1、第 卷 第 期北华大学学报（自然科学版）年 月 （）文章编号：（）：不同血糖水平的冠心病患者外周血中、细胞比例变化分析高 卉，李 雷（徐州医科大学研究生院，江苏 徐州；徐州医科大学附属医院，江苏 徐州）摘要：目的 探讨不同血糖水平的冠心病患者外周血中 型辅助性 细胞（）、型辅助性 细胞（）的细胞比例变化方法 选取冠心病患者 例，根据血糖检测结果分为冠心病血糖正常组 例，冠心病合并糖耐量异常组 例，冠心病合并糖尿病组 例；另收集同期健康志愿者 名为健康对照组采集空腹外周静脉血，检测空腹血糖、糖化血红蛋白、干扰素、白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素 水平分离外周血单个核细胞，流式细胞仪检测、细胞比
2、例分离并培养人脐静脉内皮细胞，并使用免疫磁珠清除外周血单个核细胞中 细胞，进行人脐静脉内皮细胞毒性试验出院后对冠心病患者进行 的随访，记录主要不良心血管事件发生情况结果 冠心病合并糖尿病组患者空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显高于健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组（）冠心病合并糖尿病组 细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组，细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）冠心病合并糖尿病组 干扰素水平明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组，白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素 水平明显低于冠心病合并糖耐量
3、异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）冠心病合并糖尿病组患者外周血单个核细胞水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）；清除 细胞的外周血单个核细胞在各组间比较差异无统计学意义（）空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后均具有较高的预测价值（）；其中各指标联合检测的预测价值最高（），灵敏度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测结论 高糖状态下冠心病患者外周血中 细胞比例升高，细胞比例降低，能够加速血管内皮细胞损伤，与空腹血糖和糖化血红蛋白联合检测可用于患者预后评估关键词：冠心病；血糖；型辅助性 细胞；型辅助性 细胞；内皮细胞中图分类号：文献标志码：收
4、稿日期：基金项目：江苏省高校自然科学基金面上项目（）作者简介：高 卉（），女，主治医师，主要从事老年心血管疾病基础与临床研究，：；通信作者：李雷（），男，博士，主任医师，主要从事老年心血管疾病基础与临床研究，：，（，；，）：（）（）（），；，（），（），（），（）；（），（）；，（），：；血糖升高是动脉粥样硬化发生、发展的主要危险因素，动脉粥样硬化相关的周围血管、脑血管、心脏等血管病变发生率与非糖尿病患者相比提升约 倍，是糖尿病患者致残、致死的主要原因之一糖尿病促进动脉粥样硬化发展的分子机制仍未完全明确，目前研究显示，亚临床研究和慢性炎症可能是动脉粥样硬化及糖尿病发生的病理基础，细胞免疫和体液
5、免疫参与其中并发挥重要作用辅助性 细胞是炎症反应的主要参与者，与自然杀伤性细胞、单核巨噬细胞等共同参与动脉粥样硬化过程中的泡沫细胞形成、内皮细胞损伤等，进而加重炎症反应本研究主要探讨不同血糖水平的冠心病患者外周血中 型辅助性 细胞（）、型辅助性 细胞（）的细胞比例变化及意义 对象与方法 研究对象选取 年 月 年 月徐州医科大学附属医院收治的冠心病患者 例根据血糖检测结果将患者分为冠心病血糖正常组 例，冠心病合并糖耐量异常组 例，冠心病合并糖尿病组 例冠心病血糖正常组中男 例，女 例；年龄 岁，平均（）岁冠心病合并糖耐量异常组男 例，女 例；年龄 岁，平均（）岁冠心病合并糖尿病组男 例，女 例；
