1、收稿日期：2022-04-03作者简介：郑妍，主管药师，从事药品质量控制研究与临床药学，E-mail:基于HPLC-CAD技术的天舒片中8种活性成分含量测定及其稳定性研究 郑 妍1，吴雪松2（1.周口市中心医院 药学部，河南 周口 466000；2.天津药物研究院有限公司，天津 300457）摘 要：目的 采用高效液相色谱联合电喷雾检测器（HPLC-CAD），建立同时测定天舒片中天麻素、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A、阿魏酸、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A和6,7-二羟基藁本内酯含量的方法，并对天舒片的稳定性进行研究。方法 采用 Waters Xbridge Shield RP18色谱柱（25
2、0 mm4.6 mm，3.5 m），以乙腈:甲醇（1:1）（A）-0.02%五氟丙酸（B）为流动相，梯度洗脱，体积流量0.8 ml/min，柱温30，进样量20 l；CAD雾化温度为50，气压为61.5 psi，采集频率为10 Hz。同时测定天舒片在加速和长期稳定性试验条件下各成分含量的变化，为本品种稳定性和贮藏条件提供依据。结果 天麻素、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A、阿魏酸、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A和6,7-二羟基藁本内酯的线性范围分别为1.5230.44，6.03120.60，3.1062.04，3.1062.02，0.6913.78，0.7114.22，1.9539.00和5.0
3、2100.44 g/ml（r0.997）；平均加样回收率为96.93%98.69%，RSD2.0%。稳定性研究结果表明，阿魏酸松柏酯在加速条件下含量有显著下降，提示本品种不宜在高温下长时间放置；长期稳定性试验条件下稳定性良好。结论 经方法学验证，该方法具有良好的灵敏度和准确度，为天舒片的全面质量控制提供科学依据。本品种可室温贮藏。关键词：高效液相色谱联合电喷雾检测器；天舒片；含量测定；稳定性中图分类号：R927 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2023）01-0058-07DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2023.01.011Content Determ
4、ination and Stability Investigation of Eight Active Ingredients in Tianshu Tablets by HPLC-CADZHENG Yan1,WU Xue-song2 (Department of Pharmacy,Zhoukou Central Hospital,Zhoukou 466000,China;2.Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co.,Ltd,Tianjin 300457,China)Abstract:Objective To develop an HPL
5、C-CAD method for the simultaneous determination of eight active ingredients of gastrodin,parishin B,parishin C,parishin A,ferulic acid,coniferylferulate,senkyunolide A and 6,7-dihydroxyligustilide in Tianshu Tablets.Methods The chromatographic separation was performed on a Waters Xbridge Shield RP18
6、 column(250 mm4.6 mm,3.5 m)with acetonitrile:methanol(1:1)(A)-0.02%pentafluoropropionic acid(B)as the mobile phase.The gradient elution was adopted at a flow rate of 0.8 ml/min,the column temperature was set at 30,and the injection volume was 20 l.The nebulization temperature of CAD detector was 50,
7、the gas pressure was 61.5 psi,and the acquisition frequency was 10 Hz.At the same time,the content changes of components in Tianshu Tablets were determined by accelerated and long-term tests,which provided the basis for the stability and storage conditions of Tianshu Tablets.Results The linear range
8、s of gastrodin,parishin B,parishin C,parishin A,ferulic acid,coniferylferulate,senkyunolide A and 6,7-dihydroxyligustilide 58 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期were 1.52-30.44,6.03-120.60,3.10-62.04,3.10-62.02,0.69-13.78,0.71-14.22,1.95-39.00 and 5.02-100.44 g/ml(r0.997),respectively.The average recov
