1、妇女保健/论著CD4+CD8+CD64 及白细胞介素分群动态变化在妊娠期脓毒血症患者中的临床意义黄玉杰1，李德生1，张琪1，王白石2，王一旻31.天津市泰达医院检验科，天津 300457;2.天津市中新生态城医院检验科;3.天津市泰达医院重症医学科通信作者:王一旻，Email:wym7777 摘要:目的探讨 CD4+、CD8+、CD64 及白细胞介素4(IL4)分群动态变化在妊娠期脓毒血症患者中的临床意义。方法选取 2018 年 1 月2020 年 1 月天津市泰达医院收治的妊娠期脓毒血症患者 91 例作为妊娠期脓毒血症组，同期选取于行健康体检的 80 例正常妊娠产妇作为正常妊娠组，正常育龄妇
2、女 80 例作为正常育龄组。采用 FACS Canto TM 流式细胞仪检测所有研究对象中性粒细胞 CD64、CD4+T 淋巴细胞及 CD8+T 淋巴细胞水平，采用酶联免疫吸附试验法(ELISA 法)检测 IL4 水平，分析 3 组研究对象 IL4、CD4+、CD8+及 CD64 分群动态变化及与妊娠期脓毒症患者疾病严重程度、预后转归的关系。采用Pearson相关性分析 CD64、IL4、CD4+及 CD8+之间相关性。结果与正常育龄组相比，正常妊娠组、妊娠脓毒血症组 CD64、IL4及 CD8+均显著升高，CD4+显著降低，与正常妊娠组相比，妊娠脓毒血症组 CD64、IL4 及 CD8+均显
3、著升高，CD4+显著降低，差异均有统计学意义(F=40.608、101.459、29.056、32.066，均 P0.05)。与脓毒症相比，严重脓毒症、脓毒性休克患者CD64、IL4 及 CD8+均显著升高，CD4+显著降低，与严重脓毒症相比，脓毒性休克患者 CD64、IL4 及 CD8+均显著升高，CD4+显著降低，差异均有统计学意义(F=29.192、20.722、12.650、12.634，均 P0.05)。与存活组相比，死亡组患者 CD64、IL4及 CD8+水平显著升高，CD4+显著降低，差异均有统计学意义(t=20.210、19.470、8.378、11.970，均 P0.05)。
4、Pearson 相关性分析结果显示，CD64、IL4 及 CD8+之间呈正相关，CD64、IL4 及 CD8+与 CD4+呈负相关(P0.05)。结论妊娠期脓毒血症患者 CD64、IL4、CD4+及 CD8+在疾病不同阶段表现各异，随着疾病的进展，CD64、IL4 及 CD8+显著升高，CD4+降低，且与患者预后转归情况相关，临床上可经动态观察 CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群变化判断患者疾病严重程度和预后转归情况。关键词:中性粒细胞 CD64;CD4+T 淋巴细胞;CD8+T 淋巴细胞;白细胞介素4;妊娠期脓毒血症中国图书分类号:714文献标识码:A文章编号:1001-4411(2
5、023)03-0408-04;doi:10.19829/j.zgfybj.issn.10014411.2023.03.006脓毒血症属于一种因感染所致的引起的全身炎症反应综合征，临床上根据脓毒血症患者疾病严重程度分为脓毒症、严重脓毒症及脓毒性休克等，其中严重脓毒症患者在发生脓毒血症的同时多伴随着部分组织灌注不良、相关器官功能损害及低血压等症状;而脓毒性休克是指严重脓毒症患者在临床液体复苏后仍存在无法纠正的持续性低血压症状，属于严重脓毒症的特殊类型12。临床研究3 发现，妊娠期脓毒血症仍然是产妇高死亡率的一个重要影响因素，虽然目前医疗技术的不断进步，妊娠期脓毒血症的治疗已经取得了良好的成效，但目
6、前全球妊娠期脓毒血症的发病率和死亡率仍处于较高的水平。目前临床上缺乏特异性诊断妊娠期脓毒血症的指标，基于此背景，本研究中探讨 CD64、白细胞介素4(IL4)、CD4+及 CD8+分群动态变化在妊娠期脓毒血症患者中的临床意义，为临床上妊娠期脓毒血症的诊治提供参考，以降低产妇死亡率。现将研究结果报道如下。1资料与方法1.1资料来源选取2018 年1 月2020 年1 月天津市泰达医院收治的妊娠期脓毒血症患者 91 例作为妊娠期脓毒血症组，年龄 2435 岁，平均年龄(28.035.22)岁，孕周26 周 30 例，26 周分娩 52 例，分娩中 9 例，严重程度:脓毒症 53 例，严重脓毒症25
