1、甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4表 1三组分含量测定 HPLC 梯度洗脱程序复方硝酸咪康唑乳膏是我院研制的一种院内制剂（批号：ZYSL-JN202101364），主要含有硝酸咪康唑、醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明、氯霉素等成分，具有抗真菌、抗细菌、止痒、收缩血管的作用，用于治疗真菌感染的皮炎、皮疹、过敏性皮炎等皮肤病，临床治疗效果显著。目前，复方制剂的含量测定多采用单独测定的方式，由于本品中含有多种组分，若分别测定各组分含量，操作繁琐、检验周期长、成本高。我们根据各主要组分的结构特点，优化样品制备工艺，在同一色谱
2、条件下，同时测定本品中的硝酸咪康唑、醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明。其中采用梯度洗脱的方式，确保三种组分在同一色谱条件下主峰峰型良好，分离良好，相对保留时间适宜。同时应用二极管阵列检测器多波长测定功能，分别在各组分对应的最佳波长处测定，最大程度上保证了检测的灵敏度和准确度1，2。采用本法可快速、高效、准确地同时测定本品中三种组分的含量，节省了检测时间和成本。1仪器与试药1.1仪器LC_20AT 高效液相色谱仪（配有 SPD_20A二极管阵列检测器，日本岛津公司），AB265_S 电子天平（梅特勒_托利多仪器有限公司），PHS_3C 酸度计（上海精密科学仪器有限公司）。1.2药品与试剂硝酸咪康唑对照
3、品（含量 99.6%）、盐酸苯海拉明对照品（含量 99.9%）、醋酸曲安奈德对照品（含量 99.1%）均购自中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）均购自国药集团化学试剂有限公司；三乙胺（分析纯）、冰醋酸（分析纯）均购自天津科密欧化学试剂有限公司；复方硝酸咪康唑乳膏（由本院制剂室提供）。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性选用岛津 C18 柱（150mm4.6mm，5m），以甲醇乙腈（11）为流动相 A，1%的三乙胺水溶液（用冰醋酸调节 pH 值 6.50.1）为流动相 B，对照表 1 进行梯度洗脱，流速 1mL/min，柱温30，进样体积 20L，按照 中国药典 2020 年
4、版二部分别在 230nm 波长下记录硝酸咪康唑峰面积，258nm波长下记录盐酸苯海拉明峰面积，240nm 波长下记录醋酸曲安奈德峰面积，按外标法计算含量。理论塔板数按硝酸咪康唑、盐酸苯海拉明、醋酸曲安奈德峰计算应不低于 3000，各组分峰的分离度符合要求。基金项目：山东省医学会临床科研专项资金项目（编号：YXH2019ZX020）第一作者：韩剑，男，副主任药师，从事药物新剂型及制剂新技术工作通信作者：刘健，男，研究员，从事药物新剂型及制剂新技术研究工作。E-mail：HPLC 法测定复方硝酸咪康唑乳膏中三种组分的含量韩剑贾志伟刘健山东第一医科大学附属皮肤病医院，山东 济南 250022【摘要】
5、目的：建立同时测定复方硝酸咪康唑乳膏中硝酸咪康唑、醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明含量的方法。方法：采用反向高效液相色谱法，色谱柱为岛津 C18柱（150mm4.6mm，5m），以甲醇乙腈（11）为流动相 A，1%的三乙胺水溶液（用冰醋酸调节 pH 值 6.50.1）为流动相 B，进行梯度洗脱，流速 1mL/min，柱温 30，被测三组分别在其各自最佳吸收波长处测定。结果：方法学验证表明，硝酸咪康唑、醋酸曲安奈德、盐酸苯海拉明三种成分线性关系良好（r 均大于 0.999），精密度 RSD 均小于 0.5，回收率 98%100%，稳定性和重复性的 RSD 均小于 1.0，符合方法学要求。按照新建立的方
