1、2023 年 第 4 期 广 东 化 工 第 50 卷 总第 486 期 197 基于基于 UPLC 指纹图谱和含量测定法评价不同干燥温指纹图谱和含量测定法评价不同干燥温度对羌活药渣质量的影响度对羌活药渣质量的影响 林伟雄，陈仕妍，黄森，刘权震，罗毓，吴晓英，刘燎原*，胡懿(广东一方制药有限公司，广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东 佛山 528244)摘 要目的：建立 UPLC 指纹图谱和含量测定方法，评价不同干燥温度下羌活水提药渣的质量。方法：测定羌活药渣 UPLC 图谱以计算各共有峰的残存量，并结合聚类分析(CA)和主成分分析(PCA)优选最佳处理温度。建立含量测定方法以同时测得不同样
2、品中羌活醇和异欧前胡素的含量。结果：CA 和 PCA 得到相似的结论，将样品划分为三类。PCA 综合评分表明 60 为样品的最适烘干条件，与含量测定结果一致。结论：本研究提供了稳定且具有专属性的指纹图谱和含量测定方法，并作为羌活药渣质量评价和后续开发的参考基础。关键词羌活；药渣；UPLC 指纹图谱；含量测定；聚类分析；主成分分析 中图分类号TQ 文献标识码A 文章编号1007-1865(2023)04-0197-06 Effect of drying temperature on Quality of Notopterygii Rhizome Residues by UPLC Fingerpr
3、int and Component Determination Lin Weixiong,Chen Shiyan,Huang Sen,Liu Quanzhen,Luo Yu,Wu Xiaoying,Liu Liaoyuan*,Hu Yi(Guangdong Yifang Pharmaceutical Co.,Ltd.,Guangdong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Formula Granule,Foshan 528244,China)Abstract:Objective:To establish the
4、UPLC fingerprint chromatogram and quantification method for water-extracted residues form Notopterygii Rhizome,and evaluate its quality by different drying temperatures.Methods:UPLC characterization was performed on Notopterygium residues so that to calculate remaining quantities of the common peaks
5、,on which cluster analysis(CA)and principal component analysis(PCA)were carried out to select the optimal processing temperature.Meanwhile,content determination methods were set up for quantity calculation of notopterol and isoimperatorin simultaneously among various samples.Results:Results of CA an
6、d PCA shared the similar conclusion,in which all samples were classified into three groups.Moreover,comprehensive scoring by PCA suggested that 60 would be the optimal drying condition for the samples,which was consistent with outcomes from content analysis.Conclusion:The research provided both the
7、stable and specified fingerprint chromatogram and content analysis methods,which enabled the study reference for the quality evaluation and future exploitation of Notopterygium residues.Keywords:Notopterygium；herbal residues；UPLC fingerprint chromatogram；content determination；cluster analysis；princi
8、pal component analysis 羌活来源于伞形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang或宽叶羌活Notopterygium franchetii H.de Boiss.的干燥根茎和根1，始载于神农本草经2。具散寒解表、止痛、祛风除湿的功效，主治外感、风湿寒痹、头痛项强、上肢风湿痹痛等3。目前从羌活中分离出来的主要成分为挥发油、香豆素类、糖苷类、萜类、聚烯炔类等物质，根据现有临床药理研究，其活性主要体现在抗炎镇痛、解热、抗氧化、抗病毒等方面4。在大生产以及相关研究过程中，对羌活进行挥发油收集、制备羌活配方颗粒、制备九味羌活方等制剂时
9、，往往规定以水为溶媒进行提取5-8。因此，在水提过程中由于对香豆素等脂溶性有效物质的利用不充分，极有可能使药渣中累积较多活性物质，中药废弃物未得到有效处理从而造成相关资源的浪费和污染，对药渣的规范化处理和资源转化利用应给予及时的关注。此外，有研究表明，不同的干燥方式尤其是干燥温度，对羌活中药效成分的含量影响较大9-10。因此，本研究基于 UPLC 指纹图谱和含量测定方法，借助多模式识别法分析不同温度干燥后的羌活药渣指标变化，以全面考察烘干温度对质量的影响，旨在为羌活的后续研究和利用提供依据。1 材料材料 1.1 仪器 Thermo 型超高效液相色谱仪(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)；ACQU
