1、第 卷第 期 年 月广 州 化 工 .艾叶中多糖和黄酮联合提取工艺及抗氧化性研究朱平平，覃智恒，彭慧倩，刘育文，刘 静，陈锦涛，彭 颖（南华大学药学院，湖南 衡阳）摘 要：为研究多糖和黄酮联合提取的最佳方案，通过乙醇回流法联合提取艾叶中的多糖和黄酮，以多糖、黄酮的提取率和 清除率作为评控指标，设计单因素实验探索乙醇浓度、提取时间、料液比、提取次数、提取温度对艾叶多糖、黄酮提取效率和抗氧化性能的影响，并进行正交试验确立最佳提取工艺。结果显示，最佳方案为乙醇浓度，料液比 ，提取温度，提取 次，每次 。该工艺提取效率良好，药物能保持较好的抗氧化活性，可为深入开发利用艾叶提供实验基础。关键词：艾叶；黄
2、酮；多糖；提取；抗氧化；联合提取中图分类号：.文献标志码：文章编号：（）基金项目：湖南省大学生创新创业训练计划项目（：）；衡阳市科技计划项目（：）。第一作者：朱平平（），女，本科生，主要从事药物新制剂与制剂质量标准的研究。通讯作者：彭颖（），女，实验师，主要从事药物新制剂与制剂质量标准的研究。，（，）：，.，.，.，.：；艾叶为菊科植物艾叶（.）的叶，晒干贮存，性味苦辛温，入肾脾肝经。中医学表明，艾叶具有灸百病、理气血、逐湿寒、止痢等功效。可温经止血，外治皮肤瘙痒，治湿疹。艾叶含挥发油、多糖、黄酮、微量元素等活性化学成分，具有抗菌抗炎抗氧化抗过敏等药理作用。现代药理学表明，艾叶的总多糖与总黄酮
3、有较强的抗氧化活性，药用价值高。目前，艾叶中黄酮和多糖的提取研究主要为单一提取和含量测定，本实验将联合提取艾叶中的黄酮和多糖，以艾叶总黄酮、总多糖含量并结合提取溶液的抗氧化活性为质量控制评控指标，优选最佳的提取方案，为进一步开发艾叶的抗氧化活性提供理论参考，并为后续艾叶抗痘面霜的研制提供科学基础。仪器与试药.仪 器 电子天平，北京市赛多利斯仪器系列有限公司；紫外分光光度计，岛津企业管理有限公司；电子天平，上海市舜宇恒平科学仪器有限公司；集热式恒温加热磁力搅拌器，巩义市予华仪器有限责任公司。.试 药艾叶，湖北蕲阳河蕲艾科技有限公司；无水葡萄糖标准品（.），中国食品药品检定研究院；芦丁标准品（），
4、北京百灵威科技有限公司；（.），麦克林生化科技有限公司；维生素（分析纯）广东光华科技股份有限公司；无水乙醇（分析纯），湖南汇虹试剂有限公司；浓硫酸（分析纯），衡阳市凯信化工试剂股份有限公司；苯酚、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；纯净水为实验室自制。第 卷第 期朱平平，等：艾叶中多糖和黄酮联合提取工艺及抗氧化性研究 方法与结果.艾叶提取液中黄酮和多糖的测定方法.黄酮含量测定方法学考察采用芦丁作为标准品，利用（）显色体系对样品进行处理，通过 法，于 处测定其吸光度，此方法专属性强，在芦丁浓度为 范围内，同吸光度 值线性关系较好（.，.），该方法精密度（.）、重复性（
5、.）均较好，平均加样回收率为.，（.），艾叶黄酮在 内稳定性较好，显色样品稳定性差，需于 内测量完毕。.葡萄糖含量测定方法学考察采用葡萄糖作为标准品，利用苯酚浓硫酸显色体系对艾叶提取样品进行处理，通过 法，于 处测定其吸光度，此方法专属性强，在葡萄糖浓度为.范围内，同吸光度 值线性关系较好（.，.），该 方 法 精 密 度（.）、重 复 性（.）均较好、平均加样回收率为.（.），艾叶多糖在 内稳定性较好，显色样品在 内稳定性较好。.测定的方法学考察.的专属性考察取艾叶提取液和 的乙醇溶液，空白调零，在波长 范围内进行紫外波谱扫描，见图。由图 可知，其在 和.处有较大吸收峰，由于艾叶提取液在.处
