1、血液学检验 检验教研室 马雪莲 2016-1-10 中西医结合学院 血液病离我们远吗 绪 论 概论 发展史 与检验关系 绪 论 概论 一 血液学（hematology）二 临床血液学（clinical hematology）三 临床血液学检验（hematologic laboratory science）概论 发展史 与检验关系 绪 论 概论 一 血液学（hematology）：研究对象：血液、造血组织 研究内容：概论 发展史 与检验关系 绪 论 概论 二 临床血液学：研究对象：血液病（原发、继发）概论 发展史 与临床关系 病因、病机、临床表现、诊疗 绪 论 概论 发展史 与检验关系 绪 论
2、概论 发展史 与检验关系 临床临床科室科室-血液科血液科 绪 论 概论 三 临床血液学检验：概论 发展史 与检验关系 临床 血液学检验 血液理论 基础 绪 论 概论 三 临床血液学检验：临床血液学实验室临床血液学实验室 概论 发展史 与检验关系 绪 论 发展史#血液探索史：中国 西方#血液学研究史-显微镜发明：一.血细胞 二.血栓与止血 三.造血干细胞 四.血液学检验发展史 概论 发展史 与检验关系 绪 论 血液探索史 概论 发展史 与检验关系 公元前400年内经-藏神主血脉，刺络放血 吸血吸血强身强身 公元前400年希波克拉底 16世纪末期-荷兰人制作简易显微镜 1628年哈维提出了血液循环
3、 1674年列文年列文虎虎克观察血液克观察血液 1799年开国年开国总统华盛顿总统华盛顿-死于放血疗法死于放血疗法 1840年年-维维多利亚多利亚女王女王家族血友病家族血友病 中国 西方 乔乔治治 华盛顿华盛顿-美国美国首任总统首任总统（17321799）维多利亚女王维多利亚女王（18191901）哈维哈维-英国科学家英国科学家（1578-1657）绪 论 血液探索史 我国古代：石器时代-砭石放血治病 公元前400年内经-“藏神”和“主血脉”,刺络放血 “滴血认亲”西方：早期曾崇拜，神秘血液-吸血强身 古希腊医圣希波克拉底（公元前460年-前370年）-血在四种体液中占主导地位 中世纪（公元5
4、00-1500)理发师用柳叶刀放血 16世纪末期-荷兰人制作简易显微镜，1628年哈维提出了血液循环 1674年荷兰亚麻商人安东尼 凡 列文虎克-血液由含有非常小的圆球状物的水晶体般雾状 的水组成，测量了它们的大小 1799年开国总统华盛顿-死于放血疗法，20世纪逐渐淘汰 1840年-维多利亚女王的9子中，3/4男为血友病，5女为携带者-皇室遗传病 概论 发展史 与检验关系 绪 论 血液研究发展史-显微镜发展显微镜发展 概论 发展史 与检验关系 16世纪末世纪末-简易显微镜简易显微镜-放大几十倍放大几十倍 19世纪世纪-普通光学显微镜普通光学显微镜-分辨率分辨率1微米（放大率极限微米（放大率极
5、限2000倍）倍）显微结构显微结构 2个世纪个世纪 绪 论 血液研究发展史-显微镜发展显微镜发展 概论 发展史 与检验关系 电子显微镜电子显微镜-分辨率分辨率10nm （放大率上万倍）（放大率上万倍）超微结构（亚显微结构）超微结构（亚显微结构）绪 论 血液研究发展史-显微镜发展显微镜发展 概论 发展史 与检验关系 纳米纳米显微镜（扫描探针显微镜）显微镜（扫描探针显微镜）分辨率分辨率0.1nm （放大率百万倍）（放大率百万倍）实现原子水平的观察及操控实现原子水平的观察及操控-纳米生物学纳米生物学 扫描探针示意图 纳米显微镜照片纳米显微镜照片 绪 论 血液研究发展史 一 血细胞发展史 16世纪到1
6、7世纪-显微镜-红细胞、白细胞及血小板。19世纪-计数法的改善，红细胞来源于骨髓及建立血细胞染色法-形态学阶段。1900年-ABO血型确立-开创输血领域。1945年-Coombs建立抗人球蛋白试验-对免疫血液学做出贡献。1949年-镰状贫血是Hb异常而提出“分子病”-分子水平。概论 发展史 与检验关系 绪 论 1.红细胞认识 概论 发展史 与检验关系 一 血细胞发展史 1871-1876年-发现了红细胞有携氧能力，且参与组织的呼吸作用。20世纪20年代-红细胞体外保存需葡萄糖，30年代体外保存血液，40年代建立血库 1946年-红细胞寿命120天左右，1959年以后对红细胞糖代谢全面了解。20
