1、甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）均是由健康人血浆经分离纯化后制成的注射液。人血白蛋白和免疫球蛋白是血浆中含量最高的两种蛋白质。目前国内生产企业均通过低温乙醇法对人血浆进行分离纯化，该法通过调节 pH 值、温度、乙醇浓度、离子强度和蛋白浓度等参数的组合，对人血浆中不同蛋白进行分离。血液制品的蛋白纯度是评价生产工艺的重要指标。文献表明，血液制品中的某些杂蛋白在特定情况下可能引起临床不良反应，包括过敏性休克、热原样反应、肾脏损害等1。因此，蛋白纯度是人血白蛋白和人免疫球蛋白类制
2、品质量控制的重点项目。中华人民共和国药典（2020 年版三部）（以下简称：中国药典）中人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）纯度测定方法为醋酸纤维素薄膜电泳法或琼脂糖凝胶电泳法2。醋酸纤维素薄膜电泳法作为传统的纯度检测方法，如今面临电泳设备停产、醋酸纤维素薄膜厂家停产等难以采购的问题3。G26 全自动电泳仪以琼脂糖为载体，依据带电颗粒子在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动和琼脂糖分子筛作用的原理使不同的蛋白质组分分离。电泳后，凝胶在规定的温度下固定，然后进行染色、脱色和干燥。通过膜片上各条带比色进行定性或者定量的分析，具有检测时间短，人为干预少的特点。本研究以人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（
3、pH4）为研究对象，探讨 G26 全自动电泳仪纯度检测中应用，为纯度检测仪器选择提供数据支持。1材料和方法1.1材料G26型全自动电泳仪购自意大利 INTERLAB公司；DYY-型稳压稳流电泳仪购自北京市六一仪器厂；UMAX2100 扫描仪购自台湾利翔航太电子股份有限公司；图像分析软件 Quantity one 购自伯乐公司；人血清蛋白试剂盒（批号：180220FB）、脱色液试剂盒（批号：140619）购自意大利 INTERLAB 公司；白蛋白国际标准品（批号：001W2KD）和免疫球蛋白国际标准品（批号：01A185）均购自 EdQm 公司；BBTS 缓冲液（批号：0112A21）购自青岛捷
4、世康生物科技有限公司；健康人血浆（批号：20210301）、人血白蛋白（批号：20210831、20210832、202109033、202109034、202005015、202005018、202006020）、静注人免疫球蛋白（pH4）（批号：20210831、202109034、202109035、202109036、202005019、2020-05019、202006022）、人血白蛋白半成品（批号：202109035、202109036、202109037、202005015、202005016、2021-05017）、免疫球蛋白原液（批号：M-20210901、M-20-210
5、902、M-20210903、M-20200503、M-20200504、M-20200601）和 FII 沉淀溶解液（批号：M-20210901、M-20210902、M-20210903、M-20200502、M-20200505、M-20200601、）均来自兰州兰生血液制品有限公司。1.2方法1.2.1醋酸纤维素薄膜电泳法。按照 中国药典（2020年版三部）醋酸纤维素薄膜电泳法进行。使用图像分析软件 Quantity one 绘出各蛋白组分曲线图，按峰面积计算各蛋白组分的含量。1.2.2G26 型全自动电泳仪测定法及方法验证。将第一作者：成彩霞，女，助理工程师，从事血液制品质量检测工作
6、通信作者：刘晓，男，副研究员，从事血液制品科研和质量管理工作。E-mail：G26 型全自动电泳仪在血液制品纯度检测中的应用研究成彩霞1王巍2窦姿1赵云飞1宋明祥1郭雪松1朱兴业1赵小洁1张齐明1刘晓11.兰州兰生血液制品有限公司，甘肃 兰州 730046；2.甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州 730046【摘要】目的：探讨 G26 型全自动电泳仪在人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）纯度检测中的应用。方法：对 G26 型全自动电泳仪检测人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）纯度检测的专属性、准确性、耐用性以及泳道间和膜片间的重复性、中间精密度进行研究，并与醋酸纤维素薄膜法测定结果进行比较。