9、eries were 96.93%-98.69%with the RSDs2.0%.The results of stability investigation showed that the content of coniferylferulate decreased rapidly under accelerated condition,which implied that the storage time of Tianshu Tablets under high temperature condition should not be too long.The stability und
10、er long-term condition was good.Conclusion The method is sensitive and accurate,which can be used for the overall assessment of the quality of Tianshu Tablets.This variety should be stored at room temperature.Key Words:HPLC-CAD;Tianshu Tablets;content determination;stability天舒片是由川芎与天麻两味传统中药组方而成，经现代药
11、剂学技术进行剂型改造制成的中药复方制剂，现收载于2020年版中华人民共和国药典一部1，具有活血平肝、通络止痛之功效，用于淤血阻络或肝阳上亢所致的头痛日久、痛有定处，或头晕肋痛、失眠烦躁、舌质暗或有瘀斑、血管神经性头痛、紧张性头痛和高血压头痛见上述证候者。方中川芎活血化瘀、行气止痛，为君药；天麻熄风定惊、行走上窍，为臣药；二者组合配伍后产生协同作用，对偏头痛2-3、高血压眩晕4-5等具有良好的临床疗效。川芎主要活性成分是阿魏酸和洋川芎内酯A等为代表的酚酸类和苯酞类物质6-7，其中阿魏酸为本品种药典质量标准含量测定指标成分之一，具有镇痛、抗氧化、抗血小板聚集等药理活性，藁本内酯等苯酞类物质具有抗炎
12、镇痛、抗动脉粥样硬化、保护大脑神经等药理活性6。天麻的主要活性成分是天麻素，是本品种药典质量标准含量测定另一指标成分，具有降压、抗自由基、中枢神经保护等多种药理活性8-9；此外，巴利森苷也是天麻中含量较高的一类成分，具有显著的镇痛活性10-11。电喷雾检测器（charged aerosol detector，简称CAD）作为近年发展迅速的一种新型质量型通用检测器，对各种结构类型的化合物具有良好的响应一致性，且灵敏、稳定、操作简单等优势，尤其适用于无紫外吸收物质的检测12-13，目前已在中药质量研究应用领域崭露头角14-15。目前关于天舒片的质量控制研究报道较少，其含量研究中也仅围绕阿魏酸和天麻
13、素展开16-17，未见两种以上多成分的同时测定研究。中药复方制剂化学成分繁多复杂，多指标成分的质量控制更能准确反映其质量，鉴于此，本试验采用高效液相色谱联合电喷雾检测器（HPLC-CAD）技术，建立了同时测定天舒片中天麻素、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A、阿魏酸、阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A和6,7-二羟基藁本内酯等8种活性成分含量的方法，并进行稳定性研究，为天舒片多成分的质量控制提供有效手段，为其贮藏条件和保质期提供科学依据。1 仪器与试药1.1 仪器Dionex Ultimate 3000高效液相色谱仪联合Corona Veo电喷雾检测器（美国赛默飞世尔）；Waters Xbridge
14、Shield RP18（250 mm4.6 mm,3.5 m）色谱柱（美国沃特世）；CPA225D型十万分之一天平，MSE型百万分之一天平（美国赛多利斯）；索式提取器（规格：601000 ml，江苏汇达）；HDM-250B型电子调温电热套（抚州金时速）；SHH-150GSD型药品稳定性试验箱（上海仪天）。1.2 药品与试剂 天麻素对照品（批号：110807-202010，含量以95.5%计）、阿魏酸（批号：110773-201614，含量以99.0%计）（中国食品药品检定研究院）；巴利森苷A对照品（批号：CFN93112，含量98.5%）、巴利森苷B对照品（批号：CFN93113，含量99.3
15、%）、巴利森苷C对照品（批号：CFN93114，含量97.9%）（武汉中标）；阿魏酸松柏酯（批号：CHB201011，含量99.3%）、洋川芎内酯A（批号：CHB190927，含量98.5%）、6,7-二羟基藁本内酯（批号：CHB210306，含量98.8%）（成都克洛玛）。天舒片（规格：0.34 g/片，10片/板6板/盒；共6批，批号：1812331412，1812096209，1613528507，1306083864，1801072478，1812310265；江苏康缘）；川芎和天麻药材由天食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第1期 59津药物研究院有限公司吴雪松
16、副研究员分别鉴定为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎、兰科天麻属植物天麻 Gastrodia elata Bl.的干燥块茎；阴性样品自制；甲醇（分析纯，天津科密欧）；甲醇（HPLC级，美国Sigma）；五氟丙酸HPLC级，梯希爱（上海）化成；水为自制超纯水。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：Waters Xbridge Shield RP18（250 mm4.6 mm，3.5 m）；流动相：乙腈:甲醇（1:1）（A相）-0.02%五氟丙酸（B相），梯度洗脱：08 min，12%A；817 min，12%A20%A；1725 min，20%A35%A；2550 min，35%A85%A；体积流量：0.8 ml/min；柱温：30；进样量：20 l；CAD雾化器温度为50，气压为61.5 psi，采集频率为10 Hz。2.2 溶液制备 2.2.1 混合对照品溶液 精密称取阿魏酸和阿魏酸松柏酯对照品适量，置入5 ml量瓶，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1 ml含阿魏酸0.6890 mg和阿魏酸松柏酯0.7108 mg的混合对照品储备液；分别精密