1、1362 中草药 中草药 2023 年年 3 月月 第第 54 卷卷 第第 5 期期 Chinese Traditional and Herbal Drugs 2023 March Vol.54 No.5 山橙中生物碱类化学成分的研究2 李 瑞1，方忠莹1，杨梓依2，方 磊2*，周 洁1,2*1.山东中医药大学药学院，山东 济南 250355 2.济南大学生物科学与技术学院，山东 济南 250022 摘 要：目的 研究山橙 Melodinus suaveolens 茎乙醇提取物氯仿部位中的生物碱类成分。方法 采用酸溶碱沉法富集，运用正相硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱等多种色谱方法进行分离和纯化
2、，并利用一维和二维核磁共振波谱、高分辨质谱以及圆二色谱等技术鉴定化合物的结构。结果 从山橙乙醇提取物氯仿部位分离得到 12 个生物碱类成分，分别鉴定为美乐苏胺 A（1）、柳叶水甘草碱（2）、3-羰基柳叶水甘草碱（3）、白坚木胺（4）、14-长春布宁（5）、14-vincamenine（6）、3-羰基-11-甲氧基柳叶水甘草碱（7）、alstoyunine G（8）、pachysiphine（9）、洛柯宁碱（10）、土波台文碱（11）、venalstonine（12）。初步的抗肿瘤活性评价实验表明，化合物 2、810 显示出不同程度的肿瘤细胞增殖抑制活性。结论 化合物1 为1 个新的单萜吲哚类生
3、物碱，化合物 4、11 和12 首次从该植物中分离得到；化合物 10 对人肺癌 A549、人肝癌 HepG2 和人前列腺癌PC-3 肿瘤细胞具有显著的增殖抑制活性，半数抑制浓度（median inhibition concentration，IC50）分别为 7.11、0.84 和3.78 mol/L。关键词：夹竹桃科；山橙属；山橙；生物碱；美乐苏胺 A；白坚木胺；土波台文碱；venalstonine 中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：0253-2670(2023)05-1362-08 DOI:10.7501/j.issn.0253-2670.2023.05.002 Chem
4、ical constituents of alkaloids from Melodinus suaveolens LI Rui1,FANG Zhong-ying1,YANG Zi-yi2,FANG Lei2,ZHOU Jie1,2 1.School of Medicine,Shandong University of Traditional Chinese Medicine,Jinan 250355,China 2.Biological Science and Technology University of Jinan,Jinan 250022,China Abstract:Objectiv
5、e To study the alkaloids from the chloroform fraction of the ethanolic extract of the stems of Shancheng(Melodinus suaveolens).Methods The compounds were isolated and purified by acid extraction and alkaline precipitation method,silica gel column chromatography,semi-preparative high performance liqu
6、id chromatography,and other chromatographic methods.Their structures including absolute configurations were elucidated from a combination of NMR and HRESIMS data,as well as circular dichroism calculation.Results Twelve alkaloids were isolated and characterized from the ethanolic extract of the stems
7、 of M.suaveolens.Their structures were identified as melosuavine A(1),tabersonine(2),3-oxotabersonine(3),quebrachamine(4),14-vincamone(5),14-vincamenine(6),3-oxo-11-methoxytabersonine(7),alstoyunine G(8),pachysiphine(9),lochnerinine(10),tubotaiwine(11)and venalstonine(12).Compounds 2,810 showed sign
8、ificant cytotoxicities against all the tested tumor cell lines.Conclusions Compound 1 is a new alkaloid,and compounds 4,11 and 12 are isolated from M.suaveolens for the first time.Compound 10 displayed significant antiproliferation activity against A549,HepG2,and PC-3 cells with IC50 values of 7.11,
9、0.84 and 3.78 mol/L,respectively.Key words:Apocynaceae;Melodinus J.R.et G.Forst;Melodinus suaveolens Champ.ex Benth.;alkaloids;melosuavine A;quebrachamine;tubotaiwine;venalstonine 收稿日期：2022-12-02 基金项目：国家自然科学基金项目（22077049）；济南市 关于促进高校和科研院所协同创新和成果产业化的若干政策（试行）项目（2020GXRC060）作者简介：李 瑞，女，硕士研究生，主要从事中药资源及质量控
10、制研究。E-mail:*通信作者：方 磊，教授，主要从事中草药活性成分研究。E-mail:bio_ 周 洁，教授，主要从事中药资源研究。E-mail:bio_ 山橙 Melodinus suaveolens Champ.ex Benth.为夹竹桃科（Apocynaceae）山橙属Melodinus J.R.et G.Forst 木质藤本植物。山橙属植物全世界约有 53 种，主要分布于亚洲热带、亚热带地区及大西洋地区。中草药 中草药 2023 年年 3 月月 第第 54 卷卷 第第 5 期期 Chinese Traditional and Herbal Drugs 2023 March Vol.
