1、实验室注意事项实验室注意事项 安静有序，不要大声喧哗安静有序，不要大声喧哗 禁止在实验室喝水吃东西禁止在实验室喝水吃东西 时刻警惕生物污染时刻警惕生物污染 生物污染垃圾放入黄色塑料袋生物污染垃圾放入黄色塑料袋 实验完毕将器材放入指定收集位置实验完毕将器材放入指定收集位置 实验结束将自己的实验台打扫干净实验结束将自己的实验台打扫干净 每组组长安排每组组长安排2人值日人值日 不得迟到早退，实习过程必须穿白大衣不得迟到早退，实习过程必须穿白大衣 血液一般检查血液一般检查 General Examination Of Blood 北医三院检验科北医三院检验科 Department of laborat
2、ory medicine,Peking University Third Hospital Content 1.血液标本采集（血液标本采集（Collection）2.全血细胞计数全血细胞计数（CBC）1.血液标本采集血液标本采集 Blood specimen collection 熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法熟悉毛细血管与静脉穿刺采血方法 掌握真空采血管的种类与正确使用掌握真空采血管的种类与正确使用 正确分析检验结果与血液标本采集的关系正确分析检验结果与血液标本采集的关系 血标本采集器材血标本采集器材 毛细血管采血毛细血管采血 一次性采血针一次性采血针 一次性微量吸管一次性微量吸管 消毒棉签
3、消毒棉签 安尔碘皮肤消毒剂安尔碘皮肤消毒剂 静脉穿刺采血静脉穿刺采血 一次性采血针一次性采血针 持针器持针器 止血带止血带 枕垫枕垫 消毒棉签消毒棉签 安尔碘皮肤消毒剂安尔碘皮肤消毒剂 真空采血管真空采血管 真空采血管真空采血管 Vacuum tube Cap color Additive Specimen type Anticoagulant function Utilization Red No Serum Chemistry Serology Yellow Separation gel Serum Accelerate coagulation Chemistry Serology Lig
4、ht blur Sodium citrate Plasma Ca elimination Coagulation Green Lithium heparin Plasma Enhance AT activity Chemistry Grey Sodium fluoride Plasma Glycolysis inhibiton Glucose Lavender EDTA Whole blood Ions elimination Ca,Mg Hematology 毛细血管采血毛细血管采血 Specimen collection by capillary puncture 实质是微动脉、微静脉和毛
5、细血管的混合血，含有细胞间实质是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，含有细胞间质和细胞内液。质和细胞内液。用血量少，适用于婴儿、大面积烧伤、需频繁采血进行检用血量少，适用于婴儿、大面积烧伤、需频繁采血进行检查的病例。查的病例。多选择手指或耳垂部位采血。多选择手指或耳垂部位采血。穿刺必须够深，使血液自行流出或仅轻施压力即可流出。穿刺必须够深，使血液自行流出或仅轻施压力即可流出。微量吸管的容量必须准确，内腔一定要干燥，否则会影响微量吸管的容量必须准确，内腔一定要干燥，否则会影响吸血量和导致溶血。吸血量和导致溶血。静脉穿刺采血静脉穿刺采血 Specimen collection by venipunc
6、ture 静脉采血法适用于用血量较多的检查项目。静脉采血法适用于用血量较多的检查项目。静脉血标本代表性大，各项成分相对稳定，可反映病人整体状静脉血标本代表性大，各项成分相对稳定，可反映病人整体状态，可广泛用于各项检查。态，可广泛用于各项检查。如果发生晕针，立即拔针，平卧休息。如果发生晕针，立即拔针，平卧休息。体表浅静脉几乎都可以作为采血部位，通常采用肘部静脉。体表浅静脉几乎都可以作为采血部位，通常采用肘部静脉。注意受检者采血的体位、情绪、运动状态、使用某些药物等因注意受检者采血的体位、情绪、运动状态、使用某些药物等因素。素。真空采血过程无血液外溢和污染，运送方便。封闭状态，无需真空采血过程无血
7、液外溢和污染，运送方便。封闭状态，无需容器间转移，减少溶血，避免环境暴露的影响。容器间转移，减少溶血，避免环境暴露的影响。2.全血细胞计数（全血细胞计数（CBC）了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与了解血液分析仪的各项参数、参考值、操作方法与结果分析结果分析。掌握血细胞计数板的使用方法。掌握血细胞计数板的使用方法。掌握血涂片的制备和瑞特掌握血涂片的制备和瑞特-吉姆萨染色。吉姆萨染色。掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种掌握显微镜法外周血分类计数的方法、各种WBC的正常形态。的正常形态。血液分析仪血液分析仪 Hematology Analyer 两大功能两大功能 细胞计数功能细胞计数功
8、能 细胞分类功能细胞分类功能 原理原理 电阻抗法电阻抗法 光散射法光散射法 Sysmex KX-21：三分群：三分群 Beckman Coulter STKS：五分类五分类 电阻抗原理电阻抗原理 Principle of electrical impedance Coulter principle 根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电根据血细胞相对非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小解质溶液中的血细胞颗粒，在通过计数小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测定。进行计数和体积测定。电阻抗原理计数电阻抗原理计数 Princip
