1、中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 815 雷公藤甲素通过转化生长因子-1通路抑制 百草枯诱导的肺纤维化机制李全1，陈群2，陈宏1（1黑龙江中医药大学附属第一医院，哈尔滨 150040；2哈尔滨市阿城区人民医院，哈尔滨 150300）摘要：目的：探讨雷公藤甲素（TPL）通过转化生长因子-1（TGF-1）通路抑制抑制百草枯（PQ）诱导的肺纤维化的可能机制。方法：选用SPF级昆明小鼠40只，雌雄各半。分为对照组、模型组、雷公藤甲素组、TGF-1组，每组10只。通过细胞在显微镜下计数，用ELISA方法对TGF
2、-1含量进行检测。免疫组织化学检测E-cadherin和Vimentin。结果：对照组大鼠呼吸平稳，毛色光滑，皮肤光亮，活力强，精力充沛。与对照组比较，模型组表现为麻木、气短并伴有隆隆声、发色不规则、皮肤暗沉、活力明显下降、消瘦加重。与模型组比较，雷公藤甲素组的精神状态、食欲、毛色、体质量和活跃性均有改善。TGF-1可以恢复受雷公藤甲素抑制的细胞迁移和侵袭。与对照组比较，模型组小鼠肺组织HYP含量、血清TGF-1显著升高（P0.05）；与模型组比较，雷公藤甲素组及TGF-1组HYP含量、血清TGF-1均显著降低（P0.05），TGF-1逆转了雷公藤甲素的抑制作用。与对照组比较，模型组E-cad
3、herin蛋白水平表达下调（P0.05），Vimentin蛋白表达上调（P0.05）。与模型组比较，雷公藤甲素组及TGF-1组E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P0.05），Vimentin蛋白表达水平显著降低（P0.05），且雷公藤甲素组优于TGF-1组（P0.05）。结论：雷公藤甲素可能通过抑制TGF-1的表达来抑制百草枯诱导的肺纤维化。关键词：雷公藤甲素；转化生长因子-1；百草枯；肺纤维化基金资助：国家自然科学基金面上项目（No.81573863，No.81774197)，黑龙江省博士后资助项目（No.LBH-Z15213），中国博士后科学基金地13批特别资助（No.2020T1
4、30178），黑龙江省中医药科研项目（No.ZHY19-004）Mechanism of triptolide inhibiting pulmonary fibrosis induced by paraqua through the transforming growth factor 1 pathwayLI Quan1,CHEN Qun2,CHEN Hong1(1First Affiliated Hospital,Heilongjiang University of Chinese Medicine,Harbin 150040,China;2Acheng Peoples Hospital,H
5、arbin 150300,China)Abstract:Objective:To explore the possible mechanism of triptolide(TPL)inhibiting pulmonary fibrosis induced by paraquat through transforming growth factor 1(TGF-1)pathway.Methods:Forty SPF Kunming mice were selected,and male and female were equally divided.Four groups were divide
6、d:control group,model group,triptolide group and TGF-1 group,10 rats in each group.The cells were counted under a microscope and TGF-1 content was detected by ELISA.Immunohistochemical detection of E-cadherin and Vimentin.Results:Rats in control group had smooth breathing,shiny skin,vigorous and ene
7、rgetic.Compared with the control group,the symptoms of the model group were numbness,shortness of breath with rumbling,irregular hair color,dark skin,decreased vitality,and emaciation.Compared with model group,mental state,appetite,hair color,body weight and activity were improved in triptolide grou
8、p.TGF-1 can restore cell migration and invasion inhibited by triptolide.Compared with the control group,HYP content in the lung tissue and serum TGF-1 in the model group were significantly increased(P0.05);Compared with model group,HYP content in the lung tissue and serum TGF-1 in triptolide group a