10、ITY BEH C18 色谱柱(美国 Waters 有限公司)；ME204E 型万分之一天平、XP26 百万分之一天平(瑞士METTLER TOLEDO公司)；111B型二两装高速中药粉碎机(浙江瑞安市永历制药机械有限公司)；KQ-500DE 型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；DHG-9146A 型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；MilliQ Direct 8 型超纯水机(德国 Merck 有限公司)。1.2 药品与试剂 10 批羌活饮片经广东一方制药有限公司孙冬梅主任中药师鉴定为正品，主要来自四川省等产地，详细信息参见表 1；取 10 批饮片投产后的药渣，经不同干燥
11、方式烘干所得药渣样品。欧前胡素(质量分数 99.00%，批号 110826-201918)、羌活醇(质量分数 99.90%，批号 111820-201504)、异欧前胡素(质量分数 99.40%，批号 110827-201611)对照品均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，水为 Milli-Q 超纯水，其它试剂为分析纯。表表 1 羌活饮片产地及编号信息羌活饮片产地及编号信息 Tab.1 Information about origins and batch numbers of Notopterygium decoction pieces 药材编号 批次 产地 S1 Y020-20020
12、01 四川省内江市 S2 Y020-2202003 四川省内江市 S3 Y020-2202005 四川省内江市 S4 Y020-2202004 四川省内江市 S5 Y020-2005012 四川省攀枝花市 S6 Y024-2005013 四川省攀枝花市 S7 Y020-2005011 四川省攀枝花市 S8 Y020-2202021 四川省德阳市 S9 Y020-2202023 四川省德阳市 S10 Y020-2202022 四川省德阳市 收稿日期 2022-09-09 基金项目 广东省重点领域研发计划项目(2019B110209005)作者简介 林伟雄(1990-)，男，广东普宁人，硕士，主要
13、研究方向为中药饮片及配方颗粒工艺、质量标准研究。*为通讯作者：刘燎原(1965-)，男，湖南郴州人，学士，主要研究方向为中药饮片及配方颗粒工艺和质量标准研究。广 东 化 工 2023 年 第 4 期 198 第 50 卷 总第 486 期 2 方法与结果方法与结果 2.1 药渣干燥处理 将用于生产投料的10批羌活饮片进行除杂并破碎处理，加入3倍量水收油2小时后，加水提取2次，一煎加8倍量水煎煮提取1.5小时，二煎加6倍量水煎煮提取1小时，收集相应所产出的药渣，分别进行自然风干，以及50、60、70 和 80 烘干处理，打粉，过三号筛，封存；其中对每批药渣按照饮片“批次+干燥方式”的形式进行编号
14、，以 S1 为例，其药渣编号分别为 S1-自然风干、S1-50、S1-60、S1-70、S1-80。2.2 指纹图谱的测定和评价 2.2.1 色谱条件 色谱柱：ACQUITY BEH C18(150 mm2.1 mm，1.7 m，130)；流动相：乙腈(A)-0.1%磷酸，梯度洗脱(04 min，20%35%A；414 min，35%46%A；1422 min，46%50.5%A；2226 min，50.5%70%A；2627 min，70%85%A；2733 min，85%90%A；3334 min，90%20%A；3439 min，20%)；流速：0.30 mLmin-1；柱温：30；检测
15、波长：210 nm；进样体积：1 L。2.2.2 对照品溶液的配制 取欧前胡素、羌活醇、异欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成含 39、24 和 24 gmL-1的欧前胡素、羌活醇、异欧前胡素混合对照溶液。2.2.3 供试品溶液的配制 取羌活药渣粉末(过三号筛)0.5 g，精密称定，置 20 mL 量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声处理(40 KHz，300 W)30 min后，取出，放冷，摇匀，取续滤液，即得。2.2.4 稳定性试验 取同一批羌活药渣(S1-自然风干)，按“2.2.3”项制备供试品溶液，分别在 0、2、4、8、12、24 h 按照“2.2.1”项色谱条件进样。以羌活醇为参照峰
16、(S)，各峰的相对保留时间和相对峰面积RSD范围分别为0.01%0.72%和0.34%1.62%，表明供试液在 12 h 内稳定。2.2.5 精密度试验 取同一批羌活药渣(S1-自然风干)，按“2.2.3”项制备供试品溶液，按“2.2.1”项色谱条件连续进样 6 次。以羌活醇为参照峰(S)，各峰的相对保留时间和相对峰面积 RSD 范围分别为 0.02%0.68%和 0.20%1.56%，表明该方法精密度良好。2.2.6 重复性试验 取同一批羌活药渣(S1-自然风干)6份，按“2.2.3”项制备供试品溶液，按“2.2.1”项色谱条件进样。以羌活醇为参照峰(S)，各峰的相对保留时间和相对峰面积RSD范围分别为0.01%0.68%和 0.30%1.20%，表明该测定方法重复性良好。2.2.7 指纹图谱的建立与相似度计算 图图 1 混合对照品图谱混合对照品图谱 Fig.1 Chromatogram of mixed reference substance 图图 2 羌活药渣羌活药渣 UPLC 指纹图谱指纹图谱 Fig.2 UPLC fingerprint chromatogram of Not