11、54 No.5 1363 我国有 11 种，主产于广西、云南、贵州以及台湾等地区1。山橙属植物在我国民间应用历史悠久，常用于治疗小儿疝气、小腹痛、睾丸炎、小儿脑膜炎、骨折和风湿性心脏病等2。山橙属植物中的化学成分丰富，包括生物碱、三萜、木脂素类等3-6。其中，生物碱类成分是该属植物最重要的活性成分，其结构复杂多样，具有多样的生物活性，如抗炎、抗肿瘤等7-10。目前，从山橙中分离得到 40 余个生物碱，结构类型包括单萜吲哚生物碱、单萜喹啉生物碱、双吲哚生物碱等，其中单萜吲哚生物碱多具有显著的抗肿瘤活性，具有较大的研究和开发价值11-14。本研究采用酸溶碱沉法富集山橙茎的乙醇提取物氯仿部位中的生物
12、碱类成分，进一步运用正相硅胶柱色谱、半制备高效液相色谱等多种色谱方法从中分离得到 12 个生物碱类成分，利用一维和二维核磁共振波谱、高分辨质谱以及圆二色谱等技术分别鉴定为 melosuavine A（1）、柳叶水甘草碱（tabersonine，2）、3-羰 基 柳 叶 水 甘 草 碱（3-oxotabersonine，3）、白坚木胺（quebrachamine，4）、14-长春布宁（14-vincamone，5）、14-vincamenine（6）、3-羰基-11-甲氧基柳叶水甘草碱（3-oxo-11-methoxytabersonine，7）、alstoyunine G（8）、pachysi
13、phine（9）、洛柯宁碱（lochnerinine，10）、土波台文碱（tubotaiwine，11）、venalstonine（12）。结构见图 1。其中，化合物 1 为新化合物，命名为美乐苏胺 A。化合物 4、11 和 12 首次从该植物中分离得到。采用 MTT 法评价了所得化合物的肿瘤细胞增殖抑制活性，化合物 2、810 显示出不同程度的肿瘤细胞增殖抑制活性，其中化合物 10 活性最强。图 1 化合物 112 的结构 Fig.1 Chemical structures of compounds 1121 仪器与材料 Bruker Avance DRX600 型核磁共振波谱仪（瑞士 Br
14、uker 公司），Agilent 6250 Accurate-Mass Q-TOF 高分辨质谱仪（美国 Agilent 公司），Agilent 1260-6460 Triple Quad 液质联用仪（美国 Agilent 公司），Chirascan 圆 二 色 谱 仪（英 国 Applied Photophysics 公司），Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司），TBE-300C 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司），EYELA R-100型旋转蒸发仪（日本 EYELA 公司），YMC-Pack ODS-A 型半制备色谱柱（250 mm10 mm，5
15、m，日本 YMC 公司），正相柱色谱硅胶（200300 目，青岛海洋化工厂），多功能酶标仪（美国赛默飞公司），BP221S 型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司），Milli-Q 纯水仪（美国 Millipore 公司），所用试剂为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）或色谱纯（瑞典 Oceanpak 公司）。DMEM 培养基、1640 培养基、胎牛血清、胰酶溶液均购自美国 Gibco公司，MTT 购自 Solabio 公司，顺铂（Pt 65%，上海麦克林生化科技股份有限公司）。人肺癌 A549 细胞、人肝癌 HepG2 细胞和人前列腺癌 PC-3 细胞购于中国科学院上海细胞库。1364 中草
16、药 中草药 2023 年年 3 月月 第第 54 卷卷 第第 5 期期 Chinese Traditional and Herbal Drugs 2023 March Vol.54 No.5 山橙釆自云南普洱，经山东中医药大学李佳教授鉴定为夹竹桃科植物山橙 M.Suaveolens Champ.ex Benth.的枝叶，样品标本（201512TM03）保存于济南大学生物科学与技术学院标本室。2 提取与分离 山橙药材（16.8 kg）粉碎后，用 8 倍体积 95%乙醇渗漉提取 3 次，合并滤液，减压浓缩得到乙醇浸膏。将乙醇浸膏加水分散，用稀盐酸调节 pH 为12，用醋酸乙酯萃取 3 次，合并有机相，减压浓缩得到非生物碱相。水相用氨水调节 pH 为 910，用氯仿萃取 5 次，合并氯仿相，减压浓缩得到氯仿相即总生物碱相（149 g）。然后将总生物碱相进行硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（200151）为流动相梯度洗脱，经 TLC 分析后合并为 6 个部位（Fr.16）。Fr.3 利用高速逆流色谱分离，以石油醚-醋酸乙酯-甲醇-水为溶剂体系，经 HPLC 分析合并得到 6个组分 Fr.3.1