1、2023，Vol.26 No.1Journal of Guangxi University of Chinese MedicineHPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中4种生物碱的含量胡宇婷1，唐欣2，刘丽花1，庄雅雯1，叶莉1，梁秋云1，黄慧学1*（1.桂林医学院，广西桂林541000；2.荔浦市中医医院，广西荔浦546600）摘要：目的 测定不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的含量。方法 采用岛津Inertsil ODS3色谱柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为0.1%三乙胺（A）-乙腈（B），流速为1.0 ml/min，检测波长为245 nm，
2、进样量为10 l；测定双钩、单钩、混钩（一级、二级）、钩藤枝等不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱4种生物碱的含量。结果 钩藤碱含量由高到低依次是：钩藤枝单钩混钩（二级）双钩混钩（一级）；异钩藤碱含量由高到低依次是：钩藤枝单钩混钩（二级）双钩混钩（一级）；去氢钩藤碱含量由高到低依次是：双钩混钩（一级）混钩（二级）钩藤枝单钩；异去氢钩藤碱含量由高到低依次是：双钩混钩（一级）混钩（二级）单钩钩藤枝；四种生物碱总含量由高到低依次是：双钩混钩（一级）钩藤枝混钩（二级）单钩。结论 本研究所用方法简便快捷，可为市场划分钩藤不同商品规格提供参考依据。关键词：钩藤；桂林产；高效液
3、相色谱；生物碱；商品规格中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：2095-4441（2023）01-0040-05引文格式：胡宇婷，唐欣，刘丽花，等.HPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中4种生物碱的含量 J.广西中医药大学学报，2023，26（1）：40-44.Content Determination of Four Alkaloids in Different Commercial Specifications ofUncariae Ramulus cum Uncis from Guilin by HPLCHU Yu-ting1,TANG Xin2,LIU Li-hua1,ZHU
4、ANG Ya-wen1,YE Li1,LIANG Qiu-yun1,HUANG Hui-xue1*（1.GuilinMedicalUniversity,Guilin,Guangxi,541000;ChineseMedicineHospitalinLipucity,Lipu,Guangxi,546600）Abstract：Objective To determine the contents of rhynchophylline,isorhynchophylline,corynoxeine and isocorynoxeine in Uncariae Ramulus cum Uncis prod
5、uced in Guilin with different commercial specifications.MethodsAShimadzu Inertsil ODS3 column(4.6 mm250 mm，5 m)was used with a mobile phase of 0.1%triethylamine(A)-acetonitrile(B),a flow rate of 1.0 ml/min,a detection wavelength of 245 nm and a sample volume of 10 l.The contents offour alkaloids in
6、different commercial specifications of Uncariae Ramulus cum Uncis,such as double hook,singlehook,mixed hook(primary and secondary),and branches,including rhynchophylline,isorhynchophylline,corynoxeineand isocorynoxeine were determined.Results The content of rhynchophylline in descending order,from h
7、igh to low,listed as follows:branch single hook mixed hook(secondary)double hook mixed hook(primary);isorhynchophylline content:branch single hook mixed hook(secondary)double hook mixed hook(primary);corynoxeine con收稿日期：2022-11-08第一作者简介：胡宇婷（1997），女，在读硕士研究生，研究方向：药学*通信作者：黄慧学（1976），博士，副教授，研究方向：中药、民族药研发
8、；E-mail：药学研究 402023 年 第 26 卷 第 1 期广西中医药大学学报tent:double hook mixed hook(primary)mixed hook(secondary)branch single hook;isocorynoxeine content:double hook mixed hook(primary)mixed hook(secondary)single hook branch;total content of the four alkaloids:double hook mixed hook(primary)branch mixed hook(se
9、condary)single hook.Conclusion The methodapplied in this study is simple and quick,which can provide a reference for the market to divide the commercial specifications of different Uncariae Ramulus cum Uncis.Keywords：Uncariae Ramulus cum Uncis;produced in Guilin;HPLC;alkaloids;commercial specificati
