1、血小板检查血小板检查 检验系临检教研室检验系临检教研室 陈丽华陈丽华 目的要求目的要求 掌握：血小板计数的原理、方法、质量掌握：血小板计数的原理、方法、质量控制、参考值、方法学平价及临床意义。控制、参考值、方法学平价及临床意义。重点重点:血小板计数血小板计数 难点难点:血小板形态血小板形态 一、概述一、概述 （一）血小板的生成（一）血小板的生成 造血多能干细胞造血多能干细胞 TPO调控调控 分化分化 原巨核细胞原巨核细胞 促进巨核细胞祖细胞增促进巨核细胞祖细胞增殖、分化、成熟与释放殖、分化、成熟与释放plt 进入血液进入血液 Plt 2/3在循环血，其余贮存于脾。在循环血，其余贮存于脾。（二）
2、血小板的破坏（二）血小板的破坏 血小板的平均寿命为血小板的平均寿命为714天，具有止血功天，具有止血功能仅开始能仅开始2天。衰老的血小板在单核巨噬细天。衰老的血小板在单核巨噬细胞破坏，主要在脾破坏。胞破坏，主要在脾破坏。脾池化脾池化：全身约有：全身约有1/3的血小板滞留于脾窦的血小板滞留于脾窦和脾髓的细胞间，血小板在脾内的这种滞和脾髓的细胞间，血小板在脾内的这种滞留现象即“脾池化”，脾池中的血小板和留现象即“脾池化”，脾池中的血小板和循环池中的血小板可以互换。循环池中的血小板可以互换。（三）血小板检测常用项目（三）血小板检测常用项目 1、血小板计数、血小板计数（PLT）:手工单项或血液手工单项
3、或血液分析仪多项检测分析仪多项检测 2、血小板平均体积（、血小板平均体积（MPV）3、血小板分布宽度、血小板分布宽度(PDW)4、血小板比积、血小板比积(PCT)血液分析仪测血液分析仪测 二、血小板计数二、血小板计数（手工法）（手工法）（一）原理（一）原理 将血液稀释一定倍数，充入计数池内计数，将血液稀释一定倍数，充入计数池内计数，计算出每一升血中血小板数。稀释液破坏计算出每一升血中血小板数。稀释液破坏RBC,固定固定Pt并防止聚集。并防止聚集。（二）器材（二）器材 光学显微镜；血球计数板、光学显微镜；血球计数板、Hb吸管、试管、采血针吸管、试管、采血针等。等。（三）试剂（三）试剂：下列试剂任
4、选一种：下列试剂任选一种 1.草酸铵稀释液：草酸铵草酸铵稀释液：草酸铵1.0g,EDTA-Na2 0.012g，蒸，蒸馏水加至馏水加至100mL.首选试剂。首选试剂。2.许汝和稀释液（复方尿素稀释液）：尿素许汝和稀释液（复方尿素稀释液）：尿素10g，枸，枸橼酸钠橼酸钠0.5g，40%甲醛甲醛0.1mL蒸馏水加至蒸馏水加至100mL。过滤冰箱保存。过滤冰箱保存。（四）操作（四）操作 1.在小试管中加入在小试管中加入plt稀释液稀释液0.38mL。2.取末梢血取末梢血20L加入试管中，迅速摇匀。加入试管中，迅速摇匀。室温放置室温放置10分钟。分钟。3.充池，静置充池，静置1015分钟。分钟。4.高
5、倍镜下计数中央大方格中四角及正中共高倍镜下计数中央大方格中四角及正中共5个中方格内的个中方格内的plt数。数。（五）计算（五）计算 血小板数血小板数/L=5个中方格内血小板数（个中方格内血小板数（N）51020106/L =5个中方格内血小板总数个中方格内血小板总数109/L（六）结果报告（六）结果报告 PLT:109/L（七）注意事项（七）注意事项 1.全部用具和稀释液要特别清洁，防尘、防全部用具和稀释液要特别清洁，防尘、防菌，以免计数时误认。菌，以免计数时误认。2.针刺要深，吸血及稀释动作要快，防聚集。针刺要深，吸血及稀释动作要快，防聚集。3.同时做多项检查时，优先采同时做多项检查时，优先
6、采plt计数之血。计数之血。4.充池前应充分摇匀，充池后需静置充池前应充分摇匀，充池后需静置10分钟分钟以上待以上待plt全部下沉后再计数。全部下沉后再计数。1h内完成。内完成。（八）方法学平价（八）方法学平价 1.草酸铵法对草酸铵法对RBC破坏力强，使视野清晰，破坏力强，使视野清晰，plt形态清楚，是全国临床检验操作规程推形态清楚，是全国临床检验操作规程推荐方法。由于荐方法。由于Plt体积小，易粘附、聚集及体积小，易粘附、聚集及破坏等，结果不甚理想。破坏等，结果不甚理想。2.复方尿素法优点是复方尿素法优点是plt胀大易辨认，但不胀大易辨认，但不能完全溶解能完全溶解RBC，且尿素易分解，试剂保
7、，且尿素易分解，试剂保存时间短。存时间短。3.血液分析仪法可同时测血液分析仪法可同时测MPV、PDW等多等多个指标，快速，临床适用。但不能鉴别红个指标，快速，临床适用。但不能鉴别红细胞碎片、灰尘等与细胞碎片、灰尘等与plt大小相似之物，故大小相似之物，故计数误差大。当直方图出现变化时，应用计数误差大。当直方图出现变化时，应用显微镜计数法校准之。显微镜计数法校准之。4.流式细胞仪法：用血小板单克隆抗体染色流式细胞仪法：用血小板单克隆抗体染色标记血小板，根据荧光强度和散射光强度，标记血小板，根据荧光强度和散射光强度，用独立的流式细胞仪检测可得到准确性极用独立的流式细胞仪检测可得到准确性极高的血小板