6、有紫外吸收峰，结合参考文献，最终选定 作为 的测定波长。图 艾叶提取液和 溶液光谱对照图.溶液稳定性考察取 醇溶液，避光低温保存，间隔一定时间，测定其吸光度。结果见于图，新鲜配置的 溶液在 内 值下降较缓慢，因此应在 内使用完。图 稳定性.清除率的测定方法取 待测液于比色管中，加入 溶液，暗反应 ，下测得吸光度。取 艾叶稀释液和 乙醇混合为空白，取 水加入 为对照，同法测定吸光度，按照式（）计算 清除率。清除率 清除率（）（）式中：为样品的吸光度；为对照品的吸光度。.艾叶抗氧化性评估.建立 阳性对照标准曲线制备浓度为.的溶液和.的 溶液备用。用移液管分别取、溶液于 容量瓶中，定容后得 标准梯度
7、浓度溶液，按“.”下方法测定其 清除率。在 浓度.范围内同 清除率（）线性关系良好（.，.）。是 清除率为 时样品的质量浓度是评价样品的抗氧化能力和自由基清除能力的常用指标。的.。.艾叶提取液的 清除率标准曲线制备配制.溶液备用，取艾叶提取液（.）稀释 倍，用移液枪分别取、.、.、.、.、.艾叶稀释液于 容量瓶中，定容后得艾叶梯度浓度溶液。按照.下方法测定其 清除率。结果见于图，在艾叶固形物浓度在 .范围内，同 清除率线性关系良好（.，.）。艾叶提取液的.。图 艾叶 清除率标准曲线.由艾叶提取工艺单因素考察结果，可知艾叶黄酮与多糖的提取率同 清除率呈正相关关系，通过比较艾叶提取液和维生素 的
8、清除率 可知，艾叶具有良好的抗氧化性。.艾叶提取工艺单因素考察.乙醇浓度称取五组艾叶粉末，每组 （精确到.），分别与浓度为、的 乙醇溶液混合，广 州 化 工 年 月下水浴，冷凝回流提取 ，过滤，取滤液，分别测定多糖、黄酮提取率和 清除率。图 乙醇浓度与提取结果.乙醇浓度对多糖提取率影响较小，对 清除率影响较大。在 是黄酮提取率和 清除率最高，说明此浓度提取效率好，提取液抗氧化性强。综合考虑成本、提取率和 清除率，乙醇浓度选择。.提取时间称取五组艾叶粉末，每组 （精确到.），加入浓度为 乙醇溶液 ，下水浴，分别冷凝回流提取.、.、.、.、.，过滤，取滤液，分别测定多糖、黄酮提取率和 清除率。图
9、时间与提取结果.提取时间大于.时，提取率由上升转而下降，可能是由于加热时间过长，黄酮和多糖类等物质结构受到影响；也可能是醇挥发致溶剂沸点上升，破坏黄酮类物质，导致含量下降。故总提取时间选择.。.提取温度称取五组艾叶粉末，每组 （精确到.），加入浓度为 乙醇溶液 ，分别于、下水浴，冷凝回流提取.，过滤，取滤液，分别测定多糖、黄酮提取率和 清除率。图 温度与提取结果.温度从 逐渐升高到 黄酮、多糖提取率和 清除率均有上升趋势，超过 ，一定程度上，高温影响多糖的结构以及活性，多糖和黄酮提取率均受影响，时，清除率最高，可能由于过高的温度导致产生了较多的艾叶挥发油，艾叶挥发油具有很强的 自由基清除率。综
10、合能源利用和提取率的考虑，选择 作为提取温度较为合适。.料液比取 乙醇溶液 ，按料液比 、称取艾叶粉末（精确到.），混合。下水浴，冷凝回流提取.，过滤，取滤液，测定多糖、黄酮含量和 清除率。图 料液比与提取结果.影响结果如图。由图 可知，料液比为 和 时，提取率较优，出于对节约成本的考虑，单因素试验中选择 作为料液比较为合适。.提取次数称取艾叶粉末 ，加入 乙醇溶液 ，下水浴，冷凝回流提取 ，过滤，取滤液，再次加入 溶剂对滤渣同等条件下进行提取，共提取 次。分别测定多糖、黄酮含量和 清除率。图 提取次数与提取结果.提取两次后，多糖和黄酮的提取率和 清除率已趋近为零。为了节约原料，不对艾叶造成浪
11、费，应该提取两次，并可将两次的艾叶提取液混合。.正交试验在单因素实验的基础上，选取乙醇浓度、温度、料液比进行三因素三水平正交试验如表 所示，提取两次，每次 ，混合两次的滤液。考察各因素对黄酮、多糖含量和 清除率的影响。表 因素和水平 水平因素（）乙醇体积分数（）温度（）料液比（）：.正交试验结果分析采用综合加权评分法进行分析，每项权重，结果如表 所示。第 卷第 期朱平平，等：艾叶中多糖和黄酮联合提取工艺及抗氧化性研究 表 正交试验综合评分结果 试验号试验结果黄酮提取率 多糖提取率 清除率 综合评分.（）.（）（）（）.方差.（，.自由度.（.）.值.值.以综合评分作指标，个影响因子极差大小，表