6、法测定了三批样品中三组分的含量，结果均符合要求。结论：该方法简便可靠，可作为复方硝酸咪康唑乳膏的质量控制方法。【关键词】高效液相色谱法；硝酸咪康唑；醋酸曲安奈德；盐酸苯海拉明中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：1004-2725（2023）04-0343-03时间（分钟）流动相 A（%）流动相 B（%）050508.250508.3604020.0604020.1802035.0802035.1505040.05050药学343DOI:10.15975/ki.gsyy.2023.04.013甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，
7、Vol.42，No.42.2溶液的制备2.2.1对照品溶液制备。分别精密称取本品含量测定三种组分的对照品适量，加甲醇溶解并稀释成含硝酸咪康唑 0.4mg/mL，盐酸苯海拉明 0.2mg/mL，醋酸曲安奈德 0.05mg/mL 的混合溶液，作为对照品溶液。2.2.2供试品溶液制备。精密称取复方硝酸咪康唑乳膏 1.0g，置 50mL 量瓶中，加甲醇适量，振摇使分散，超声 30min，放冷至室温，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。2.2.3空白基质溶液的制备。取不含硝酸咪康唑、盐酸苯海拉明、醋酸曲安奈德三种组分的空白乳膏基质，按照供试品溶液方法制备成空白基质溶液。2.3方法学考察2.3.1专属性试
8、验。分别取对照品溶液、供试品溶液、空白基质溶液各 20L 注入液相色谱仪，分别在230nm波长下记录硝酸咪康唑峰色谱图，258nm 波长下记录盐酸苯海拉明色谱图，240nm 波长下记录醋酸曲安奈德色谱图。由色谱图可知，在此色谱条件下，混合对照品溶液及供试品溶液各组分峰型良好，保留时间较为适宜，分离度也均符合要求（见图 1、图 2）。空白基质溶液在各组分色谱峰处未见任何色谱峰（见图 3），对测定无干扰，专属性较好。2.3.2精密度。取三种组分的混合对照品溶液，重复进样 6 针，记录色谱图，分别在 230nm（硝酸咪康唑）、258nm（盐酸苯海拉明）、240nm（醋酸曲安奈德）波长下统计峰面积，计
9、算 RSD。2.3.3标准曲线。分别将硝酸咪康唑、盐酸苯海拉明、醋酸曲安奈德制备成一系列浓度的混合溶液，按色谱条件进样，测定峰面积，以浓度（g/mL）为横坐标（X），以峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，计算相关系数，结果见表 2。结果表明本品三种组分在其对应的范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。2.3.4准确度。为了考察拟定测定方法的准确度，进行加样回收率考察。精密称取复方硝酸咪康唑乳膏 0.5g，置 50mL 量瓶中，分别各加入 5mL 硝酸咪康唑对照品溶液（2mg/mL）、盐酸苯海拉明对照品溶液（1mg/mL）、醋酸曲安奈德对照品溶液（0.25mg/mL），照供试品溶液方法制备，共制备 6
10、 份。按外标法计算，考察回收率情况。见表 3。试验结果表明，三个主要组分含量测定的平均回收率、RSD 均符合要求，方法准确度良好。2.3.5溶液稳定性。取三种组分的对照品混合溶液，于室温中放置，并在制备后第 0、1、2、4、6、8 小时后取样测定，计算 RSD，考察溶液的稳定性。本品溶液在室温8h 内的峰面积 RSD 均在 1%之内，基本保持稳定。2.3.6重复性。取同批次复方硝酸咪康唑乳膏样品六份，照拟定含量测定方法测定含量，考察该含量测定方法的精密程度。六次含量测定结果的 RSD 均在1%之图 3空白基质溶液对应波长下色谱图图 1三组分混合对照品溶液对应波长下色谱图图 2供试品溶液对应波长
