1、doi:10.3969/j.issn.1006-5709.2023.01.016第一作者简介:杨洋,硕士,住院医师,研究方向:糖尿病及其并发症。E-mail:852423362 通讯作者:董瑞鸿,主任医师,研究方向:糖尿病及其并发症。E-mail:2505790373 GLP-1RA 对 2 型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏脂质沉积的影响杨洋,董瑞鸿,余玲,段程慧郑州大学第五附属医院内分泌科,河南 郑州 450052【摘要】目的探讨胰高血糖素样肽 1 受体激动剂(gucagon-like peptide-1 receptor agonist,GLP-1RA)对 2 型糖尿病(type 2
2、 diabetes mellitus,T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏脂质沉积的影响。方法选取 6 8 周龄 SPF 级雄性 SD 大鼠,随机分成正常组、模型组和 GLP-1RA 组,给予模型组和 GLP-1RA 组大鼠高脂饮食,建造 NAFLD 模型,后予模型组及 GLP-1RA 组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ),建造 T2DM 合并 NAFLD 模型,GLP-1RA 组造模成功后给予利拉鲁肽 4 周,取三组大鼠的腹主动脉血检测血清 GLU、GSP、ALT、TC、TG;取
3、部分肝脏组织制备肝脏冰冻切片。结果与正常组相比,模型组和 GLP-1RA 组的大鼠体质量显著增加(P0.01),但 GLP-1RA 组大鼠的体质量与模型组相比下降(P0.05)。与正常组相比,模型组大鼠 GLU、GSP、ALT、TC、TG 明显升高(P0.01);而与模型组相比,GLP-1RA 组大鼠 GLU、GSP、ALT、TC、TG 明显下降(P0.01)。三组大鼠肝脏细胞油红 O 染色结果显示,与模型组相比,GLP-1RA 组大鼠肝脏脂肪变性的程度明显减轻。结论GLP-1RA 能明显改善 T2DM 合并 NAFLD 大鼠的血糖、血脂、肝脏功能等指标,减少肝脏内脂质沉积。【关键词】2 型糖
4、尿病;非酒精性脂肪性肝病;胰高血糖素样肽 1 受体激动剂;脂质沉积中图分类号:R575文献标识码:A文章编号:1006-5709(2023)01-0073-04收稿日期:2022-01-10The effect of GLP-1RA on liver lipid deposition in type 2 diabetes mellitus rats with non-alcoholic fatty liver diseaseYANG Yang,DONG Ruihong,YU Ling,DUAN ChenghuiDepartment of Endocrinology,the Fifth Affi
5、liated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect of glucagon-like peptide-1 receptor agonist(GLP-1RA)on hepatic lipid deposition in rats with type 2 diabetes mellitus(T2DM)complicated with non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD).MethodsMale
6、SD rats of SPF grade aged 6-8 weeks were selected and randomly divided into normal group,model group and GLP-1RA group.High-fat diet was given to the rats in model group and GLP-1RA group to build NAFLD model.Streptozotoccin(STZ)was intra-peritonelly injected into the model group and GLP-1RA group t
7、o generate T2DM rats complicated with NAFLD,then rats in GLP-1RA group was given Liraglutide for 4 weeks.Blood of the abdominal aorta of rats in all the 3 groups was collected to examine serum GLU,GSP,ALT,TC and TG.Part of liv-er tissue of every rat was also taken to undertake pathological examinati
8、on.ResultsCompared with the normal group,rats in the model group and the GLP-1RA group were significantly heavier(P0.01),although the body weight of rats in GLP-1RA group was lower than that of the model group(P0.05).Compared with normal group,GLU,GSP,ALT,TC and TG examined in model group were signi