7、世纪80年代-A、B型转化为O型血成功，Rh阳性转换为Rh阴性。绪 论 一.血细胞发展史 2 白细胞认识 1892-1930年-白细胞有趋化、吞噬和杀菌作用。1910年-单核细胞为“打扫战场的清道夫”，1976年之后称之为“单核吞噬细胞系统”。1959年-淋巴细胞转化为免疫母细胞并能分裂增殖，浆细胞是B淋巴细胞转化。B淋巴细胞产生抗体，T淋巴细胞产生细胞因子。概论 发展史 与检验关系 白细胞 单核细胞 淋巴细胞分裂 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史-血细胞发展史 3 血小板认识 1842年发现血小板，40年后了解到止血和修复血管作用，1923年发现其粘附和聚集功能。血小板超微结构研究
8、近年发现血小板颗粒 绪 论 概论 发展史 与检验关系 二 血栓与止血的发展史 2000年以前，犹太人记载了血友病 20世纪50年代后对凝血机制有了深入了解 60年代凝血机制的“瀑布学说”得到公认 70年代发现新的凝血与纤溶相关因子 80年代开展对纤维连接蛋白等粘附因子的研究 90年代至今，完善并拓宽“瀑布学说”，拓宽血栓与止血的研究领域。分子水平研究：对内皮细胞、血小板、凝血和纤溶等在血栓中的作用从分子水平有了更深入的了解。发展史 绪 论 概论 发展史 与检验关系 18961896年年，WilsonWilson在著作在著作中用到“干细胞”中用到“干细胞”19811981年年EvansEvans
9、和和MartinMartin从从小小鼠鼠胚囊内细胞团分离胚囊内细胞团分离出出胚胎干细胞胚胎干细胞 发展史 三 造血干细胞发展史 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 三 造血干细胞发展史 2020世纪提出造血干细胞概念，世纪提出造血干细胞概念，6060年代初，年代初，TillsTills等用等用致死量致死量射线照射射线照射 小小鼠进行骨髓移植，发现造血干细胞鼠进行骨髓移植，发现造血干细胞 19841984年，年，CivinCivin提出表达提出表达CD34CD34抗原细抗原细胞即造血干细胞。胞即造血干细胞。19791979年，体外成功培养人造血祖细胞。年，体外成功培养人造血祖细胞。1990
10、1990年年，造血干，造血干细胞移植治疗遗传病、细胞移植治疗遗传病、白血病和再障白血病和再障。绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 三 造血干细胞发展史 干细胞(stem cell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。胚胎干细胞（ES细胞）1 根据发育阶段 成体干细胞 存在于成熟个体各组织中的干细胞 2 根据发育潜能 全能干细胞（TSC细胞）：胚胎干细胞 多能干细胞：造血干细胞，神经干细胞 专能干细胞：肝脏干细胞，肠上皮干细胞 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 三 造血干细胞发展史 胚胎干细胞胚胎干细胞是早期胚胎中分离出来的一类细胞，它具有体
11、外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。绪 论 概论 发展史 与检验关系 1 胚胎干细胞研究在美国颇具争议 发展史 三 造血干细胞发展史 2 美国科学家从成体动物提取成体干细胞，并不能转化成各种器官组织，不能取代胚胎干细胞。3 iPSiPS细胞细胞是将多能遗传基因导入皮肤等细胞中而成。让普通体细胞“初始 化”具备干细胞功能即iPS细胞 iPS细胞和ES细胞除了不能生成胚胎以外，可以产生所有细胞，如用于医疗，那么理论上可以治愈所有疾病凡是不好的组织去除，替换为重新生长的正常组织。绪 论 概论 发展史 与检验关系 血细胞是造