7、结果：G26 型全自动电泳仪能有效分离健康人血浆中白蛋白、球蛋白等组分；白蛋白和免疫球蛋白回收率分别为 99.0%、100%；不同泳道间、不同膜片间重复性和中间精密度 RSD 均小于 1%；该方法检测的最佳蛋白浓度在3.0%5.0%；经 t 检验人血白蛋白、FII 沉淀溶解液、静注人免疫球蛋白（pH4）两种方法所得，结果存在统计学差异（P0.05），而两种方法所得人血白蛋白半成品与免疫球蛋白原液，结果无统计学差异（P0.05）。结论：G26 型全自动电泳仪可用于人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）纯度检测，具有检测时间短，人为干预少的特点。【关键词】G26 全自动电泳仪；人血白蛋白；静注人免
8、疫球蛋白（pH4）；纯度中图分类号：R927.12文献标志码：A文章编号：1004-2725（2023）04-0346-04346DOI:10.15975/ki.gsyy.2023.04.015甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4供试品按要求稀释，将供试品蛋白浓度稀释至 5%（专属性和耐用性按所需浓度进行稀释），加样 30L，按照 G26 全自动电泳仪使用说明书操作，获得检测数据。a.专属性。选取人血浆、人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）各一批，观察人血浆电泳后能否有效分离各蛋白组分；并确认不同蛋白浓度的人血
9、白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）与人血浆组分中的白蛋白与免疫球蛋白的位电泳置是否一致。b.准确度。检测白蛋白国际标准品、免疫球蛋白国际标准品各 6 次，白蛋白国际标准品回收率为 93.8%98.3%，免疫球蛋白国际标准品回收率为 79.8%86.4%。将蛋白浓度为 5%的人血白蛋白和白蛋白国际标准品按 11 混合，命名为混合样 1；蛋白浓度为 5%的静注人免疫球蛋白（pH4）与免疫球蛋白国际标准品的混合样命名为混合样 2。以上混合样品应用 G26 电泳仪检测，按照以下公式计算回收率：回收率=（混合样平均值100）（人血白蛋白平均值+白蛋白国际标准品）/2，检验结果回收率应控制在 98%101
10、%。c.重复性。选取人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）各 1 批，应用 G26 电泳仪两张膜片各重复 6 次试验，测试不同泳道对检测结果的影响；结合第一、二张膜片测得的 12 次结果，分析不同膜片对检测结果的影响，不同泳道、不同膜片间所得结果 RSD 应1%。d.中间精密度。选取人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）各 1 批，由不同的检测人员使用不同膜片在不同时间应用G26 电泳仪各重复进行 6 次试验，综合分析 2 人共 12 次测定结果，RSD 应2%。e.耐用性。将人血白蛋白的蛋白浓度稀释至 2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%；静注人免疫球蛋白（pH4）的蛋白浓度稀释至 2%
11、、3%、4%、5%，同一浓度进行两次测试，同一浓度两次试验结果差值应小于1%，该范围内所得结果的 RSD 应1%，将该浓度范围定义为最佳蛋白浓度范围。1.2.3与醋酸纤维素薄膜电泳结果比较。选取人血白蛋白、静注人免疫球蛋白（pH4）及相应中间品各六批分别用 G26 全自动电泳仪和醋酸纤维素薄膜法测定，进行可比性研究。1.3统计分析方法所有数据采用 SPSS18.0 软件分析。P0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1专属性不同蛋白浓度的人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）的位置与血浆中白蛋白和免疫球蛋白的位置一致。见图 1。2.2准确性用 G26 全自动电泳仪检测白蛋白国际标准品 6 次结
