1、食品工业 2023 年第44卷第 2 期 277 分析检测HPLC-MS/MS测定油菜花蜂蜜中20种磺酰脲类除草剂田亚，张淑霞，孙转莲，王向军*郑州海关技术中心（郑州 450016）摘要建立一种基于QuEChERS(Quich Easy Cheap Effecetive Rugged and Safe)前处理技术和高效液相色谱-串联质谱法同时测定油菜花蜂蜜中20种磺酰脲类除草剂残留量的方法。样品经1%甲酸乙腈溶液提取后,上清液采用PSA、C18(50 mg、25 mg)进行净化,以0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵甲醇溶液与0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相,采用Agil
2、ent超高压快速分离色谱柱RRHD Eclipse Plus C18(2.1 mm50 mm,1.8 m)进行分离,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)方式采集,采用基质匹配的标准曲线进行外标法定量。结果表明,20种磺酰脲化合物分别在0.2200 g/L和0.5200 g/L的线性范围内呈良好关系,相关系数均不小于0.999 1,检出限为0.51.0 g/kg,定量限为1.02.5 g/kg。在10,50和100 g/kg添加水平下的回收率为77.9%104.1%,相对标准偏差(n=6)为1.0%6.5%。该方法操作简单,准确灵敏,适用于油菜花蜂蜜中20种磺酰脲类除草剂残留量的同时检测
3、。关键词QuEChERS;高效液相色谱-串联质谱;油菜花蜂蜜;磺酰脲类除草剂Determination of 20 Sulfonylurea Herbicide in Rape Honey by HPLC-MS/MSTIAN Ya,ZHANG Shuxia,SUN Zhuanlian,WANG Xiangjun*Zhengzhou Customs Technology Center(Zhengzhou 450016)Abstract A method based on QuEChERS(Quich Easy Cheap Effecetive Rugged and Safe)pretreatme
4、nt technique and HPLC-MS/MS was exploited for the synchronously testing of 20 sulfonylurea herbicide vestigital in rape honey.Samples after 1%formic acid acetonitrile solution extraction,supernatant using PSA,C18(50 mg,25 mg)for purification,with methanol(0.01%formic acid-2 mmol/L ammonium formate)a
5、nd water(0.01%formic acid-2 mmol/L ammonium formate)as mobile phase,using Agilent Eclipse Plus C18 RRHD(2.1 mm50 mm,1.8 m)chromatographic column separation,using a matrix-matched standard curve,and quantitative using external standard method.The results showed that there were good relationship withi
6、n their respective linear range of 0.2-200 g/L and 0.5-200 g/L,the correlation coefficients(r)were not less than 0.999 1,detection limit range was 0.5-1.0 g/kg,and quantitative limit range was 1.0-2.5 g/kg.The recovery at fortification levels of 10,50 and 100 g/kg in rape honey was 77.9%to 104.1%wit
7、h the relative standard deviations of 1.0%-6.5%.The method was simple,accurate and sensitive,and was suitable for the rapid determination of 20 sulfonylurea herbicides residues in rape honey.Keywords QuEChERS;HPLC-MS/MS;rape honey;sulfonylurea herbicides*通信作者油菜是我国优质的蜜源植物，油菜田间的杂草以化学防除为主1-2。磺酰脲类除草剂被目前
8、各国广泛应用，且使用量较高，对于油菜田中的阔叶及禾本科杂草具有较好的防治效果3。大多数磺酰脲类除草剂属于长残效除草剂，其在农作物中的残留会对农作物造成多种危害，且残留物通过环境进入食物链，对人类具有潜在风险和毒性4-5。油菜花蜂蜜除含有丰富的维生素、果糖以外，还有大量黄酮，长期食用能够促进胃肠道消化、排毒养颜、提高免疫力、保护心血管、预防动脉粥样硬化，是日常普遍食用和保健的天然产品。蜜蜂在油菜花田采蜜，会将大量除草剂残留物传递到油菜花蜂蜜中，对人类健康产生威胁。因此，建立一种检测油菜花蜂蜜中磺酰脲类除草剂残留方法对于食品安全问题具有重要价值及影响意义。近年来，对于磺酰脲类除草剂残留量的检测方法