8、数。流式细胞仪法式目前血小高的血小板数。流式细胞仪法式目前血小板计数参考方法。板计数参考方法。5.相差显微镜法：相差显微镜下，血小板立相差显微镜法：相差显微镜下，血小板立体感增强，有助于识别血小板，还可照相体感增强，有助于识别血小板，还可照相后核对计数结果，作为手工法血小板计数后核对计数结果，作为手工法血小板计数的参考方法。的参考方法。（九）参考值（九）参考值：（：（100300）109/L（十）质量保证（十）质量保证 原则是：避免血小板被激活、破坏，避免原则是：避免血小板被激活、破坏，避免杂物污染。杂物污染。1.检测前检测前：采血要顺畅，抗凝剂选用合适，：采血要顺畅，抗凝剂选用合适，储存时间
9、适当；储存时间适当；2.检测中检测中：手工法计数要定期检查稀释液质：手工法计数要定期检查稀释液质量，仪器法要质控合格；量，仪器法要质控合格；3.检测后：检测后：（1）用同一份标本制备学血涂片染色精简）用同一份标本制备学血涂片染色精简观察血小板数量、大小、分布情况，并注观察血小板数量、大小、分布情况，并注意有无异常增多的红、白细胞碎片。意有无异常增多的红、白细胞碎片。（2）用参考方法核对。）用参考方法核对。（3）同一份标本）同一份标本2次计数误差要次计数误差要10%。（十一）临床意义（十一）临床意义 生理变化：生理变化：新生儿新生儿婴儿，出生后婴儿，出生后3个月达成人水平。个月达成人水平。晨间晨
10、间午后，春季午后，春季冬季，毛细血管冬季，毛细血管6.4fL，出血，出血发生率也低。发生率也低。四、血小板分布宽度四、血小板分布宽度(PDW)和血小板比积和血小板比积(PCT）1 PDW：是血液分析仪对血小板分布情况是血液分析仪对血小板分布情况进行数据处理得到的血小板体积的变异系进行数据处理得到的血小板体积的变异系数。数。2 PCT：是血小板计数值和是血小板计数值和MPV经过计算经过计算得到的，其值的大小与得到的，其值的大小与PLT和和MPV值有关。值有关。PCT =PLTMPV 3、参考值、参考值：PDW：15.5%18.1%PCT:成人：成人：0.108%0.282%115岁儿岁儿童：童：
11、0.221%0.406%4、临床意义：、临床意义：暂未用于临床，须与其他参数联合应用暂未用于临床，须与其他参数联合应用 五、血小板形态检查五、血小板形态检查 形态检查内容形态检查内容 血小板大小：有无巨大血小板或小型血血小板大小：有无巨大血小板或小型血小板；小板；形态：胞质的颜色，颗粒有无、分布、形态：胞质的颜色，颗粒有无、分布、粗细，空泡；粗细，空泡；PLT分布。分布。(一一)正常形态正常形态 1.53m，呈圆形、椭，呈圆形、椭圆形、逗点形或不规则圆形、逗点形或不规则形；胞质呈淡蓝或粉红，形；胞质呈淡蓝或粉红，中心有若干细小紫红色中心有若干细小紫红色颗粒，无细胞核，血片颗粒，无细胞核，血片上
12、上35成群。成群。血小板血小板（血涂片）（血涂片）(二二)异常形态异常形态 1、大小异常、大小异常（1）大血小板：直径）大血小板：直径47m，巨型血小板直，巨型血小板直径径7.5m。见于。见于ITP、巨大血小板综合征、巨大血小板综合征、脾切除等。脾切除等。（2）小血小板：直径）小血小板：直径1.5m，主要见于缺铁，主要见于缺铁贫、再障等。贫、再障等。巨大血小板巨大血小板 2.形态异常形态异常（1）幼稚形：颗粒少。）幼稚形：颗粒少。（2）老年形）老年形:边缘不规则，颗粒粗，呈离心边缘不规则，颗粒粗，呈离心分布，有空泡。分布，有空泡。（3）病理幼稚形：体积大，胞质淡蓝，几）病理幼稚形：体积大，胞质
13、淡蓝，几乎无颗粒。乎无颗粒。（4）病理刺激形：体积增大，形态不一，）病理刺激形：体积增大，形态不一，胞质呈淡蓝胞质呈淡蓝/紫红，颗粒多而大小一致。紫红，颗粒多而大小一致。（5）退化形：大小、形态不一，有大空泡，）退化形：大小、形态不一，有大空泡，无颗粒或颗粒聚集。无颗粒或颗粒聚集。正常人异常正常人异常plt10%才有意才有意义。义。（6）血小板卫星现象：血小板粘附、围绕）血小板卫星现象：血小板粘附、围绕于中性粒细胞（或偶尔粘附于单核细胞）于中性粒细胞（或偶尔粘附于单核细胞）的现象。偶见于的现象。偶见于EDTA抗凝血血涂片中，导抗凝血血涂片中，导致血液分析仪致血液分析仪PLT减少。减少。（7）血小板“粘附”红细胞：）血小板“粘附”红细胞：3.分布异常分布异常（1）plt单个散在，不聚集：见于血小板无单个散在，不聚集：见于血小板无力症、再障、力症、再障、ITP等。等。（2）plt过度聚集：见于原发性过度聚集：见于原发性plt增多症，增多症，骨髓纤维化等。骨髓纤维化等。