1、收稿日期：2021-11-24基金项目：柳州市重点科技计划项目（编号：2019BE10601）；北京康盟医学科学发展基金项目（编号：B21103DS）作者简介：韦倩，主管药师，从事中药制剂质量控制标准研究工作，E-mail：*通讯作者：梁学政，主任中药师，从事新制剂研发及质量控制工作，E-mail：；杨婧，执业药师，从事食品药品检验和质量标准研究工作，E-mail：HPLC一测多评法同时测定银翘感冒袋泡剂中5种成分含量韦 倩1，张 蓓1，邱琼华1，李隽永1，梁学政1*，杨 婧2*（1.柳州市中医医院（柳州市壮医医院）药学部，广西 柳州 545001；2.柳州市质量检验检测研究中心，广西 柳州
2、545006）摘 要：目的 建立高效液相色法（HPLC）一测多评法同时测定银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡苷的含量。方法 运用HPLC，色谱柱：Shimazu Inertsil ODS-3（150 mm4.6 mm，5 m）；流动相：乙腈-0.2%磷酸，梯度洗脱；体积流量：1.0 ml/min；柱温35；检测波长为220 nm。通过3种校正方法分别建立各成分与连翘酯苷A的相对校正因子，计算含量，同时采用外标法和回归方程法测定含量，并对3种校正因子所得结果的差异进行比较，从而对一测多评法的准确性和可行性加以验证。结果 绿原酸、甘草苷、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡苷分别在83.
3、77670.20，6.3650.90，41.45331.60，9.1573.20，31.50252.00 g/ml范围内线性关系良好（r0.9998），平均加样回收率（RSD）分别为95.4%（0.32%），100.1%（0.96%），98.0%（0.18%），100.7%（1.37%），99.0%（0.57%）。基于3种校正法的一测多评法所得结果与外标法、回归方程法接近。结论 该方法简便准确，可用于银翘感冒袋泡剂的质量控制。关键词：银翘感冒袋泡剂；一测多评；绿原酸；甘草苷；连翘酯苷A；连翘苷；牛蒡苷；含量测定中图分类号：R927.1 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2023）0
4、1-0040-06DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2023.01.008 Simultaneous Determination of Five Constituents in Yinqiao Ganmao Tea Bags by HPLC-QAMSWEI Qian1,ZHANG Bei1,QIU Qiong-hua1,LI Juan-yong1,LIANG Xue-zheng1,YANG Jing2(1.Department of Pharmacy,Liuzhou Traditional Chinese Medical Hospital(Liujcouh Si Ywc
5、uengh YihYen),Liuzhou 545001,China;2.Liuzhou Quality Inspection and Testing Research Center,Liuzhou 545006,China)Abstract:Objective To establish an HPLC-QAMS method for the simultaneous determination of chlorogenic acid,liquiritin,forsythia glycoside A,forsythia glycoside and burdock glycoside in Yi
6、nqiao Ganmao Tea Bags.Methods The separation was carried out on a Shimazu Inertsil ODS-3 column(150 mm4.6 mm,5 m)using acetonitrile-0.2%phosphoric acid as the mobile phase for gradient elution.The flow rate was 1.0 ml/min,the detection wavelength was set at 220 nm and the column temperature was 35.T
7、hree correction methods were used to establish the relative correction factors between each constituent and forsythoside A,respectively,then to calculate the amount of each constituent and finally to achieve QAMS.At the same time,the external standard method and the regression equation method were u
8、sed to determine the amounts of the above 5 constituents.The difference between the calculated values and real data of the three factors was compared and the accuracy and feasibility of QAMS were validated.Results Chlorogenic acid,liquiritin,forsythia glycoside A,forsythia glycoside and burdock glyc
9、oside showed good linear relationships within the ranges of 83.77-670.20,6.36-50.90,41.45-331.60,9.15-73.20,31.50-252.00 g/ml(r0.9998),respectively.The average recoveries(RSDs)were 95.4%(0.32%),100.1%(0.96%),98.0%(0.18%),100.7%(1.37%)and 99.0%(0.57%),respectively.The results obtained by the QAMS bas