6、年龄 岁，平均（）岁另收集同第 期高 卉，等：不同血糖水平的冠心病患者外周血中、细胞比例变化分析期健康志愿者 名为健康对照组，心电图和心脏彩超检查均无异常，无糖尿病、高血压等慢性病，其中男 名，女 名；年龄 岁，平均（）岁性别、年龄在各组间比较差异均无统计学意义（），具有可比性入选标准：符合 年发布的中国稳定性冠心病诊治指南中的诊断标准，冠脉造影示 支及以上血管有硬化斑块形成，狭窄程度 及以上；理解和沟通能力正常，自愿参与并完成随访排除标准：个月内诊断为急性冠脉综合征者；先天性心脏病、严重心瓣膜病、心肌病、纽约心脏病学会（）分级级者；合并自身免疫性疾病者；恶性肿瘤患者 主要试剂 干扰素、白细胞
7、介素、白细胞介素、白细胞介素 酶联免疫吸附法检测试剂盒（北京梅科万德生物有限公司）；淋巴细胞分离液（北京诺博莱德科技有限公司）；培养液、胎牛血清、细胞培养基、牛垂体提取物（浙江森瑞生物有限公司）；鼠抗人 干扰素、白细胞介素 单克隆抗体（南京维森特生物有限公司）；磁珠（公司，挪威）方 法 各组血糖、糖化血红蛋白及炎症因子水平检测采集各组受试者的清晨空腹外周静脉血，检测空腹血糖和糖化血红蛋白水平；离心，收集血清，保存待测酶联免疫吸附法检测血清 干扰素、白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素 水平 外周血单个核细胞分离及、细胞比例检测采集各组受试者清晨空腹外周静脉血，经肝素抗凝处理后使用 淋巴细胞分离液
8、提取外周血单个核细胞 离心 ，毛细滴管吸取中间层云雾状细胞层，使用 倍体积的缓冲液反复洗涤 次；离心 ，弃去上清液；用 培养液重悬分离得到的外周血单个核细胞，加入胎牛血清 、丙二醇甲醚醋酸酯 、离子霉素 、布雷非德菌素 ，室温下孵箱中孵育，加入鼠抗人 抗体，继续孵育 ；洗涤后加入破膜液，再加入鼠抗人 干扰素、白细胞介素 单克隆抗体，室温下孵育后上流式细胞仪检测，干扰素 细胞为 细胞，白细胞介素 细胞为 细胞 人脐静脉内皮细胞培养使用缓冲液洗涤脐静脉内皮细胞 次，然后向其中注射胶原酶，注射之前经 预热，消化 后收集人脐静脉内皮细胞悬液；使用含 胎牛血清的 细胞培养基重悬，加入牛垂体提取物（终浓度
9、 ）和血管内皮生长因子（终浓度 ），接种在 孔板中，培养传代至第代用于本研究 免疫磁珠清除外周血单个核细胞中 细胞分离外周血单个核细胞，离心，弃去上清液，加入洗涤后的免疫磁珠，在冰浴箱中摇动混匀 ；将 管放于磁架 ，弃去上清液，洗涤 次后上流式细胞仪检测 表达 细胞毒性试验本研究共设 种效应细胞，分别为健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组、冠心病合并糖尿病组的外周血单个核细胞以及清除 细胞的外周血单个核细胞将人脐静脉内皮细胞洗涤后加入 孔板中，向培养孔中加入效应细胞悬液，每种效应细胞设置 个复孔；加入孵育箱中 孵育，弃去悬浮的细胞液，再次加入 完全培养基液；向培养孔中加入 试剂
10、（终浓度 ），加入 培养箱中继续孵育，弃去培养液；每孔加入二甲基亚砜，室温下振荡 ，上酶标仪检测 处各培养孔的吸光度值，计算细胞存活率 随 访患者出院后对其进行 的随访，采取电话随访的方式进行，记录主要不良心血管事件发生情况，包括急性心力衰竭、恶性心律失常、心肌梗死、血运重建、心源性死亡 统计学分析应用 对数据进行处理与统计学分析符合正态分布的计量资料以均数标准差（?）表示，进行方差分析，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用 检验；计数资料以百分率（）表示，行检验；空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后的预测价值进行 曲线分析以 为差异具有统计学意义北华大
11、学学报（自然科学版）第 卷 结 果 各组空腹血糖和糖化血红蛋白水平本研究结果显示，冠心病合并糖尿病组患者空腹血糖、糖化血红蛋白水平明显高于健康对照组、冠心病血糖正常组、冠心病合并糖耐量异常组（）见表 各组、细胞比例分析本研究结果显示，、细胞比例在各组间比较差异均具有统计学意义（）；冠心病合并糖尿病组 细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组，细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）见表 各组 细胞和 细胞炎症因子水平本研究结果显示，干扰素、白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素 水平在各组间比较差异均具有统计学意义（）；冠心病合并糖尿病组
