1、DOI:10.12300/j.issn.1674-5817.2022.130实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineFeb.2023,43(1)不同月龄长爪沙鼠的肾脏组织学特征卢领群,郭红刚,石巧娟,戴方伟,褚晓峰(杭州医学院实验动物中心,浙江省实验动物与安全性研究重点实验室,杭州 310000)摘要 目的探究不同月龄长爪沙鼠肾脏的组织学特征。方法选取2、6、12月龄长爪沙鼠各10只，雌雄各半。动物安乐死后取肾脏，制作石蜡切片，HE、MASSON和PAS染色后，数字扫描观察不同月龄长爪沙鼠的肾脏组织各部分结构差异，通过图像分析软件
2、测量肾脏组织相关数据。结果长爪沙鼠的肾皮质和外髓质肾小管断面中近曲小管数量较远曲小管多；随着月龄增加，肾小球密度减少，肾小球直径增加，肾小管基膜增厚，肾小管间纤维成分增多。结论长爪沙鼠肾脏的组织结构随着月龄增长出现差异性变化，这种变化可能与肾小球硬化、实质性细胞减少有关，具体机制有待进一步研究。关键词 长爪沙鼠；肾脏；组织学变化中图分类号 R-332；Q95-33 文献标志码 A 文章编号 1674-5817（2023）01-0061-06Histological Characteristics of the Kidney in Mongolian Gerbils of Different A
3、gesLU Lingqun,GUO Honggang,SHI Qiaojuan,DAI Fangwei,CHU Xiaofeng(Experimental Animal Center of Hangzhou Medical College,Zhejiang Provincial Key Laboratory of Laboratory Animal and Safety Research,Hangzhou 310000,China)Correspondence to:CHU Xiaofeng,E-mail:ABSTRACT ObjectiveTo explore the histologica
4、l characteristics of the kidney in Mongolian gerbils of different ages.MethodsTen Mongolian gerbils of 2,6,and 12 months old(half male and half female)were selected.After euthanasia,the kidneys were taken and paraffin sections were made.After HE,MASSON and PAS staining,the structural differences of
5、different parts of the kidney tissue in gerbils of different ages were observed by digital scanning,and the relevant data of the kidney tissue were measured by image analysis software.Results The number of proximal convoluted tubules was more than that of distal convoluted tubules in the renal corte
6、x and outer medulla of gerbils.With age,the glomerular density decreased,the glomerular diameter increased,the basement membrane of renal tubules thickened,and the fibrous components between renal tubules increased.Conclusion The histological structure of Mongolian gerbils kidney varies with age,whi
7、ch may be related to glomerulosclerosis and parenchymal cell reduction.The specific mechanism needs further study.Key words Mongolian gerbil;Kidney;Histological change长爪沙鼠（Meriones unguiculatus）又称为蒙古沙鼠（Mongolian gerbil），属于哺乳纲啮齿目鼠科沙鼠亚科沙鼠属，在我国主要分布于内蒙古以及邻省区的沙化草原地。长爪沙鼠作为实验动物，因其脑底动脉、前列腺、眼、耳等独特的解剖结构，以及对丝虫
8、、幽门螺杆菌和汉坦病毒的易感性等原因，已被广泛地应用于脑神经、寄生虫病、微生物、生殖、内分泌、营养、代谢、药理、肿瘤等诸多领域的研究，被称为“多功能”实验动物1。长爪沙鼠长期栖息于干旱、半干旱地区，具有尿液浓缩的特点，能够有效利用食物中和体内代谢的水分，因此对饮用水量的要求很低，可以把饮水量控制 实验动物资源开发与利用 Development and Utilization of Laboratory Animal Resources基金项目 浙江省科技计划项目“长爪沙鼠组织形态学数据库的建立与大鼠、小鼠比较组织学研究”（2018C37124）；浙江省基础公益研究计划项目“链脲佐菌素诱发长爪沙