9、ficantly increased(P0.01);and GLU,GSP,ALT,TC and TG in GLP-1RA group were significantly lower than those in model group(P0.01).Oil red O staining of liver cells in the 3 groups showed that the degree of hepatic steatosis in the GLP-1RA group was significantly reduced compared with that in the model
10、group.ConclusionGLP-1RA can significantly improve blood glucose,blood lipids and liver function in rats with T2DM combined with NAFLD,and it can also reduce lipid deposition in the liver.【Key words】Type 2 diabetes mellitus;Non-alcoholic fatty liver disease;Glucagon-like peptide-1 receptor agonist;Li
11、pid deposition糖尿病是临床常见的以糖脂代谢紊乱为主的代谢性疾病,国际糖尿病联盟(International Diabetes Federa-tion,IDF)调查数据显示,截止到 2019 年,我国糖尿病患病人数为 1.164 亿,居世界第一,约占世界糖尿病总人数的 1/41。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是以弥漫性肝细胞大泡性脂肪变37胃肠病学和肝病学杂志2023 年 1 月第 32 卷第 1 期Chin J Gastroenterol Hepatol,Jan 2023,Vol.32,No.1为特征的一组临床
12、病理综合征,由除酒精与其他明确的肝损伤因素引起,能够进展为非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)、肝 硬 化 甚 至 肝癌2。目前,在代谢紊乱性疾病如代谢综合征、2 型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)和 肥 胖 症 中,NAFLD 的患病率上升到 70%以上3,与未合并 T2DM的患者相比,T2DM 增加了 NAFLD 患者肝病相关病死率和全因死亡率的风险,且 T2DM 合并 NAFLD 的患者进展为 NASH 的风险更高,也有较高的纤维化、终末期肝病、肝癌的发生风险4。胰高血糖素样肽 1 受体激动剂(gl
13、ucagon-like peptide-1 receptor agonist,GLP-1RA)为胰高血糖样肽 1 类似物,但其稳定性更高,作用时间长。既往研究5表明,GLP-1RA 可改善机体胰岛素抵抗,减轻肝细胞脂肪变性。本研究旨在通过大鼠实验评估 GLP-1RA 对 T2DM 合并 NAFLD 肝脏脂质沉积的影响,以期为临床 T2DM 合并 NAFLD 的治疗提供更多的参考依据。1材料与方法1.1材料1.1.1SD 大鼠及分组:20 只 SPF 级雄性大鼠,6 8周龄,体质量(20020)g,购自北京维通利华实验动物有限公司。普通饲料适应性喂养 1 周,称取各组大鼠体质量,并根据股动脉采血
14、检测大鼠血糖(glucose,GLU)、糖化血清蛋白(glycated serum protein,GSP)、谷丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆固醇(total cholestero,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)是否存在差异,随机分成正常组 7 只、模型组 7 只和 GLP-1RA 组 6 只,每组大鼠置于通风、干燥、清洁、恒温(24 )、恒湿的动物房饲养,自然光照射,保证充足的食水。1.1.2主要试剂和仪器:基础饲料按照实验动物饲养国家统一标准定制(GB14926-2001),高脂饲料购自美国 Research Diet
15、s 公 司,链 脲 佐 菌 素(streptozotocin,STZ)购自美国 Sigma 公司,利拉鲁肽注射液即 GLP-1RA 购自诺和诺得制药有限公司,油红 O 购自北京索莱宝科技有限公司,ALT 测定试剂盒、TG 测定试剂盒、TC 测定试剂盒、葡萄糖测定试剂盒、糖化血清蛋白测定试剂盒均购自长春汇力生物科技有限公司。1.2方法1.2.1T2DM 合并 NAFLD 模型构建:正常组大鼠普通饮食,模型组及 GLP-1RA 组大鼠改用高脂饲料喂食高脂饲料配方(含脂肪 38.5%):酪蛋白、胱氨酸、玉米淀粉、麦芽糊精、蔗糖、纤维素、豆油、猪油、复合矿物质等。10 周后随机选取正常组和模型组大鼠各
16、 1只,取肝脏组织并进行病理切片,若出现脂质沉积则说明 NAFLD 造模成功。将模型组与 GLP-1RA 组各 6 只NAFLD 模 型 大 鼠 禁 食 不 禁 水 至 少 12 h,给 予 STZ 35 mg/kg(预实验阶段给予 30 mg/kg,少部分大鼠未达到糖尿病标准,即 GLU16.7 mmol/L,实验阶段改为 35 mg/kg)6一次性腹腔注射,正常组大鼠腹腔注射相应体积的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液,3 d 后剪大鼠尾静脉取血,若 GLU16.7 mmol/L 则表示糖尿病造模成功。1.2.2给药方法:造模成功后,正常组大鼠继续喂食基础饲料,模型组和 GLP-1RA 组大鼠继续高脂饲料喂食,每天定时给予各组大鼠药物:正常组大鼠不作处理,GLP-1RA 组 大 鼠 腹 腔 注 射 利 拉 鲁 肽 注 射 液0.6 mgkg-1d-1,模型组大鼠腹腔注射相应体积的生理盐水。1.2.3标本采集:GLP-1RA 组大鼠腹腔注射利拉鲁肽 4 周后,三组大鼠禁食不禁水至少 12 h 后,称体质量。麻醉状态下打开大鼠腹腔,取腹主动脉血及大鼠肝脏,将大鼠迅速处死,将血液标本置于事先肝素钠抗