7、 例，脓毒性休克 13 例;感染部位:肺部感染45 例，尿路感染 20 例，宫内羊膜腔感染 12 例，肠道感染 9 例，皮肤软组织感染 5 例。同期选取于健康体检的 80 例正常妊娠产妇作为正常妊娠组，正常育龄妇女 80 例作为正常育龄组，正常妊娠组年龄 2335 岁，平均年龄(27.555.70)岁，孕期:早孕期21 例，中孕期 38 例，晚孕期 21 例;正常育龄妇女年龄2334 岁，平均年龄(27.085.22)岁。所有研究对象一般资料比较差异无统计学意义(P 0.05)，具有可比性。所有研究对象对本文研究均知情，签署知情同意书，并经医院伦理委员会批准，自愿参与本文研究。纳入标准:妊娠期
8、脓毒血症组符合妊娠和产褥期脓毒症管理指南4 中对此病的诊断标准;正常育龄组身体健康，无任何疾病。正常妊娠组产妇无妊娠合并症，身体健康。排除标准:冠心病、心肌梗死等急性冠脉综合征与急性心衰;肝硬化、慢性肾功能不全及严重血液系统疾病;免疫结缔组织疾病;合并变态反应性疾病者;免疫缺陷型疾病者;24 h 内死亡者。1.2方法1.2.1中性粒细胞 CD64 检测抽取所有研究对象清晨空腹静脉血 5 ml 放置于抗凝管中，采用 FACS804中国妇幼保健2023 年 2 月第 38 卷第 3 期Maternal and Child Health Care of China.February 2023，Vol
9、.38，No.3Canto TM 流式细胞仪、CD64FITC 试剂盒(美国BD 公司)检测 CD64 水平，取 50 l 加入 10 l 荧光抗体，在避光环境下反应 1 h，之后将 500 l FACS加入后混合均匀，在室温下避光反应 0.5 h，之后1 500 r/min离心处理 5 min，将上清液弃除后加入1 ml PBS，离心留细胞沉淀，应用流式细胞仪采用CD64 试剂盒检测，水平以阳性占比(%)表示。1.2.2IL4 检测抽取所有研究对象清晨空腹静脉血 3 ml，以离心半径 5 cm、转速 3 000 r/min 离心处理 10 min，分离上层血清，80 保存待检。采用酶联免疫吸
10、附试验法(ELISA 法)检测 IL4 水平，将所制备的上清液置于室温后，取出试剂盒，标记酶标板，制作标准品，以 1 2 的稀释液稀释样品;在反应 孔 上 依 次 加 入 稀 释 好 的 待 测 血 清 及 标 准 品100 l/孔，放置 37 恒温孵育箱中湿育 2 h;用专用洗涤液将反应板清洗 3 次后，加入抗体工作液(1 100倍稀释后)100 l/孔，置于 37 恒温孵育箱中湿育 45 min;继续清洗反应板 4 次后，在反应孔内加入 TMB 溶液 100 l/孔，置于 37 恒温孵育箱中湿育 45 min 后在反应孔内加入终止液 100 l/孔以终止反应，在 450 nm 波长(参考波
11、长 570630 nm)测定吸光度，经绘制标准曲线计算 IL4 水平。1.2.3CD4+、CD8+检测采用 FACS Canto TM 流式细胞仪(美国 BD 公司)检测所有研究对象CD4+T淋巴细胞及 CD8+T 淋巴细胞水平，抽取所有研究对象清晨空腹静脉血 5 ml 放置于抗凝管中，分为两管，其中对照管中加入 5 l IgG1FITC、5 l IgG1PE、5 l IgG1PC5 单抗，试验管中加入 5 l PE、5 lFITC;在室温下反应 0.5 h 后将多聚甲醛加入，稳定后使用流式细胞仪检测 CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞水平。1.2.4预后转归情况评价对妊娠期合并脓毒血
