1、培养细胞的取材与分离 取材部位准确(zhnqu)严格无菌操作，避免微生物和化学污染 尽快培养，24h以内 减小损伤，使用锐器，避免撕扯 制备标本，以便鉴定,第一页，共三十页。,体外细胞的纯化人工纯化：酶消化法、机械刮除法(chf)、反复贴壁法、克隆法、培养基限定法、流式细胞仪分离法 等自然纯化,第二页，共三十页。,细胞冻存要点：冷冻过程要缓慢冻存细胞必须处在对数生长期细胞复苏要点：快速解冻解冻后的细胞应离心去除(q ch)冷冻保护剂后再接种到培养基中,第三页，共三十页。,细胞培养的污染、检测(jin c)与控制,微生物污染：细菌，真菌，支原体等污染污染的途径：空气、器材、操作(cozu)、试剂
2、、组织标本 微生物污染的检测 微生物污染的控制：抗生素除菌法；加温处理,第四页，共三十页。,细胞培养常用方法(fngf)：组织块培养法酶消化法,第五页，共三十页。,第二节口腔医学中相关(xinggun)细胞培养及其特点,第六页，共三十页。,一、牙齿相关(xinggun)细胞,第七页，共三十页。,牙髓细胞(xbo)（Dental pulp cells）,培养方法：组织块法；酶消化法细胞形态特点免疫(miny)组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点,第八页，共三十页。,牙髓细胞(xbo),波形(b xn)丝蛋白染色(+),未分化(fnhu)间充质细胞,成纤维细胞,第九页，共三十页。,牙髓细
3、胞(xbo),体外培养细胞(xbo)的生长增殖（Cell proliferation in vitro）,生长(shngzhng)增殖较快 传代期较短，15-20代(2-4 M)可复层生长,第十页，共三十页。,牙髓细胞(xbo),功能(gngnng)特点,碱性(jin xn)磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP)活性 矿化现象(Von Kossa)对细胞因子的反应 对盖髓剂的反应,第十一页，共三十页。,牙髓细胞(xbo),培养方法：组织块培养法；酶消化法细胞形态特点：成纤维细胞型（与牙周膜细胞类似）免疫(miny)组织化学染色：波形丝蛋白（+）；角蛋白（-）体外培养细胞的生
4、长增殖特点功能特点,第十二页，共三十页。,牙周膜细胞(xbo)（periodontal ligament cells）,培养方法：组织块法；酶消化法细胞(xbo)形态特点免疫组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点牙周膜细胞增殖分化的影响因素,原代 人牙周膜成纤维细胞,传代(chun di)人牙周膜成纤维细胞,第十三页，共三十页。,免疫(miny)组织化学染色,波形(b xn)丝蛋白染色阳性,角蛋白染色(rns)阴性,第十四页，共三十页。,牙周膜细胞(xbo),成纤维(xinwi)样细胞，培养成功率高 细胞增殖快 体外存活时间长(4-12 M),第十五页，共三十页。,功能特点分泌功能：胶
5、原、非胶原蛋白、碱性(jin xn)磷酸酶。矿化功能收缩功能再生功能根面吸附等,第十六页，共三十页。,二、唾液腺细胞(xbo),第十七页，共三十页。,细胞形态特点腺泡上皮细胞：体外培养(piyng)的腺泡细胞多呈“铺路石”样排列导管上皮细胞：导管上皮细胞呈多边形肌上皮细胞：肌上皮细胞呈梭形或星形,唾液腺细胞(xbo),第十八页，共三十页。,导管(dogun)上皮细胞,HSG细胞系,HSG细胞系,第十九页，共三十页。,A 小型(xioxng)猪腮腺上皮细胞原代培养（10）B 小型猪腮腺上皮细胞alpha淀粉酶免疫组化染色（10）,腺泡细胞(xbo)上皮细胞(xbo),第二十页，共三十页。,免疫组
6、织化学染色腺泡上皮细胞：角蛋白、淀粉酶、对氨基水杨酸、导管上皮膜、前角蛋白、单克隆角蛋白、分泌成分(chng fn)阳性反应导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应肌上皮细胞：肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应,第二十一页，共三十页。,三、口腔黏膜(ninm)细胞,第二十二页，共三十页。,口腔黏膜细胞培养方法：组织块法和酶消化法形态特点：卵圆形、多边形，呈“铺路石”样单层排列(pili)免疫组织化学染色：波形丝蛋白阴性，角蛋白阳性功能：分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白,第二十三页，共三十页。,兔口腔(kuqing)黏膜上皮细胞,A,B,A 无血清培养基培养条件(
7、tiojin)下（10）B 滋养细胞层培养条件下（4）,第二十四页，共三十页。,四、颌骨相关(xinggun)的硬组织细胞,第二十五页，共三十页。,破骨细胞形态学特点：多核巨细胞，体积大组织化学染色：破骨细胞单克隆抗体(kngt)呈阳性反应；降钙素反应呈蓝紫色；抗酒石酸磷酸酶反应呈棕褐色功能：骨吸收功能影响因素：促进：破骨细胞激活因子、甲状旁腺素 抑制：-干扰素、降钙素,第二十六页，共三十页。,成骨细胞形态学特点(tdin)：不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异免疫组织化学染色特点：BGP、型胶原、碱性磷酸酶活性功能：成骨作用 调节破骨细胞骨吸收作用,第二十七页，共三十页。,五、口腔肿瘤(
8、zhngli)细胞,第二十八页，共三十页。,口腔鳞癌细胞细胞系来源：鳞状细胞癌标本原代及传代培养生物学特性：多角形上皮样细胞 核/浆比例高，多核仁 高贴壁率，克隆(k ln)形成率和软琼脂集落形成率,Cal27 cell,第二十九页，共三十页。,内容(nirng)总结,培养细胞的取材与分离。传代(chun di)期较短，15-20代(2-4 M)。培养方法：组织块培养法。体外存活时间长(4-12 M)。分泌功能：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶。导管上皮细胞：导管上皮细胞呈多边形。肌上皮细胞：肌上皮细胞呈梭形或星形。导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反应。肌上皮细胞：肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反应。培养方法：组织块法和酶消化法。功能：骨吸收功能,第三十页，共三十页。,