1、医学微生物实验 Experiment of Medical Microbiology 巩固基础理论、基本概念巩固基础理论、基本概念 学习基本操作学习基本操作 树立无菌概念树立无菌概念 微生物实验目的微生物实验目的 实验室规则：实验室规则：1.1.必须穿白大衣；必须穿白大衣；2.2.尽量保持安静；尽量保持安静；3.3.自己的实验器材自己的实验器材(试管、平皿等试管、平皿等)注明菌种、日期、组、姓名；注明菌种、日期、组、姓名；4.4.除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸；除示教片以外，沾染过传染物的实验器材必须放入消毒缸；5.5.注意安全；不要随意调动实验室仪器。注意安全；不要随意调
2、动实验室仪器。6.6.实验结束后，泡手、洗手。实验结束后，泡手、洗手。细菌的培养法 细菌生长繁殖必要条件细菌生长繁殖必要条件 营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子 环境条件：酸碱度、渗透压、温度和必要的气体 培养基的定义培养基的定义 微生物生长繁殖所需要的营养物质混合而成的营养基 质，一般pH为7.27.6，高压灭菌后使用。培养基分类培养基分类 按其营养组成和用途不同按其营养组成和用途不同 基础培养基：基础培养基：营养培养基：营养培养基：选择培养基：选择培养基：鉴别培养基：鉴别培养基：厌氧培养基：厌氧培养基：按物理状态不同按物理状态不同 液体培养基:用于大量繁殖细菌 固体培养基:液体培养
3、基中加入1.5%2.5%琼脂粉，用于细菌分离和纯化 半固体培养基:琼脂粉含量在0.3%0.5%，用于观察细菌的动力和短期保存菌种 细菌在培养基中的生长情况细菌在培养基中的生长情况 液体培养基：表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基：菌落，菌苔固体培养基：菌落，菌苔 分离培养：分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面分散开，称分离培养。菌落：菌落：单个细菌生长后形成的肉眼可见的细菌集团叫菌落。纯培养：纯培养：挑取一个菌落接种到另一培养基中，生长出来的细菌为纯种，称为纯培养。半固体培养基：无动力 有动力 细菌培养的应用细菌培养的应
4、用 在医学中的应用 感染性疾病的病原学诊断 细菌学的研究 生物制品的制备 在工农业生产中的应用 在基因工程中的应用 实验三实验三 细菌的培养细菌的培养 培养基培养基 菌种菌种 方法方法 普通琼脂平板 大肠、金葡混和菌液 平板划线 肉汤培养基 大肠、枯草杆菌 液体接种 半固体培养基 变形、痢疾杆菌 穿刺接种 目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术目的：学习掌握细菌分离和培养的各种基本技术 斜面培养基 大肠杆菌 斜面划线 2人/组 four-area streak plate technique IV II I 1/5 I 1/10 Rotate 90 Flame loop Rotate 90
5、 Rotate 90 III 1/4 Flame loop 液体接种液体接种 斜面接种斜面接种 细菌的形态和结构 细菌的形态和结构细菌的形态和结构 细菌基本形态：细菌基本形态：球菌球菌 杆菌杆菌 螺螺 形形 菌菌 细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质细菌基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质 细菌特殊结构：细菌特殊结构：Spore Capsule Flagella Pilus？细菌的形态和结构细菌的形态和结构：观察示教片：观察示教片：9张张 观察内容观察内容 示教片示教片 重点观察重点观察 细菌细菌 基本基本 形态形态 球菌球菌 葡萄球菌葡萄球菌 链球菌链球菌 肺炎链球菌肺炎链球菌 形状
6、、大小、排列形状、大小、排列方式方式 杆菌杆菌 大肠杆菌大肠杆菌 炭疽杆菌炭疽杆菌 弧菌弧菌 霍乱弧菌霍乱弧菌 细菌细菌 特殊特殊 结构结构 荚膜荚膜 肺炎球菌肺炎球菌 荚膜大小与菌体的荚膜大小与菌体的关系关系 芽胞芽胞 破伤风梭菌破伤风梭菌 芽胞在菌体上的位芽胞在菌体上的位置、大小置、大小 鞭毛鞭毛 变形杆菌变形杆菌 鞭毛的形态、数量、鞭毛的形态、数量、位置位置 真菌形态的观察 真菌的菌落形态真菌的菌落形态 1.新生隐球菌新生隐球菌：酵母型菌落酵母型菌落；类似细菌菌落；2.白假丝酵母菌白假丝酵母菌：类酵母菌落类酵母菌落(酵母样菌落)；3.霉菌：霉菌：丝状菌落丝状菌落；多细胞真菌的菌落形式。真
7、菌镜下形态观察真菌镜下形态观察 1.霉菌小培养霉菌小培养：菌丝菌丝，孢子孢子 2.新生隐球菌墨汁涂片新生隐球菌墨汁涂片：厚荚膜、芽生孢子厚荚膜、芽生孢子 3.白假丝酵母菌白假丝酵母菌：厚膜孢子厚膜孢子、假菌丝假菌丝 革兰染色法 菌种：两个单菌落E、S 试剂：生理盐水、结晶紫、碘液、95%乙醇、沙黄 材料：酒精灯、接种环、玻片、步骤 涂片 自然干燥 固定 染色 初染：结晶紫，12滴，时间1分钟，用水冲洗。媒染：碘液，12滴，时间1分钟，用水冲洗。脱色：95乙醇数滴，时间半分钟（30秒），用水冲洗。复染：沙黄，12滴，1分钟，用水冲洗。滤纸吸干，油镜观察。抗酸染色法 标本：结核病人痰涂片，枯草涂片 试剂：石炭酸复红、3%盐酸酒精、碱性美兰 步骤 固定 染色 初染：石炭酸复红数滴，时间810分钟，用水冲洗。脱色：3%盐酸酒精数滴，时间0.51分钟（30秒），用水冲洗。复染：碱性美兰，12滴，1分钟，用水冲洗。滤纸吸干，油镜观察。