12、症组患者行为期 28 d 的随访，根据患者预后转归情况分为存活组 81 例和死亡组 10 例。1.3统计学分析采用 SPSS 20.0 统计软件进行分析处理。计量资料采用均数标准差(xs)描述，多组间比较采用方差齐性检验，两组间比较采用独立样本 t 检验，相关性采用 Pearson 相关性分析，P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.13 组研究对象 CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化比较与正常育龄组相比，正常妊娠组、妊娠脓毒血症组 CD64、IL 4 及 CD8+均显著升高，CD4+显著降低，差异有统计学意义(P0.05);与正常妊娠组相比，妊娠脓毒血症组 CD64、IL4
13、 及CD8+均显著升高，CD4+显著降低，差异有统计学意义(P0.05)。见表 1。2.2CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化与妊娠期脓毒症患者疾病严重程度的关系与脓毒症相比，严重脓毒症、脓毒性休克患者 CD64、IL4 及CD8+均显著升高，CD4+显著降低，差异有统计学意义(P0.05);与严重脓毒症相比，脓毒性休克患者CD64、IL4 及 CD8+均显著升高，CD4+显著降低，差异有统计学意义(P0.05)。CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化与妊娠期脓毒症患者疾病严重程度的关系见表 2。表 13 组研究对象 CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化
14、比较(xs)组别例数CD64(%)IL4(ng/ml)CD4+(%)CD8+(%)正常育龄组8012.461.521.820.2456.359.6430.123.02正常妊娠组8022.682.96a18.152.19a45.256.45a34.653.25a妊娠脓毒血症组9132.466.45ab43.165.46ab35.623.16ab46.966.45abF 值40.608101.45929.05632.066P 值0.050.050.050.05注:与正常育龄期组相比，a.P0.05;与正常妊娠组相比，b.P0.05。表 2CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化与妊娠期脓
15、毒症患者疾病严重程度的关系(xs)组别例数CD64(%)IL4(ng/ml)CD4+(%)CD8+(%)脓毒症5325.262.0334.153.1639.495.4637.654.12严重脓毒症2533.153.00a41.354.52a32.153.42a44.355.96a脓毒性休克1338.963.12ab50.465.86ab26.422.13ab51.248.45abF 值29.19220.72212.65012.634P 值0.050.050.050.05注:与脓毒症相比，a.P0.05;与严重脓毒症相比，b.P0.05。904中国妇幼保健2023 年 2 月第 38 卷第 3
16、期Maternal and Child Health Care of China.February 2023，Vol.38，No.32.3CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化与妊娠期脓毒症患者转归预后的相关性分析与存活组相比，死亡组患者 CD64、IL4 及 CD8+水平显著升高，CD4+显著降低，两组比较，差异均有统计学意义(均 P0.05)。见表 3。2.4CD64、IL 4、CD4+及 CD8+相关性分析CD64、IL4、CD4+及 CD8+之间 Pearson 相关性分析，结果显示，CD64 与 IL4 之间正相关(r=0.260，P0.05);CD64 与 CD8+之间正相关(r=0.386，P 0.05);CD64 与 CD4+之间负相关(r=0.361，P0.05);IL4 与 CD8+之间正相关(r=0.466，P 0.05);IL4 与 CD4+之间负相关(r=0.502，P0.05);CD8+与 CD4+之间负相关(r=0.193，P0.05)。见图 1。表 3CD64、IL4、CD4+及 CD8+分群动态变化与妊娠期脓毒症患者预后转归的相关性分析(x