1、第 14 卷 第 2 期 食 品 安 全 质 量 检 测 学 报 Vol.14 No.2 2023 年 1 月 Journal of Food Safety and Quality Jan.,2023 基金项目:中央引导地方科技发展专项、河南省教育厅项目(14B180024)、漯河医学高等专科学校科研类项目(2020-LYZKYZD008)Fund:Supported by the Central Government Guides Local Science and Technology Development Projects,the Projects of Henan Provincia
2、l Department of Education(14B180024),and the College Level Innovation Project(2020-LYZKYZD008)*通信作者:王飞,博士,教授,主要研究方向为生物化学与食品科学。E-mail:*Corresponding author:WANG Fei,Ph.D,Professor,Henan Engineering Research Center of Leisure Food,No.148,Daxue Road,Yuanhui District,Luohe 462000,China.E-mail: 可可毛色二孢菌 F
3、6 胞外多糖在 草莓保鲜中的应用 罗海澜1,2,3,马翠云1,2,3,罗海淑4,张群芝1,2,3,王会娟5,赵丽芳1,2,3,王 飞1,2,3*(1.漯河医学高等专科学校,漯河 462000;2.河南省休闲食品工程技术研究中心,漯河 462002;3.河南省营养与 健康工程研究中心,漯河 462002;4.江西省吉水县金滩镇政府,吉安 331608;5.河南双汇投资发展股份 有限公司技术中心,漯河 462000)摘摘 要要:目的目的 探究可可毛色二孢菌 F6 胞外多糖在草莓保鲜中的作用。方法方法 采用形态学和分子生物学对从赣南野生松木上分离得到的产胞外多糖真菌 F6 进行鉴定;从碳、氮源及培养
4、基初始 pH 方面优化 F6 菌生长和产多糖发酵条件;用 F6 胞外多糖浸泡草莓,测量草莓的失重率、腐烂率、有机酸、维生素 C 含量及感官品质。结果结果 经形态学与分子生物学鉴定,F6 为葡萄糖座科可可毛色二孢属(Lasiodiplodia theobromae);F6 产多糖发酵的碳源为蔗糖,不加氮源,初始 pH 为 6;浸泡 F6 胞外多糖溶液能有效的保持草莓的风味、减少失重、减少腐烂、减缓维生素 C 含量降低及有机酸降解,多糖浓度 6%时效果最佳。结论结论 F6 产胞外多糖发酵成本低,胞外多糖可离心分离,浸泡草莓具有很好的保鲜效果,这为 F6 胞外多糖在果蔬保鲜及工业应用奠定了良好基础。
5、关键词关键词:胞外多糖;可可毛色二孢菌;草莓;保鲜 Application of exopolysaccharides from Lasiodiplodia theobromae F6 in strawberry preservation LUO Hai-Lan1,2,3,MA Cui-Yun1,2,3,LUO Hai-Shu4,ZHANG Qun-Zhi1,2,3,WANG Hui-Juan5,ZHAO Li-Fang1,2,3,WANG Fei1,2,3*(1.Luohe Medical College,Luohe 462000,China;2.Henan Engineering Rese
6、arch Center of Leisure Food,Luohe 462002 China;3.Henan Engineering Research Center of Nutrition and Health,Luohe 462002,China;4.Jintan Town Government of Jishui County,Jian 331608,China;5.Technology Center of Henan Shuanghui Investment&Development Co.,Ltd.,Luohe 462000,China)ABSTRACT:Objective To ex
7、plore the effects of exopolysaccharide from Lasiodiplodia theobromae F6 in strawberry preservation.Methods A strain F6 produced exopolysaccharides and isolated from Southern Jiangxi wild pine was identified by morphology and molecular biology.The conditions of F6 growth and polysaccharide fermentati
8、on were optimized from the aspects of carbon,nitrogen source and initial pH of medium.The weight loss rate,decay rate,titratable acid,vitamin C content,as well as sensory quality at every 24 h were were measured by DOI:10.19812/ki.jfsq11-5956/ts.2023.02.01592 食 品 安 全 质 量 检 测 学 报 第 14 卷 soaking the s
9、trawberries with F6 exopolysaccharide.Results F6 was identified by morphology and molecular biology a Lasiodiplodia theobromae.The carbon source for F6 exopolysaccharides fermentation was sucrose,without nitrogen source.The suitable initial pH of medium was 6.Soaking F6 exopolysaccharide solution co