9、le of electrical impedance 将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（的容器中，将小孔管（transducer）插进细胞）插进细胞悬液中。悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。接通电源后，位于小孔两侧的电极产生稳定的接通电源后，位于小孔两侧的电极产生稳定的电流。电流。当细胞通过小孔时，瞬间引起了电压变化而出当细胞通过小孔时，瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。现一个脉冲信号。脉冲大小反映细
10、胞体积大小，脉冲数量代表细脉冲大小反映细胞体积大小，脉冲数量代表细胞数量。胞数量。Sysmex KX-21 电阻抗原理分类电阻抗原理分类（三分群）不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异，根据不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异，根据这些脉冲大小，可对白细胞进行分群。这些脉冲大小，可对白细胞进行分群。小细胞区：主要是淋巴细胞小细胞区：主要是淋巴细胞 单个核细胞区单个核细胞区(也也 称作中间细胞称作中间细胞):主要包括单核细胞、嗜酸性粒细主要包括单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞胞、嗜碱性粒细胞 大细胞区：主要是中性粒细胞大细胞区：主要是中性粒细胞 容量、电导、光散射检
11、测原理（容量、电导、光散射检测原理（VCS）Volume conductivity light scantter Volume：应用电阻抗原理测量细胞体积：应用电阻抗原理测量细胞体积 Conductivity：根据细胞壁能产生高频电流：根据细胞壁能产生高频电流的性能，采用高频电磁探针，测量细胞内部的性能，采用高频电磁探针，测量细胞内部结构，即以细胞核和细胞质的比例、细胞内结构，即以细胞核和细胞质的比例、细胞内颗粒的大小和密度，来辨别体积相同，但性颗粒的大小和密度，来辨别体积相同，但性质不同的两个细胞群体。质不同的两个细胞群体。Light scatter:来自激光的单色光直接扫描进来自激光的单色
12、光直接扫描进入计数敏感区的每一个细胞，根据细胞产生入计数敏感区的每一个细胞，根据细胞产生的不同角度的散射光的不同角度的散射光(1070)，可提供细胞，可提供细胞形态、核结构等光散射信息，并能鉴别细胞形态、核结构等光散射信息，并能鉴别细胞颗粒的构型和质量（粗颗粒的光散射比细颗颗粒的构型和质量（粗颗粒的光散射比细颗粒更强）；光散射可区别粒细胞的类型。粒更强）；光散射可区别粒细胞的类型。Volume conductivity light scantter Beckman Coulter STKS 血涂片制备血涂片制备 Preparing blood smear Wright-Giemsa solut
13、ion ingredients 酸性染料伊红（钠盐）和碱性染料美蓝（氯盐）伊红钠盐有色部分为阴离子，可与带正电荷的物质结合。氯化美蓝有色部分为阳离子，可与带负电荷的物质结合。二者溶解在甲醇中形成可溶性的伊红化美蓝溶液，既可以固定细胞又利于细胞蛋白质选择性地吸附其中有色离子而着色。氯化美蓝放置久后可氧化为天青，对细胞核染色加强，添上更多色彩，染色效果更好。Wright-Giemsa staining principle 血红蛋白、嗜酸性颗粒均为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色。细胞核的核蛋白与原、幼细胞的胞质为酸性物质，故与碱性染料美蓝和天青相结合，染成深蓝色或深紫红色。中性颗粒与美蓝和
14、伊红同时结合而染为淡紫红色。瑞氏染粉是由伊红化美蓝组成，对胞质及中性颗粒的着色性极佳，面姬姆萨染粉由天青、伊红组成，对细胞核着色较好，结构显示更清晰。蛋白质所带电荷随溶液的 pH而定。故为使血片每次染色效果好且趋于一致，需配制pH6.46.8的缓冲液。Wright-Giemsa staining procedure 滴加瑞-姬复合染液数滴于血涂片上（以盖住血膜为度），静置约半min，目的在于用染液的甲醇成分固定血细胞。加相当于染液2倍量的缓冲液充分混匀。染色约l0min，用水冲去染液，干燥后镜检。白细胞分类计数 White blood cell differential count,DC 先用
15、低倍镜选好薄厚适宜、染色先用低倍镜选好薄厚适宜、染色良好、细胞分布均匀处，再用油良好、细胞分布均匀处，再用油浸镜观察。浸镜观察。通常计数通常计数100个白细胞。个白细胞。按图所示方向移动血涂片，将所按图所示方向移动血涂片，将所遇到的各类白细胞分别记录，直遇到的各类白细胞分别记录，直到计数到计数100个白细胞为止。个白细胞为止。计算每类白细胞的数目，即其百计算每类白细胞的数目，即其百分数值。分数值。Neutrophils(band)15%Neutrophils(segmented)5070%Eosinophils 0.55%Basophils 0-1%Lymphocytes 20-40%Mono
16、cytes 38%血细胞形态学识别规律 原则：核浆兼顾，以核为主 次序：胞体、胞浆、胞核、核仁 红细胞形态 红细胞大小不均红细胞大小不均(anisocytosis)红细胞结构异常红细胞结构异常 Howell-Jolly body,Cabot ring 球形红细胞球形红细胞 椭圆形红细胞椭圆形红细胞 口形红细胞口形红细胞 棘形红细胞棘形红细胞 靶形红细胞靶形红细胞 泪滴形红细胞泪滴形红细胞 镰形红细胞镰形红细胞 锯齿形红细胞锯齿形红细胞 棘形红细胞棘形红细胞 红细胞缗钱状形成红细胞缗钱状形成 Neutrophils 胞体胞体1015m 胞浆量多，淡红色，含许胞浆量多，淡红色，含许多淡紫红色小颗粒多淡紫红色小颗粒 胞核胞核 band 凹陷的程度超过核凹陷的程度超过核直径的一半，核最窄径大直径的一半，核最窄径大于最宽径的于最宽径的1/3，核弯曲成，核弯曲成带形、带形、S形、形、U形、形、W形等。形等。核染色质粗糙，浓集成小核染色质粗糙，浓集成小块状，染色不均匀。块状，染色不均匀。Segmented 通常分通常分25叶，叶，彼此间有较细的核丝或较彼此间有较细的核丝或较粗的核桥，核最窄径小于粗的