10、ons钩藤为茜草科植物钩藤 Uncaria rhynchophylla（Miq.）Miq.ex Havil.、大叶钩藤U.macrophylla Wall.、毛钩藤U.hirsuta Havil.、华钩藤U.sinensis（Oliv.）Havil.或无柄果钩藤 U.sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝1，具有降压、抗肿瘤、抗炎、平喘、保护神经和心肌等功效2-7。2021 年，钩藤被列为广西区域特色药材之一8，桂林产的钩藤（以下简称“桂林钩”）品质优良，故桂林一直是国内4大钩藤产地之一9。本课题组在前期市场调研中发现，钩藤的商品规格仅依据钩形区分为：双钩、单钩、混钩一级（单钩
11、双钩混合，单钩不超过1/3）、混钩二级（单钩双钩混合，单钩不超过1/2）和钩藤枝（即无钩）5种规格9，至于其中的含量或药效则未见报道。吴婷婷等10采用高效液相色谱（HPLC）法测定钩藤中 3 种生物碱的含量，卓韦杰等11采用HPLC法测定不同钩藤煎剂中2种生物碱的含量。本文拟采用HPLC法测定不同商品规格桂林产钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱 4 种生物碱的含量，为钩藤的商品规格划分提供依据。1实验材料1.1仪器DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；XS-205DU电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣生化
12、仪器厂）；SHZ-型循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）；DEACX15809型安捷伦高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；KQ-400E超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。1.2材料钩藤采自桂林市荔浦，经桂林医学院黄德青副教授鉴定为钩藤Uncaria rhynchophylla（Miq.）Miq.ex Havil.；氨水（分析纯，四川西陇科学有限公司）；甲醇（色谱纯，Fisher Scientific）；二氯甲烷（分析纯，四川西陇科学有限公司）；三乙胺（分析纯，四川西陇科学有限公司）；乙腈（色谱纯，Fisher Scientific）；钩藤碱对照品、异钩藤碱对照品、去氢钩藤碱对照品、异
13、去氢钩藤碱对照品（纯度均98%）均购于成都埃法有限公司。2方法与结果2.1色 谱 条 件采 用 岛 津 Inertsil ODS3 色 谱 柱（4.6 mm250 mm，5 m），流动相为0.1%三乙胺（A）-乙腈（B），梯度洗脱（020 min，70%55%A；2030 min，55%A；3040 min，55%10%A；4042 min，10%55%A；4245 min，55%A；4547 min，55%70%A），流速为1.0 ml/min，检测波长为245 nm，进样量10 l。2.2溶液制备2.2.1混合对照品溶液的制备取钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱适量，精密称定，加甲
14、醇分别制成12 g/ml、20 g/ml、16 g/ml、20 g/ml的溶液。2.2.2供试品溶液的制备取钩藤干燥粉末1.0 g，置于锥形瓶中，加6 ml浓氨水，浸润0.5 h，加40 ml甲醇和二氯甲烷混合液（1 1，V/V），超声处理（功率400 W，频率40 kHz）0.5 h，滤过，滤液旋干，加20 ml甲醇使之溶解，离心，取上清液，即得供试品溶液。2.2.3阴性溶液的制备取缺钩藤的阴性样品，按照“2.2.2”项下方法制备，即得阴性溶液。2.3专属性试验取适量混合对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，色谱图见图1。结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢
15、钩藤碱色谱峰与相邻峰分离度良好，且阴性溶液无干扰。2.4线性关系的考察 12 分别精密吸取混和对照品溶液5 000 l、3 750l、2 500 l、1 250 l、250 l置于 5 ml容量瓶中，以甲醇定容至刻度，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以混合对照品溶液（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，结果见表1。2.5精密度试验13取混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱峰面积的相对标准偏差（RSD）值分别为 1.27%、1.62%、1.51%、1.16%（n=6），表明仪器精密度良好。412023，
16、Vol.26 No.1Journal of Guangxi University of Chinese Medicineminminmin1异去氢钩藤碱2去氢钩藤碱3异钩藤碱4钩藤碱A混合对照品溶液B供试品溶液C阴性溶液图1高效液相色谱图2.6重复性试验13取供试品6份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱 峰 面 积 的 RSD 值 分 别 为 1.92%、1.84%、1.85%、1.95%（n=6），说明该方法重复性良好。2.7稳定性试验14取供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h进行测定，结果测得钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱的 RSD 值分别为 1.28%、1.45%、1.59%、1.08%（n=7），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。2.8加样回收率试验15精密称取钩藤样品9份，分别加入混合对照品溶液低、中、高浓度各 3 份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果钩藤碱、异