10、uld effectively maintain strawberry flavor,reduce weight loss,reduce decay,slow down the reduction of vitamin C content and titratable acid degradation,and the best effect was 6%polysaccharide concentration.Conclusion The fermentation cost of exopolysaccharides produced by F6 is low,the exopolysacch
11、arides can be separated by centrifugation,and the fresh-keeping effect of soaked strawberry is good,which lays a good foundation for the preservation and industrial application of exopolysaccharides produced by F6 in fruits and vegetables.KEY WORDS:exopolysaccharides;Lasiodiplodia theobromae;strawbe
12、rry;preservation 0 引 言 多糖是一类高分子碳水化合物,具有广泛的生物活性,近年来逐渐成为食品和医疗行业的研究热点。自然界中的多糖主要来自植物、动物和微生物。近年来,微生物多糖因来源丰富,可以通过发酵以较底成本获取,在食品和医药领域开发潜力巨大,因而受到研究者的密切关注1。微生物多糖可分为胞内、胞壁和胞外多糖,胞外多糖是微生物在生长过程中代谢产生的一类糖类化合物,往往具有产量高、易分离的优点。已被开发的有黄单胞杆菌产生的黄原胶,出芽短梗霉产生的普鲁兰多糖、果聚糖,酵母等菌产生的葡聚糖14等。食品保鲜是降低食品损耗的重要技术,多糖在食品保鲜领域的应用已有不少报道,如黄原胶和普鲁
13、兰多糖57等,但普鲁兰多糖等成本高,这使其在食品领域的应用受到限制。寻找新的更有应用前景的多糖,研究并拓展其应用领域和工艺仍具有重要意义8。本研究从赣南野生松木上分离得到一株产胞外多糖真菌 F6,前期研究发现其培养过程中可代谢出大量胞外多糖9。基于此,本研究对菌株进行鉴定,优化其产多糖的发酵条件,并考查其胞外多糖在草莓保鲜中的应用效果,为多糖保鲜功能的开发利用奠定基础,也为该菌多糖应用领域的拓展提供理论参考。1 材料与方法 1.1 材料与试剂 草莓购自漯河市龙城镇草莓基地,品种为“牛奶草莓”,选取无病、无伤、果形均匀且为八分熟的草莓;菌株 F6 为实验室从江西野外松木中分离得到;基础接种培养基
14、马铃薯蔗糖固体培养基(potato sucrose agar,PSA):马铃薯200 g、蔗糖 20 g、琼脂 20 g、ddH2O 1000 mL;发酵培养基马铃薯蔗糖液体培养基(potato sucrose,PS):马铃薯 200 g、蔗糖20 g、ddH2O 1000 mL;透析袋(规格:21、扁宽 34 mm,上海桥星贸易有限公司);PE 保鲜袋脱普日用化学品(中国)有限公司。淀粉、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、甘油、氯化铵(NH4Cl)、硝酸钾(KNO3)、尿素(分析纯,天津东正精细化学试剂厂);蛋白胨、酵母膏(分析纯,北京奥博星生物技术有限责任公司);无水乙醇(分析纯,天津四友精细化
15、学品有限公司);真菌基因组 DNA 提取试剂盒(D2300,北京索莱宝科技有限公司);TaqMaster Mix 试剂盒(WE0102,上海生工生物有限公司);双蒸水为实验室自制。1.2 仪器与设备 RE2A 型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);Beckman低温高速离心机、Mastercycler Pro PCR 仪(德国 Eppendorf公司);PHS-3C 型精密 pH 计(上海雷磁仪器厂);85-2 型恒温磁力搅拌器(上海司乐仪器厂);QS56A-12N 型冷冻干燥机(上海齐强仪器制造有限公司);DHG-9053A 台式鼓风干燥箱、YCW-160A 恒温摇床(上海捷呈实验仪器有限公司
16、);SPX-111生化培养箱(上海福玛实验仪器有限公司);YP601N 型万分之一电子天平(上海天普分析仪器有限公司)。1.3 实验条件 1.3.1 F6 菌株培养、分生孢子观察及菌株鉴定 将保存于4斜面 PSA的 F6菌株接种于 PSA平板上,28培养 3 d。固体培养:无菌条件下,用打孔器在活化的 F6 PSA 平板打直径 5 mm 菌块并接种在 PSA 平板上,28培养 7 d。发酵培养:无菌条件下,用打孔器接种直径 5 mm、菌龄一致的 F6 菌块于装有 100 mL PS 的 250 mL 摇瓶中,28、200 r/min 培养 5 d。分生孢子观察:挑取在 PSA 平板培养 7 d 的菌丝制作临时装片,在显微镜下观察并拍照。F6 菌株 ITS 鉴定:参照赵丽芳等10的方法进行 F6 ITS 序列鉴定并构建系统发育树。1.3.2 发酵条件优化 以便于获取和应用的葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、麦芽糖、乳糖(20 g/L)为碳源,培养 3 d,确定马铃薯培养基的最佳碳源;同理,以不添加氮源为对照,以 NH4Cl、KNO3、第 2 期 罗海澜,等:可可毛色二孢菌 F6 胞外多糖在草莓保