12、血干细胞增殖和分化的结果血细胞是造血干细胞增殖和分化的结果。不断不断生成生成新细胞替代新细胞替代衰老退衰老退变细胞变细胞，维持，维持体内各类体内各类细胞恒定细胞恒定。造血干细胞造血干细胞是由胚胎干细胞发展而来，具有是由胚胎干细胞发展而来，具有高度自我更新和多向分化两个基本特征高度自我更新和多向分化两个基本特征 发展史 三 造血干细胞发展史 绪 论 概论 发展史 与检验关系 四 血液学检验的发展史 发展史 无染色无染色的血细的血细胞形态胞形态学检验学检验时期时期 染色的染色的血细胞血细胞形态学形态学检验时检验时期期 骨髓细骨髓细胞形态胞形态学检验学检验时期时期 骨髓组骨髓组织学检织学检验时期验时
13、期 细胞化细胞化学染色学染色检验时检验时期期 细胞免细胞免疫学疫学（免疫（免疫化学）化学）检验时检验时期期 细胞遗细胞遗传学检传学检验时期验时期 分子生分子生物学及物学及基因检基因检验时期验时期 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 四 血液学检验的发展史 1 无染色的血细胞形态学检验时期（17世纪后期19世纪中期）1852-1867年，血细胞显微镜计数（包括血细胞吸管、血细胞计数板）绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 四 血液学检验的发展史 2 染色的血细胞形态学检验时期（19世纪中期起)1856年，Erb用某些合成染料染血液 1879年，Ehrlich(德国细菌学家欧立希）用纺织
14、染料染色固定血涂片 1898年，Ehrlich等报告三酸染色法（橘黄G、甲基绿及酸性品红组成的混合染色液）1891年，Romanowsky（罗曼若夫斯基）用改良的甲基蓝混合染色液鉴定疟原虫，并可区分不同的白细胞 1902年,Wright,Giemsa改进染色剂 Romanowsky型混合物染色剂具有良好的染色效果，直到现在其基本配方仍被广泛使用，这一混合染色剂由甲基蓝、伊红和天青组成，依据染色后细胞的大小、形状及色彩深浅进行鉴别 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 四 血液学检验的发展史 2 染色的血细胞形态学检验时期（19世纪中期起)绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 四 血液学
15、检验的发展史 3 骨髓细胞形态学检验时期（20世纪20年代起）1903年，Wolff首创骨髓穿刺术，用于动物实验。同年，Pianess应用于人体 1929年，Arinkin用改进的简便胸骨穿刺吸引法，在住院病人身上获取胸骨骨髓涂片，为骨髓检查奠定了基础 绪 论 概论 发展史 与检验关系 发展史 四 血液学检验的发展史 4 骨髓组织学检验时期（20世纪20年代-70年代进入快速发展时期）骨髓病理组织学研究与骨髓抽吸物涂片检查几乎同时起步 20世纪70年代起，骨髓活组织工具改良以及新技术应用，特别是不脱钙组织块塑料包埋半薄切片技术的应用，使骨髓病理组织学检查快速发展 绪 论 概论 发展史 与检验关
16、系 发展史 四 血液学检验的发展史 5 细胞化学染色检验时期（20世纪初起,5070年代为鼎盛时期）1867年，铁的普鲁士蓝染色法，后被应用于骨髓铁染色 1909年，过氧化物酶染色 瑞士吉姆萨染色 铁染色 POX染色 绪 论 概论 发展史 与临床关系 发展史 5 细胞化学染色检验时期（20世纪初起,5070年代为鼎盛时期）1939年，苏丹黑B染色 1939年，1955年，中性粒细胞碱性磷酸酶染色 1960年，过碘酸雪夫反应 1953年1977年，各种酯酶染色 急性粒细胞白血病（急性粒细胞白血病（M M2a2a）氯乙酸）氯乙酸ASAS-D D萘酚酯酶染色萘酚酯酶染色 中性粒细胞碱性磷酸酶染色中性粒细胞碱性磷酸酶染色 正常血细胞正常血细胞PASPAS染色染色 1.原始粒细胞，呈弱阳性；2.幼稚粒细胞，呈强阳性；3.中性杆状核粒细胞，呈强阳性 绪 论 概论 发展史 与临床关系 发展史 四 血液学检验的发展史 6 6 细胞 免疫学检验时期（20世纪50年代起，80年代进入快速发展时期）20世纪40-70年代，免疫荧光标记技术,免疫酶标技术,ELISA技术 20世纪80年代，统一命名白细胞分化抗