12、 干扰素水平明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（），白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素 水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）白细胞介素 在各组间比较差异无统计学意义（）见表 各组不同细胞亚群作用下人脐静脉内皮细胞存活率本研究结果显示，冠心病合并糖尿病组患者外周血单个核细胞水平明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）；清除 细胞的外周血单个核细胞在各组间比较差异无统计学意义（）见表 表 各组空腹血糖和糖化血红蛋白水平 （?）组别（空腹血糖）（）糖化血红蛋白 健康对照组冠心病血糖正常组冠心病合并糖耐量异常组冠心病合并
13、糖尿病组 注：与健康对照组比较；与冠心病血糖正常组比较；与冠心病合并糖耐量异常组比较 表 各组、细胞比例分析 （?）组别（细胞）（细胞）健康对照组冠心病血糖正常组冠心病合并糖耐量异常组冠心病合并糖尿病组 注：与健康对照组比较；与冠心病血糖正常组比较；与冠心病合并糖耐量异常组比较 表 各组 细胞和 细胞分泌的炎症因子水平 （?）组别（干扰素）（）（白细胞介素）（）（白细胞介素）（）（白细胞介素）（）（白细胞介素）（）健康对照组冠心病血糖正常组冠心病合并糖耐量异常组冠心病合并糖尿病组 注：与健康对照组比较；与冠心病血糖正常组比较；与冠心病合并糖耐量异常组比较 第 期高 卉，等：不同血糖水平的冠心病
14、患者外周血中、细胞比例变化分析表 各组不同细胞亚群作用下人脐静脉内皮细胞存活率 （?）组别（外周血单个核细胞）（清除 细胞的外周血单个核细胞）健康对照组冠心病血糖正常组冠心病合并糖耐量异常组冠心病合并糖尿病组 注：与健康对照组比较；与冠心病血糖正常组比较；与冠心病合并糖耐量异常组比较 空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后的预测价值分析随访 ，结果 例冠心病患者中不良心血管事件发生率（），使用 曲线检测空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后的预测价值以空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例预测冠心病患者预后的灵敏度为纵坐标，以 特异度为横坐标，构建
15、曲线，结果显示，空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后均具有较高的预测价值（）将空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例纳入 回归模型，通过回归系数得出各指标联合的数值计算公式，得出联合数据，结果显示各指标联合检测的预测价值最高（），灵敏度、阳性预测值均明显高于各指标单独检测见图、表 图 空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后预测价值的 曲线 ，表 空腹血糖、糖化血红蛋白、细胞比例、细胞比例对冠心病患者预后的预测价值分析 ，指标截断值灵敏度 特异度 阳性预测值 阴性预测值 空腹血糖 糖化血红蛋白 细胞比例 细胞比例各指标联合检测 讨 论相关研究显示，合
16、成并分泌 干扰素的 参与 型糖尿病患者的发病过程辅助性 细胞是一个具有异质性的细胞群，包括具有促炎作用的 细胞亚群及对炎症反应具有多种调节作用的 细胞亚群本研究中冠心病合并糖尿病组 细胞比例明显高于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（），细胞比例明显低于冠心病合并糖耐量异常组、冠心病血糖正常组、健康对照组（）；提示随着血糖水平的升高冠心病患者中 细胞比例明显升高、细胞比例明显降低，其中合并糖尿病的冠心病患者 和 细胞比例异常改变最为明显细胞和 细胞参与动脉粥样硬化的发展过程，其中 细胞主要分泌 干扰素、白细胞介素，干扰素还能够活化单个核细胞进而维持炎症反应的持续性 细胞能够分泌白细胞介素、白细胞介素、白细胞介素，可通过活化转录激活因子 抑制 结合蛋白 表达，降低 细胞分化北华大学学报（自然科学版）第 卷和 干扰素分泌，进而减缓或抑制动脉粥样硬化的发展正常生理状态下 细胞与 细胞亚群相互调节，呈动态平衡状态有研究显示，细胞数和 干扰素分泌量增加能够促进动脉粥样硬化的发生与发展本研究结果显示，随着冠心病患者血糖水平的升高，干扰素浓度明显增加，但白细胞介素 浓度增加不明显，