12、明乙醇浓度对综合提取效率的影响最大，料液比影响最弱。方差分析显示，、因素的 值都大于.，说明乙醇浓度，料液比和温度对综合提取效率均无显著性。直观分析结果确定艾叶多糖黄酮最佳联合提取工艺为，但温度过高可能会导致艾叶中的抗氧化活性物质变性如多酚等，导致 清除率降低，结合能源利用问题选择 作为提取温度较为合适。最终确定最佳提取工艺为，即乙醇浓度，提取温度 ，料液比 。.验证试验按照优选的提取工艺重复三次实验，以平均值为结果。得到艾叶中黄酮提取率为.，为.，多糖提取率为.，为.，清除率为.，为.。表明该提取工艺有效可行。结 论本实验采用水浴冷凝回流法对艾叶中黄酮和多糖同时进行提取，并测定黄酮和多糖的提
13、取率以及 清除率，开展单因素试验，并以此结果为基础，设计正交试验全面考察各因素间的影响关系，得到最佳联合提取工艺为乙醇浓度为，提取温度为 ，料液比为 ，提取两次，每次 。该工艺在保证黄酮和多糖有较高的提取率的同时，保障了艾叶提取液较好的抗氧化性。本工艺具有提取时间短，原料利用度高，能源耗费少等优点，为艾叶中黄酮和多糖的提取提供了有效途径，并为艾叶抗氧化活性的测定和开发提供方法参考。参考文献 梅全喜.李时珍对艾叶的研究及艾叶在健康产业上的应用 年中华中医药学会第七届李时珍医药论坛暨浊毒理论论坛论文集：.国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）北京：中国医药科技出版社，：.曹玲，于丹，崔磊，等.
14、艾叶的化学成分、药理作用及产品开发研究进展药学评价研究，（）：.龚军，张茂美，刘宏伟，等.艾叶的化学成分及药理作用研究进展广州化工，（）：.梁坤伦，孙金豪，张瑞芳.艾叶的生物化学成分及药理作用研究科技创新与应用，（）：.李真真，吕洁丽，张来宾，等.艾叶的化学成分及药理作用研究进展国际药学研究杂志，（）：.胡倩，李静，刘大会，等.艾叶总黄酮提取物体内外抗氧化活性研究食品工业科技，（）：.胡岗，尹美珍，喻昕，等.艾叶多糖体外抗氧化作用研究时珍国医国药，（）：.段蓉.艾叶化学成分的提取、分离与含量测定研究天津：天津医科大学，.蔡敏.响应曲面法优化超声波辅助提取艾叶中总黄酮的工艺研究山西化工，（）：.
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16、与沉积层之间的界面张力，防止 气泡吸收在镀层（）表面。这使得 气泡不会停留在（）镀层表面，导致（）层表面形貌更加光滑，耐蚀性得到提高。.和硫脲的相互作用对（）耐腐蚀性的影响图 添加 硫脲和 制备的 腐蚀试验后（）样品的 原子深度分布图.（）前两节得出结论：硫脲会降低（）层的耐蚀性，而 可以通过增加（）层中 的含量来增强（）层的耐蚀性。因此，有必要研究 和硫脲的相互作用对（）耐腐蚀性的影响。通过在镀液中加入硫脲和，研究硫脲和 共同沉积到（）层中可能的 杂质是如何影响（）层的耐蚀性的。从图 可以得出结论，在镀浴中添加硫脲会降低（）层的耐腐蚀性，图 显示了仅镀有硫脲添加剂的（）腐蚀测试的 原子深度分布，深度处的平均 含量为.。如图 所示，通过使用 和硫脲分析腐蚀测试的（）的 深度曲线。用 和硫脲添加剂一起制备的腐蚀测试（）层的 原子深度分布，平均 含量仅为.。结果表明，的“积极”作用超过了硫脲对（）层耐腐蚀性的“消极”影响。结 论本文研究了 和硫脲对（）层耐腐蚀性能的影响。根据 原子深度剖面测试（）表面上的 含量作为测试（）试样腐蚀程度的指示。结果表明，腐蚀试验后，（）试样在 深度处的平均