1、 中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 145 论 著 商陆长期毒性及毒代动力学研究 孙文学，盛云华，黄坚，孙杰，王宇，唐黎明*(上海市食品药品检验研究院药理室，上海 201203)摘要：目的 通过商陆对大鼠的长期毒性以及毒代动力学的研究，考察商陆“量-时-毒”关系。方法 连续 120 d 给大鼠灌胃低、中、高剂量商陆水提物，观察大鼠一般状况、体质量、血生化指标、血液学指标、尿液指标及早期损伤指标，观察主要脏器、计算脏器指数并进行病理学检查。并于 1，28，120 d 各组大鼠
2、静脉取血，用 LC-MS/MS 测定商陆皂苷甲(esculentoside A，EsA)血药浓度并拟合毒代动力学参数。结果 与空白对照组相比，中、高剂量组大鼠体质量明显降低(P0.05)、情绪萎靡、活动减少，白细胞含量显著升高(P0.05 或 P0.01)，尿液中尿蛋白显著增高(P0.05 或 P0.01)、肾损伤因子-1 含量显著升高(P0.05 或 P0.01)，肾脏指数显著升高(P0.05)，组织病理学检查直接观察到肾脏出现肾小管损伤与肾间质肾炎，大鼠出现肾脏损伤。毒代动力学研究显示，相同剂量商陆水提物给药时，各组大鼠血浆中 EsA 的 Cmax与 AUC0-t随给药时间的延长而升高；相
3、同给药时间点，不同剂量组的大鼠血浆中 EsA 的 Cmax与 AUC0-t随剂量的升高而增加。结论 商陆重复给药 120 d 时具有明显肾毒性，EsA 是商陆毒性成分之一；商陆的“量-时-毒”关系为给药剂量越大、给药周期越长，大鼠血浆内 EsA 的暴露量越高，商陆的肾毒性作用越强。关键词：商陆；商陆皂苷甲；肾毒性；“量-时-毒”关系 中图分类号：R965.3；R285.5 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2023)02-0145-09 DOI:10.13748/ki.issn1007-7693.2023.02.001 引用本文：孙文学,盛云华,黄坚,等.商陆长期毒性及毒代动力学研
4、究J.中国现代应用药学,2023,40(2):145-153.Study on Long-term Toxicity and Toxicokinetics of Phytolaccae Radix SUN Wenxue,SHENG Yunhua,HUANG Jian,SUN Jie,WANG Yu,TANG Liming*(Institute for Pharmacology,Shanghai Institute of Food and Drug Control,Shanghai 201203,China)ABSTRACT:OBJECTIVE To obtain the“quantity-ti
5、me-toxicity”relationship by studying the long-term toxic reaction and toxicokinetics of Phytolaccae Radix to rats.METHODS Rats were given low,medium and high doses of aqueous extracts of Phytolaccae Radix for 120 d to observe the general condition,body weight,blood biochemical indexes,hematological
6、indexes,urine indexes,early injury indexes,organ indexes and pathological examinations of the rats.And on 1,28,and 120 d,blood was collected from each group of rats,and LC-MS/MS method was used to determine the plasma concentration of esculentoside A(EsA)and fit the toxicokinetic parameters.RESULTS
7、Compared with the blank control group,the rats in the middle and high-dose groups were significantly reduced in body weight(P0.05),sluggish and reduced in activity,white blood cell in the blood were significantly increased(P0.05 or P0.01),urine protein in the urine was significantly increased(P0.05
8、or P0.01),kidney injury molecule 1 increased significantly(P0.05 or P0.01),kidney-to-body ratio increased significantly(P0.05，采用单因素 ANOVA 进行检验；当 P0.05，采用Kruskal-wallis 检验。尿蛋白指标采用 Kruskal-Wallis 检验的 Dwass-Steel-Critchlow-Fligner 比较。P0.05 表示差异具有统计学意义。药动学项下成批数据分析，计算各组药动学参数，绘制药时曲线。3 结果 3.1 一般情况观察 与空白对照组