11、下色谱图表 2三种组分含量测定标准曲线组分浓度范围（g/mL）线性方程r硝酸咪康唑241.7563.9Y=31719X-385.90.9996盐酸苯海拉明120.3280.7Y=1387X-176.70.9995醋酸曲安奈德30.470.8Y=35140X-3120.9992344甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4表 4复方硝酸咪康唑乳膏三批样品含量测定结果（%）202012012020120220201203硝酸咪康唑103.31100.25100.87盐酸苯海拉明101.13100.9999.05醋酸曲安奈
12、德102.2599.6598.64组分内，结果表明本方法重复性较好。2.4三批样品含量测定按照上述色谱条件及测定方法，分别对制备的三批复方硝酸咪康唑乳膏进行三组分的含量测定。见表 4。根据试验结果，三批样品含量按此方法测定，均符合规定。3讨论目前对于复方制剂的含量测定多采用单组分测定3-4或者两组分同时测定5-6，既费时又费力，也不利于生产过程中产品的质控。如果同时测定三种组分，需要对测定条件进行全面的考察，确保检测的灵敏度、准确度，避免各组分及其他辅料相互干扰。流动相的选择：我们参照相关文献中三种组分含量测定色谱条件4-6，选择甲醇乙腈（11）为有机相，1%的三乙胺水溶液为水相的流动相体系，
13、经过多次不同比例的等度洗脱试验，发现盐酸苯海拉明与硝酸咪康唑保留时间相差较大，无法同时保证三组分的相对保留时间合适，而且专属性较差，存在测定干扰的现象。为此我们采用梯度洗脱的方式，根据各组分的极性大小，选择合适的洗脱比例，使各组分的出峰时间较适宜。同时为改善各组分的分离度及峰型良好，试验了不同 pH 值的流动相体系，最终确定采用醋酸调节pH 值6.5 时，各组分分离度、峰型良好。在此梯度洗脱条件，辅料及杂质无干扰，能够满足含量测定要求。检测波长的选择：常规的多组分测定，多采用一个固定波长测定，一般选择各组分共有的吸收波长，但不是每个组分的最佳测定波长。这种情况只适用于吸收光谱相近、浓度相近的组
14、分测定，而且无法保证在此波长下，各组分的降解产物是否对测定结果有影响，这也限制了多组分测定在实际中的应用。我们采用了二极管阵列检测器，可测定 200900nm 的所用光谱，特别适用于各组分紫外吸收差异较大的测定，测定时无需考虑检测波长的影响，只需在其对应最大波长下分别读取峰面积，按外标法计算含量，同时也避免了其他组分及其降解产物在此波长下的干扰，最大程度确保测定的专属性和准确度。采用此方法进行方法学研究，结果表明精密度、线性、重复性、准确度、稳定性均符合要求，同时缩短了检测周期及试验成本，可作为本品中三种组分的含量测定方法。参考文献 1何笑荣，邹定，刘文芳，等.高效液相色谱法-二极管阵列检测器
15、同时分析测定 11 种糖皮质激素 J.中国医院药学杂志，2008，28（2）：109-111.2杨杰.高效液相色谱仪检测器进展及其在药物分析中的应用 J.实用药物与临床，2007，10（3）：187-188.3山东省药品食品监督管理局.山东省医疗机构制剂规范第一版第二册 S.山东：山东科学技术出版社，2013：93.4吴月萍.高效液相色谱法测定硝酸咪康唑乳膏的含量 J.海峡药学，2013，25（10）：81-83.5王健.HPLC 梯度法测定复方氯霉素咪康唑乳膏中氯霉素和硝酸咪康唑的含量 J.黑龙江医药科学，2008，31（5）：21-22.6孙丽.HPLC 法同时测定曲咪新乳膏中硝酸咪康唑和醋酸曲安奈德的含量 J.药物分析杂质，2005，25（8）：946-948.（本文编辑：时海英）表 3三种组分含量测定的回收率试验结果组分回收率（%）平均（%）RSD（%）123456硝酸咪康唑99.0898.7898.2799.2198.3398.2298.650.44盐酸苯海拉明99.0598.5698.7398.3298.1898.1898.500.35醋酸曲安奈德98.8298.2198.9399.1599.2598.7698.850.37345