9、鼠多囊肝动物模型建立与发病机制研究”（LGD22C040024）第一作者 卢领群（1976），男，本科，高级实验师，研究方向：实验动物学。E-mail：通信作者 褚晓峰（1968），男，本科，副研究员，研究方向：实验动物应用研究。E-mail：61实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineFeb.2023,43(1)在每100 g体质量2 mL左右，且对体质量无影响。由于其泌尿系统的特殊性，长爪沙鼠成为了研究肾脏功能性疾病的良好动物模型2-3。肾脏是动物最重要的排泄器官，其正常结构对于维持机体内环境稳态具有重要作用4。到目前为止，有
10、关肾组织结构的研究主要集中于人5、小鼠6、牦牛7-8、大熊猫9和兔10等，而肾脏的增龄性变化研究仅限于小鼠11和人12，尚未见到有关长爪沙鼠随月龄增加的肾脏组织学变化的系统性研究报告。因此，本实验运用组织学染色和图像分析的方法对长爪沙鼠肾组织各部分结构进行观察及测量分析，描述不同月龄段长爪沙鼠肾结构组织学变化特征，为进一步研究长爪沙鼠的肾脏发育和生理学功能提供可靠的形态学数据资料。1材料与方法1.1实验动物本实验选取2、6、12月龄长爪沙鼠，每个月龄段各10只，雌雄各半。长爪沙鼠来自杭州医学院实验动物中心SCXK（浙）2019-0002，实验在杭州医学院实验动物中心屏障设施 SYXK（浙）20
11、19-0011内完成。实验方案经杭州医学院实验动物中心实验动物福利伦理委员会审查批准（编号为 ZJCLA-IACUC-20110002），实验操作遵循国家有关实验动物的相关法规条例要求。动物饲养设施光照周期为7001900光照，1900700黑暗。长爪沙鼠饲喂辐照饲料，饮用超滤水，笼器具，垫料等均经121 高压灭菌，饲养环境温度2025，湿度40%60%。1.2肾脏组织结构观察动物经过量CO2麻醉后安乐死，进行大体解剖观察。摘取两侧肾脏，去除肾周脂肪和结缔组织，将肾脏置于质量分数为4%的中性甲醛溶液中固定48 h后取出，将肾脏切开，观察解剖学差异。肾脏组织经梯度乙醇溶液脱水、二甲苯透明、石蜡包
12、埋后，制作石蜡切片，分别进行HE、MASSON和PAS染色（相关染色剂均购自杭州浩克生物技术有限公司）。HE染色后观察肾小管和肾小球，MASSON染色后观察细胞间质中纤维增生情况，PAS染色后观察肾小球和肾小管基底膜糖原。着色后的切片用宁波江丰生物信息技术有限公司生产的KF-PRO-020数字切片扫描仪进行扫描，观察肾脏各部分组织结构。然后用自带看图软件 K Viewer 测量切片中肾脏皮质厚度（cortical thickness，CT）、外髓质厚度（outer medullar thickness，OMT）、内髓质厚度（in medullar thickness，IMT）、皮质面积（cor
13、tical area，CA）、外髓质面积（outer medullar area，OMA）和 内 髓 质 面 积（inner medullar area，IMA），并计数整个切面内肾小球个数。切片在20倍物镜下随机选择肾脏皮质（cortical）和外髓质（near medulla）处10个视野，计数近曲小管（proximal convoluted tubules，PCT）与 远 曲 小 管（distal convoluted tubules，DCT）的数量，观察切片MASSON染色和PAS染色后动物肾脏内纤维结缔组织和肾小管基膜的改变。1.3统计学分析运用SPSS 19.0统计学软件进行结果分
14、析。本研究中各数据在性别上没有统计学差异，因此合并统计。计量数据以-xs表示。不同月龄的长爪沙鼠之间比较采用方差分析，组内两两比较采用LSD-t检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1肾脏解剖学特点大体解剖观察可见，长爪沙鼠的肾脏为单乳头肾，表面光滑，不分叶，具有较长的突出于肾盂的肾乳头。HE染色后显示，皮质与髓质界限清楚，髓放线条纹清晰，髓质外区（外髓）与髓质内区（内髓）界限分明（图1）。图1 长爪沙鼠肾组织切面的HE染色图（左侧为纵断面，右侧为横断面，均放大6倍）Figure 1 HE staining diagram of kidney tissue section of Mon
15、golian gerbils（longitudinal section on the left and transverse section on the right，magnification6）62实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineFeb.2023,43(1)2.2肾脏组织形态学相关数据长爪沙鼠肾脏组织中髓质宽厚。不考虑月龄因素，长爪沙鼠肾脏髓质厚度与皮质厚度的比值约为3.61，外髓质厚度与皮质厚度的比值接近1。分月龄段统计发现，不同月龄的长爪沙鼠肾髓质/皮质厚度比（F=2.190，P=0.128）和外髓质/皮质厚度（F
16、=0.614，P=0.548）的差异均无统计学意义（表1）。同样，不同月龄长爪沙鼠肾脏的外髓质面积与皮质面积之比（F=0.111，P=0.895）、外髓质面积与肾脏面积之比（F=0.534，P=0.641）、内髓质面积与皮质面积之比（F=0.618，P=0.546）、内髓质面积与肾脏面积之比（F=0.172，P=0.843）、髓质面积与皮质面积之比（F=0.360，P=0.700）差异均无统计学意义（表1）。2.3肾小体及肾小管相关数据2月龄、6月龄和12月龄长爪沙鼠的肾单位密度逐渐降低，3个月龄段间差异均有统计学意义（P0.01，表1），推测这与长爪沙鼠随着月龄增加，其肾小球硬化及数量减少有关。2月龄、6月龄、12月龄长爪沙鼠的皮质肾小球直径和髓质肾小球直径均逐渐增加，不同月龄段间差异均有统计学意义（P0.01，表1），提示随着月龄增加，长爪沙鼠的肾小球逐渐增大。表1 不同月龄长爪沙鼠肾脏组织形态学及肾小体、肾小管相关测量数据Table 1 Related measurement data of kidney histomorphology and renal corpuscles