10、ed on three correction methods were closed 40 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期to the external standard method and the regression equation method.Conclusion This simple and accurate method can be used for the quality control of Yinqiao Ganmao Tea Bags.Key Words:Yinqiao Ganmao Tea Bags;quantitative an
11、alysis of multi-components by single-marker(QAMS);chlorogenic acid;liquiritin;forsythia glycoside A;forsythia glycoside;burdock glycoside;determination银翘感冒袋泡剂是我院自制中药复方制剂，由山银花、连翘、炒牛蒡子、甘草等8味中药配伍而成，辛凉解表，清热解毒，临床上用于治疗风热感冒、发热、头痛、咳嗽及咽喉疼痛等病症，疗效确切。方中山银花和连翘均作为君药，不仅能辛凉解表、清热解毒，还可发挥芳香避秽作用。有文献报道，两药所含活性成分绿原酸、连翘苷和连
12、翘酯苷A均具有抗菌和抗炎作用1-5。此外，炒牛蒡子与甘草分别发挥散风清热、清热解毒而利咽喉的作用，据现代药理学研究表明，其主要成分牛蒡苷与甘草苷也分别可达到抗病毒和抗炎的效果6-8。由于中药复方制剂有效成分复杂多样，单一成分的含量测定无法对该制剂的质量进行整体控制，因此，目前质量控制的方法以测定多指标的成分含量为主。然而，多指标控制模式仍存在对照品不易获得、用量大，检验成本高等缺陷。若使用一测多评法，即通过测定1种稳定易得、价格低廉的有效成分，运用相对校正因子手段对其他成分的含量进行计算，便可达到降低成本的效果。此法主要通过中药所含的成分与成分之间存在的内在函数关系实现多种成分同时进行含量测定
13、。综上，本文采用HPLC一测多评法，将连翘酯苷A作为内标，同时测定银翘感冒袋泡剂中绿原酸、甘草苷、连翘酯苷A、连翘苷与牛蒡苷的含量，以期建立该制剂多指标成分质量控制模式，并为全面评价其整体质量提供依据。1 仪器与材料1.1 仪器 L C-2 0 AT 型 高 效 液 相 色 谱 仪（日 本SHIMAZU公司）；Waters e2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；XS205DU型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；AE200型电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；SK8200HP型超声清洗器（昆山超声仪器）。1.2 材料 绿原酸对照品（批号：MUST-20032310，含量99.73%），连
14、翘酯苷A对照品（批号：MUST-20032804，含量98.6%）和牛蒡苷对照品（批号：MUST-20041510，含量97.79%）（成都曼斯特）；连翘苷对照品（批号：110821-200609，含量94.9%），甘草苷对照品（批号111610-201607，含量93.1%）（中国食品药品检定研究院）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯；银翘感冒袋泡剂规格：4 g/袋，批号：20200401，20200402，20200403，柳州市中医医院（柳州市壮医医院）。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Shimazu Inertsil ODS-3（150 mm4.6 mm，5 m）；流动相：乙腈
15、（A）-0.2%磷酸（B）9，梯度洗脱（06.0 min，7.0%A10.0%A；6.016.0 min，10.0%A；16.080.0 min，10.0%A 17.0%A；80.086.0 min，17.0%A；86.0116.0 min，17.0%A23.0%A；116.0120.0 min，23.0%A；120.0125.0 min，23.0%A40%A）；体积流量1.0 ml/min；柱温35；检测波长220 nm；进样量5 l。2.2 溶液的制备2.2.1 混合对照品溶液制备 分别取绿原酸、甘草苷、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡苷对照品适量，精密称定，70%甲醇制成质量浓度分别为16.75
16、5，1.272，8.290，1.830，6.300 mg/ml的贮备液，再分别精密量取1.0 ml，70%甲醇定容至50 ml，即得（浓度分别为335.1，25.4，165.8，36.6，126.0 g/ml）。2.2.2 供试品溶液制备 取在重量差异下的银翘感冒袋泡剂10 袋，混匀，取约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，70%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。2.2.3 阴性样品溶液制备 按照银翘感冒袋泡剂的制备工艺和处方比例，分别制备缺山银花、缺连翘、食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期 41缺炒牛蒡子、缺甘草的阴性样品，按2.2.2项下方法制备，即得。2.3 系统适应性和专属性试验取上述混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液，按2.1项下色谱条件进样测定。由图1可见，绿原酸、甘草苷、连翘酯苷A、连翘苷、牛蒡苷目标色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于1.5，理论塔板数以各色谱峰计算均在10 000以上，阴性样品对该制剂中的5种成分的测定无干扰，表明此方法专属性良好。2.4 方