9、相比，商陆水提物低剂量组大鼠皮毛颜色正常、活动状态与精神状态正常、饮食正常；商陆水提物中剂量组皮毛发黄、黯淡无光，活动减少、常趴伏不动，精神状态萎靡；高剂量组大鼠不健康状态相比较于中剂量组明显加强，皮毛粗糙黯淡，精神萎靡但攻击性增强，个别高剂量大鼠体质量明显减轻、后期体质量有恢复，个别大鼠尿液呈现棕褐色。3.2 体质量 与空白对照组相比，中剂量组雄性大鼠自第21 天起持续至第 120 天体质量明显降低(P0.05)；高剂量组雄性大鼠从第 28 天至第 98 天，除第 56天外，体质量明显降低(P0.05)，具体结果见图 1。图 1 大鼠体质量变化(xs，n=8)与空白对照组相比，1)P0.05
10、。Fig.1 Rat body weight changes(xs,n=8)Compared with blank control group,1)P0.05.中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 149 各组雌性大鼠体质量无明显改变。3.3 脏器指数 与空白对照组相比，中剂量组雌性大鼠的肾脏指数显著升高(P0.05)，高剂量组雄性大鼠的肾脏指数显著升高(P0.05)，具体结果见图 2。肾脑比、肝脑比与肝体比未出现显著性差异。图 2 大鼠肾脏指数(xs，n=8)与空白对照组相比
11、，1)P0.05。Fig 2 Kidney-to-body ratio of rats(xs,n=8)Compared with blank control group,1)P0.05.3.4 血液生化学指标检测 肾脏损伤血生化指标 BUN 每周检测结果显示，与空白对照组相比，商陆低剂量组第 36 天起至第 63 天，除第 42 天外，大鼠血清中 BUN 水平均出现显著性降低(P0.05)，高剂量组第 36 天出现 BUN水平的显著性降低(P0.01)以及第 98天出现 BUN 水平的显著性升高(P0.05)，具体结果见图 3。肾脏损伤血生化指标 CR 每周检测结果显示，与空白对照组相比，商陆
12、各剂量组 CR 水平未出现显著性改变。3.5 血液学指标检测 120 d 给药结束后的血液学检测指标结果显示，RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、Neut、Eos、Retic 均未显示组间差异；WBC水平，与空白对照组相比，商陆中剂量组出现显著性升高(P0.01)，商陆高剂量组明显增高(P0.05)；淋巴细胞数 Lymph 水平，与空白对照组相比，商 图 3 大鼠血液生化学检测指标 BUN(xs，n=8)与空白对照组相比，1)P0.05，2)P0.01。Fig.3 Rat blood biochemical detection index BUN(xs,n=8)Compa
13、red with blank control group,1)P0.05,2)P0.01.陆中剂量组出现显著性升高(P0.05)；Mono 水平，与空白对照组相比，商陆中剂量组水平有明显的提高(P0.05)，商陆高剂量组水平显著性提升(P0.01)；Baso 水平，与空白对照组相比，商陆中剂量组水平有明显的提高(P0.05)，商陆高剂量组水平显著性提升(P0.01)。各组血液学指标统计结果见图 4。3.6 尿液指标检测 对每周的尿液进行尿液外观、比重、pH 值、尿糖、尿蛋白、尿胆红素、尿胆原、酮体、潜血、白细胞的检测并统计后，仅发现尿蛋白出现了组间差异。正常大鼠尿液中不能探测到尿蛋白，尿蛋白数
14、值为 0，当肾脏出现损伤时尿液中检测到尿蛋白，尿蛋白值为 0.15，0.3，1，尿蛋白值越大代表肾脏损伤越严重。采用 Kruskal-Wallis 检验的 Dwass-Steel Critchlow-Fligner 方法将各剂量组与空白对照组进行比较，第 49 天至第 112 天中剂量组数值与空 白 对 照 组 比 较 存 在 显 著 性 差 异(P0.05 或P0.01)，第 56 天至第 120 天高剂量组与空白对照组相比存在显著性差异(P0.05 或 P0.01)。具体统计结果见表 2。图 4 大鼠血液学检测指标(xs，n=8)与空白对照组相比，1)P0.05，2)P0.01。Fig.4
15、 Rat hematology test index results(xs,n=8)Compared with blank control group,1)P0.05,2)P0.01.150 Chin J Mod Appl Pharm,2023 January,Vol.40 No.2 中国现代应用药学 2023 年 1 月第 40 卷第 2 期 表 2 Dwass-Steel Critchlow-Fligner 法大鼠尿蛋白各组 P 值(xs，n=8)Tab.2 Dwass-Steel Critchlow-Fligner method rat urine protein P value of
16、each group(xs,n=8)组别 49 d 56 d 63 d 70 d 84 d 91 d 98 d 112 d 120 d 空白对照组/商陆低剂量组 0.749 4 1/0.749 4 0.749 4 1 0.749 4 0.999 7 1 商陆中剂量组 0.015 91)0.005 92)0.000 62)0.044 71)0.020 31)0.005 72)0.001 62)0.018 41)0.749 4 商陆高剂量组 0.051 2 0.001 22)0.000 82)0.001 72)0.003 42)0.001 52)0.001 52)0.009 62)0.006 22)注：与空白对照组相比，1)P0.05，2)P0.01。Note:Compared with blank control group,1)P0.05,2)P0.01.3.7 早期指标检测 KIM-1 含量检测 尿液中 KIM-1 水平检测结果显示，与空白对照组相比，商陆中剂量组第 28 天、第 91 天、第105 天、第 112 天均出现显著性升高(P0.05，P0.01)；商陆高剂量组在第 7