9、nd TGF-1 group were significantly decreased(P0.05),and TGF-1 reversed the inhibition of triptolide.Compared with the control group,the expression of E-cadherin protein was down-regulated and the expression of Vimentin protein was up-regulated in the model group,with statistical significance(P0.05).C
10、ompared with model group,E-cadherin protein 研究报告通信作者：陈宏，黑龙江省哈尔滨市香坊区和平路26号黑龙江中医药大学附属第一医院，邮编：150040，E-mail：内文2.indd 8152023/2/28 10:36:08中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 816 expression in triptolide group and TGF-1 group was significantly decreased(P0.05),and Vimentin pr
11、otein expression in TGF-1 group was significantly increased(P0.05),and triptolide group was superior to TGF-1 group(P0.05).Conclusion:Triptolide may inhibit paraquat-induced pulmonary fibrosis by inhibiting TGF-1 expression.Key words:Triptolide;Transforming growth factor 1(TGF-1);Paraquat;Pulmonary
12、fibrosisFunding:General Program of National Natural Science Foundation of China(No.81573863,No.81774197),Postdoctoral Project in Heilongjiang Province(No.LBH-Z15213),The 13th Special Grant from China Postdoctoral Science Foundation Project(No.2020T130178),Science Research Project of Heilongjiang Pro
13、vincial Administration of Tradional Chinese Medicine(No.ZHY19-004)特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种慢性、进行性、间质性肺疾病，以呼吸困难为特征1。IPF的变化随着年龄的增长而增加，只有不到一半的IPF患者存活超过3年2-3。发病机制流行的假说认为纤维化是由慢性炎症过程引发的，然后是过度活跃的成纤维细胞不受控制的增殖，破坏正常的肺泡结构。这一过程类似于肿瘤细胞在外界刺激下的上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的进展4
14、。雷公藤甲素是中草药雷公藤Tripterygium wilfordii Hook.f.提取物中的主要成分，在传统中药中有悠久使用历史的天然植物产品5。雷公藤甲素具有较强的抗炎和免疫抑制作用，可用于治疗自身免疫性疾病、肾病综合征和亚急性肝炎等6。研究还表明，雷公藤甲素对乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌和结肠癌具有抗癌作用7。本实验选择人肺上皮细胞（BEAS-2B细胞）作为细胞试验研究对象，观察和探讨雷公藤甲素通过转化生长因子1（transforming growth factor 1，TGF-1）通路抑制百草枯诱导的肺纤维化的可能机制，现报告如下。材料与方法1.细胞 人肺上皮细胞BEAS-2B来源于江苏
15、凯基生物技术股份有限公司（南京）。细胞在RPMI-1640培养液（含青霉素100 U/mL、链霉素100 U/mL）中培养，加入10%胎牛血清，在37、5%CO2加湿的空气中进行养护。2.动物 SPF级昆明小鼠40只，雌雄各半，810周龄。其中雄鼠体质量为2022 g，雌鼠体质量为1820 g。购于青龙山动物繁殖中心许可证号：SCXK（苏）2021-0052，饲养于黑龙江中医药大学动物实验中心，环境温度（23.01.5），相对湿度（50.03.5）%，常规自由饮食饮水。所有实验操作的小鼠均参照 实验动物接受标准操作规程进行。3.药物与试剂 盐酸雷公藤甲素（北京百灵威科技有限公司，批号：1868
16、66），纯度：99%，密封避光低温保存，溶于0.5%羧甲基纤维素溶液中，配制成0.1 mg/mL混悬液。百草枯（北京百灵威科技有限公司，CAS：1910-42-5），溶于0.9%氯化钠溶液（湖南科伦制药有限公司，批号：2686432）中，配制成1 mg/mL溶液。10%胎牛血清（Gibco公司，美国）。波形蛋白（Vimentin）抗体购自美国BioVision（批号：3621-118）。E-钙黏蛋白（E-cadherin）抗体购自美国Cell Signaling Technology公司（批号：4221-85）。羟脯氨酸（hydroxyproline，HYP）试剂盒购自广州奥瑞达生物科技有限公司（批号：A028-9）。TGF-1试剂盒购自上海科艾博生物技术有限公司（批号：P0026B）。4.仪器 显微镜（日本尼康）；倒置相差显微镜（奥林巴斯，型号：CKX41），生物安全柜（西班牙泰事达，型号：Bio A），台式离心机型号：PICO 17，赛默飞世尔科技（中国）有限公司；电泳系统、转膜系统（型号：Mini PROTEAN，美国Bio-Rad公司），多功能酶标仪（型号：Infinite T