国国 际际 官官 方方 方方 法法 3M测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌测试片法检测食品中大肠菌群和大肠杆菌 3M PetrifilmTM 大肠杆菌大肠杆菌/大肠菌群大肠菌群测试片测试片 的检测原理的检测原理 -葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 四唑翁指示剂四唑翁指示剂（tetrazolium）-半乳糖苷酶半乳糖苷酶 薄膜薄膜 粘合剂指示剂粘合剂指示剂 冷水可溶性凝胶冷水可溶性凝胶 标准培养基冷标准培养基冷水可溶性凝胶水可溶性凝胶 粘合剂粘合剂 印有格子的纸印有格子的纸片片 大肠菌群及大肠杆菌大肠菌群及大肠杆菌
6、3M Petrifilm 检测法检测法 接种1ml样品匀液到每张PetrifilmTM大肠菌群测试片 计数红色带气泡的菌落 报告大肠菌群数 36C1C 检 样 25g(mL）样品+225mL稀释液 只检测大肠菌群 大肠杆菌和大肠菌群同时检测 24 h2h 10倍系列稀释 接种1ml样品匀液到每张PetrifilmTM大肠杆菌/大肠菌群测试片 计数蓝色带气泡的菌落 报告大肠杆菌数 36C1C 24 h2h或48 h2h 计数蓝色带气泡和红色带气泡的菌落 报告大肠菌群数 含有改良的VRB培养基 目标菌落为红点带气泡 36 1C,24 2 h 培养时叠放片数小于20 计数范围15-150 AOAC官
7、方方法 3M PetrifilmTM 大肠菌群测试片大肠菌群测试片 24 h得出大肠菌群数 肉、家禽和海鲜，24 h得出大肠杆菌数 其它食品，48 h得出大肠杆菌数 E.coli O157表现为大肠菌群 3MTM PetrifilmTM大肠杆菌大肠杆菌/大肠菌群测试片大肠菌群测试片 谢谢大家谢谢大家!将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1min，水洗。滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。滴加95%乙醇脱色约1530s，直至颜色液被洗掉。不要过分脱色，水洗。滴加复染液，复染1min，水洗，待干，镜检。结果：革兰氏阳性菌呈紫色 革兰氏阴性菌呈红色 革兰氏染色法：革兰氏染色法：back IMVIC
8、 色氨酸肉汤色氨酸肉汤：在361培养242h后，加Kovacs氏试剂0.2-0.3ml,上层出现红色为靛基质阳性反应。MR-VP培养基培养基：在361培养482h。以无菌操作移取1ml至13100mm试管中，加5%-萘酚乙醇溶液0.6ml,40%氢氧化钾溶液0.2ml，和少许肌酸结晶，振摇试管后静置2h，出现伊红色为VP试验阳性。将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5滴甲基红溶液。培养物变红则为甲基红试验阳性，变黄为阴性。Kovacs氏枸橼酸盐肉汤氏枸橼酸盐肉汤：361培养96h后记录有无生长。LST肉汤肉汤：于361培养482h，观察试管是否产气。back 生化试验：菌落挑取 三糖铁琼脂 蛋白胨水 半固体斜面 PH7.2尿素琼脂 KCN肉汤 赖氨酸脱羧酶试验培养基 克氏双糖铁琼脂 培养过夜 TSI底层产酸不产硫化氢，KCN阴性，尿素阴性 大肠杆菌 革兰氏阴性菌