9、主要有气相色谱法6、高效液相色谱法7-9和液相色谱-串联质谱法10-14。采用气相色谱法分析时，由于磺酰脲类除草剂具有强极性、高沸点的特性，需要进行衍生化处理，其操作繁杂，不适合日常多残留的快速检测。采用高效液相色谱法分析时，由于液相色谱的选择性差，蜂蜜除了主要成分果糖、葡萄糖和水分外，还含有一些蛋白质、氨基酸、有机酸、多酚类物质和维生素等，基质较为复杂，当目标物检测数量多时，分离难度大，容易导致干扰物与目标待测物同时出峰，造成干扰，且许多国家对磺酰脲类除草剂的最大残留限量规定较低，高效液相色谱法灵敏度达不到限量要求。液相色谱-串联质谱法选择性高、灵敏度强、稳定性好、抗干扰能力突出，因此可作为
10、分析磺酰脲类除草剂残留量的优选方法15。关于同时测定油菜花蜂蜜中多种磺酰脲类除草剂的方法尚未有报道。试验采用QuEChERS方法进行净化处理，高效液相色谱-串联质谱法测定油菜花蜂蜜中20种磺酰脲类除草食品工业 2023 年第44卷第 2 期 278 分析检测剂的残留量，该方法操作简便快捷、灵敏度高、准确性好，可为蜂蜜中农药残留的快速测定和风险评估提供参考和借鉴。1材料与方法1.1材料与仪器1.1.1材料与试剂酰嘧磺隆、苄嘧磺隆、氯嘧磺隆、氯磺隆、醚磺隆、环丙嘧磺隆、乙氧磺隆、氟吡磺隆、氯吡嘧磺隆、甲基碘磺隆、甲基二磺隆、嗪吡嘧磺隆、甲磺隆、嘧苯胺磺隆、丙嗪嘧磺隆、吡嘧磺隆、醚苯磺隆、苯磺隆、氟
11、胺磺隆和三氟甲磺隆标准品（质量分数均97%，德国Dr.Ehrenstorfer公司）。乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA）、十八烷基硅烷键合硅胶（C18）、石墨化炭黑（GCB）：美国Agilent公司。乙腈、甲醇（色谱纯，德国默克）；甲酸（色谱纯，美国ACS）；无水MgSO4、氯化钠（分析纯，天津科密欧）；甲酸铵（色谱纯，天津科密欧）；有机滤膜（0.22 m，美国PALL）；水为GB/T 66822008分析实验室用水规格和试验方法规定的一级水；油菜花蜂蜜（购于郑州市各大超市，于20 保存）。1.1.2仪器与设备高效液相色谱-串联四极杆质谱仪LC-MS/MS，安捷伦6470（配Agilent
12、1290 Infinity 液相色谱），美国Agilent公司；电子天平（感量0.01 mg，MettLer ToLedo，XPE105-S/FACT）；台式高速冷冻离心机（5427 R，德国Eppendorf公司）；氮吹仪（N-EVAP 112，美国Organomation公司）；Heidolph multi reax多功能振荡器（德国heidolph公司）。1.2方法1.2.1标准溶液配制1.2.1.1标准储备液（1 000 g/mL）分别准确称取适量的20种磺酰脲类除草剂标准品，用乙腈溶解并定容，分别得到质量浓度为1 000 g/mL的标准储备液（折算每种标准品的纯度），在-18 条件下
13、储存。1.2.1.2混合标准中间液（10 g/mL）分别准确移取适量各标准储备液于容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，得到10 g/mL的混合标准中间液，在-18 条件下储存。1.2.1.3基质混合标准曲线将混合标准中间液（10 g/mL）根据需求稀释，得到1 g/mL的混合标准工作液，以阴性蜂蜜样品提取液配制质量浓度为0.2，0.5，1.0，5.0，10，50，100和200 g/L的标准溶液，进行测定并绘制标准曲线。1.2.2样品前处理对于未结晶的油菜花蜂蜜样品，将其混匀。对于有结晶的油菜花蜂蜜样品，在密闭条件下低于50 水浴中温热，振荡，待样品全部融化后混匀，放置室温冷却。精密称取2.00
14、g混匀后的蜂蜜于50 mL离心管中，加入5 mL水稀释，涡旋混匀2 min，加入10 mL 1%甲酸乙腈和5.0 g氯化钠，旋涡混匀2 min，以4 000 r/min离心5 min，准确量取5.0 mL上层提取液至含有50 mg PSA和25 mg C18吸附剂的50 mL离心管中，旋涡混匀2 min，以4 000 r/min离心5 min，过有机滤膜后供LC-MS/MS测定。1.2.3LC-MS/MS分析1.2.3.1色谱条件色谱柱Agilent Eclipse Plus C18 RRHD（2.1 mm50 mm，1.8 m）；柱温40；流动相B相0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵甲醇
15、溶液；A相0.01%甲酸-2 mmol/L甲酸铵水溶液；流量0.3 mL/min；进样量5 L；流动相梯度洗脱条件见表1。1.2.3.2质谱条件离子源，电喷雾ESI；正离子；扫描方式采用多反应监测MRM；干燥气流速350；干燥气温度10 L/min；雾化气压力276 kPa；鞘气流速11 L/min；鞘气温度375；毛细管电压3 500 V。2结果与讨论2.1质谱条件优化分别进行电喷雾ESI+、ESI-模式扫描，结果发现M+H+的加合离子信号高且稳定，故20种磺酰脲除草剂均为ESI+模式扫描。优化每个母离子对应的最优裂解电压，进而得到强弱不同的子离子碎片，施加不同的碰撞能量以得到最佳丰度的离子
16、，丰度值最高的离子对为定量离子，次级丰度值的离子对为定性离子。同时在MRM模式下对鞘气温度及流速、干燥器温度及流速、毛细管电压等参数做进一步优化，从而获得最优质谱条件。20种化合物的质谱参数见表1。编号化合物保留时间/min母离子m/z子离子m/z碰撞能量/eV碎裂电压/V1酰嘧磺隆4.88370.0261.1*/218.113/24112/902苄嘧磺隆7.27411.1182.1*/149.113/10112/1203氯嘧磺隆8.75415.0186.0*/213.015/10120/1204氯磺隆4.83358.0167.0*/141.015/13120/1045醚磺隆4.43414.1183.1*/157.117/9104/102表120种目标物的质谱参数及色谱保留时间转下页食品工业 2023 年第44卷第 2 期 279 分析检测2.2色谱条件优化由图1和图2可知，方法中20种磺酰脲类除草剂的峰形及分离效果较好，通过对色谱条件进行优化，选择液相色谱常用的甲醇和乙腈两种有机溶剂，由于磺酰脲类除草剂为弱酸性化合物，在甲醇、乙腈中分别加入0.01%甲酸和2 mmol/L甲酸铵，可明