12、果分别为 95.9%、95.0%、95.3%、95.5%、95.6%、95.3%，均在 93.8%98.3%范围内；免疫球蛋白国际标准品 6 次结果分别为 83.3%、84.0%、83.8%、83.6%、83.2%、83.0%，均在 79.8%86.4%范围内；混合样 1 检测6 次回收率为 99.0%，混合样 2 检测 6 次回收率 100%，均符合 98.0%101%的标准。见表 1。注：lane 1 与 lane16：血浆、lane 2-15：分别为蛋白浓度 2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%的人血白蛋白（每个蛋白浓度的样品两个泳道）样品、lane 17-24：蛋白浓度 2%、3%
13、、4%、5%的静注人免疫球蛋白（pH4）（不同蛋白浓度各两个泳道）图 1G26 全自动电泳仪检测纯度的专属性结果表 1G26 全自动电泳仪检测纯度的准确度结果样品测定值（%）平均值（%）回收率（%）人血白蛋白97.8、97.4、97.5、97.3、97.3、97.797.499.0白蛋白国际标准品95.9、95.0、95.3、95.5、95.6、95.395.4混合样 196.4、95.6、96.1、95.9、95.5、95.595.8静注人免疫球蛋白（pH4）98.6、98.3、98.3、98.7、98.6、98.898.6100.0免疫球蛋白国际标准品83.3、84.0、83.8、83.6
14、、83.2、83.083.5混合样 291.1、90.7、90.3、90.3、90.8、90.490.62.3重复性人血白蛋白纯度检测第一膜片上所得结果的 RSD 为 0.2%，第二张膜片 RSD 为 0.2%，综合计算 RSD 为 0.2%；静注人免疫球蛋白（pH4）在第一膜片上 RSD 为 0.3%，第二张膜片 RSD 为 0.2%，综合计算 RSD 为 0.2%。以上结果均符合可接受标准 RSD1%。见表 2。347甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4表 4G26 全自动电泳仪检测纯度的耐用性结果（%）注：
15、不同纯度结果均由一组平行结果构成表 2G26 全自动电泳仪检测纯度的重复性结果2.4中间精密度不同人员所得人血白蛋白和静注人免疫球蛋白（pH4）纯度结果如表 3 所示，RSD 均为0.2%，符合可接受标准 RSD1.5%。2.5耐用性G26 全自动电泳仪检测血液制品纯度的结果显示：人血白蛋白的蛋白浓度在 3%7%时所得结果的数值稳定。当蛋白浓度为 2%时测定数值差异不大。如图 1 所示：泳道 2、3 为蛋白 2%时电泳结果，杂峰几乎不可见，考虑到浓度越低时杂蛋白显示效率也会越低4，因此不予采用 2%以下蛋白浓度；当蛋白浓度到达 8%时，同一浓度两次试验结果差值达 2%，超过小于 1%的可接受标
16、准。当蛋白浓度在 3%7%时，各蛋白浓度所得结果计算 RSD为 0.4%，符合可接受标准 RSD1%，为最佳检测浓度；静注人免疫球蛋白（pH4）蛋白浓度在 3%5%间时纯度值稳定，而蛋白浓度在 2%时两次试验结果差值为 3.5%，当蛋白浓度在 3%5%时综合各蛋白浓度所得结果计算 RSD 为 0.3%，符合可接受标准 RSD1%，为最佳检测浓度。见表 4。2.6与醋酸纤维素薄膜电泳比较白蛋白、FII 沉淀溶解液、静注人免疫球蛋白（pH4）在应用“醋酸纤维素表 3G26 全自动电泳仪检测纯度的中间精密度结果（%）样品人员 1人员 2RSD人血白蛋白97.497.60.297.797.697.997.897.797.997.397.697.497.5静注人免疫球蛋白（pH4）98.498.70.298.998.398.398.398.898.898.598.598.898.820.23.530.40.240.40.250.10.560.170.182.0蛋白浓度（%）人血白蛋白纯度测量值同一浓度结果差值静注人免疫球蛋白（pH4）纯度测量值同一浓度结果差值测量值 1测量值 2测量值 1测量值