1、尿液检验(jinyn)标准化、质控进展,曾 真,现 状解决方案,第一页，共三十九页。,第一章干化学(huxu)检测尿液有形成分质控,第二页，共三十九页。,检测化学项目(xingm)多、速度快；检测是红细胞、中性粒细胞的化学成分；质控物为化学物质，不是真实形态学成分；,现 状,第三页，共三十九页。,干化学(huxu)的问题,特异性不够好；干扰物质的影响不能质控；许多有形成分不能检测；本底干扰检测结果：本底+尿液颜色干扰；尿液漏滴造成漏检；干化学方法自身不能证实检测的真实性；不符合ISO15189；只能(zh nn)是过筛检测；,问 题,第四页，共三十九页。,例：干化学(huxu)对白细胞检测的局
2、限性,检测粒细胞的酯酶淋巴细胞不能检测干扰物质(wzh)：庆大、先锋、甲醛、胆红质等,第五页，共三十九页。,对 策,镜检证实和检测(jin c)不能检测(jin c)的有形成分；使用特异性检测方法检测化学成分；改进方法，减少本底干扰和漏检；,第六页，共三十九页。,第二章有形成分检测(jin c)仪器的质控,第七页，共三十九页。,有形成分检测仪器技术(jsh)不同质控不同,流式：质控物为特制颗粒物；机器视觉(shju)技术：红细胞没有质控物的仪器,现 状,第八页，共三十九页。,第一节 流式技术(jsh)仪器,第九页，共三十九页。,质控依据是血液分析质控物为特制(tzh)颗粒，不是尿液有形成分，为
3、替代品，与实际检测无系统属性；干扰物影响无法质控和检测；检测错误时检测者无法获悉；分类计数无意义；实际意义是质控计数准确性；,质控依据(yj)和问题,流式,第十页，共三十九页。,特制颗粒质控物，实际(shj)检测无系统属性,流式,第十一页，共三十九页。,无法质控干扰(gnro)错误,结晶(jijng)、酵母菌 误识别为红细胞,流式,标记(bioj)物,红细胞,仪器不能审核,真菌,结晶,第十二页，共三十九页。,检测错误时仪器无法(wf)知道,流式,第十三页，共三十九页。,优势(yush)和不足,优势：1、流式+图像：实现仪器检测验证功能；2、图像更直观、可信；不足1、因为拍不到清晰图片，所有图像
4、按相似性处理获得，由仪器内图库提供单一成分的图片；2、拍不到清晰图片，识别(shbi)极易出错，验证功能打折扣；3、验证错误导致提供图片错误，结果不正确；结论仍然不能代替镜检,数字图像流式,第十四页，共三十九页。,（CLSI原NCCLS)尿液分析操作(cozu)指南（第三版）,GP16-A3(2009),第十五页，共三十九页。,Number 4 GP16-A324 Clinical and Laboratory Standards Institute.All rights reserved.10.1.2 Urine Particle Analyzers64-68,Automated urine
5、 analyzers use various technologies to classify and enumerate particles in urine.Depending on the instrument,the technologies incorporated can include impedance,digital imaging flow cytometry,flow cytometry,light scatter,dyes,fluorescence,or some combination thereof.Particles with like characteristi
6、cs are then grouped and classified.The elements that are typically identified include RBC,WBC,epithelial cells(squamous and nonsquamous),casts(benign and pathologic),bacteria,sperm,mucus,crystals,and small round cells.Samples showing abnormalities,either laboratory-defined or as indicated by the ana
7、lyzer,are then reviewed microscopically by a technologist.Negative samples may obviate the need for manual microscopy.,第十六页，共三十九页。,国际标准（GP16-A3 2009年）给出的解决(jiju)对策,1、数字图像流式细胞仪、流式细胞仪等 标本不论是实验室认为或仪器检测异常时（Samples showing abnormalities,either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,）必须(bx)用人工
8、镜检方法重新检测确认。2、阴性结果可以免除镜检确认。,第十七页，共三十九页。,国际标准(u j bio zhn)的参考文献,64 Delanghe J.New screening diagnostic techniques in urinalysis.Acta Clin Belg.2007;62:155-161.65 Ottiger C,Huber AR.Quantitative urine particle analysis:integrative approach for the optimal combination of automation with UF-100 and micro
9、scopic review with KOVA cell chamber.Clin Chem.2003;49:617-623.66 Delanghe JR,Kouri TT,Huber AR,et al.The role of automated urine particle flow cytometry in clinical practice.Clin Chim Acta.2000;301:1-18.67 Roggeman S,Zaman Z.Safely reducing manual urine microscopy analyses by combining urine flow c
10、ytometer and strip results.Am J Clin Pathol.2001;116:872-878.68 Shayanfar N,Tobler U,von Eckardstein A,Bestmann L.Automated urinalysis:first experiences and a comparison between the Iris iQ200 urine microscopy system,the Sysmex UF-100 flow cytometer and manual microscopic particle counting.Clin Chem
11、 Lab Med.2007;45:1251-1256.,第十八页，共三十九页。,第二节 机器视觉(shju)技术仪器,第十九页，共三十九页。,质 控 依 据,机器(j q)视觉,方法学：显微镜镜检与人工显微镜镜检区别：操作自动化 前期(qinq)仪器能智能识别计数尿液有形成分国际标准：ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine(2003),第二十页，共三十九页。,ISLH主要(zhyo)内容,1、不离心尿液直接检测，计数池体积达到6.4ul2、低倍镜 观察计数大型有形成分（上皮细胞
12、、管型）；高倍镜 观察计数小型有形成分（细胞(xbo)、真菌、结晶等）3、结 果 以“个/ul”报告。4、统计学精度 低倍：（管型和上皮）至少计数50个 CV14%；高倍：（红、白细胞等）至少计数200个，CV7%；,第二十一页，共三十九页。,一、标准(biozhn)镜检参考方法的检测特点,不离心尿液直接镜检 改变离心尿液沉渣镜检检测体积：最大体积6.4ul(不是1ul)目的：提高灵敏度，确保(qubo)检测准确性 原因：不离心尿液直接镜检极易漏检报告：个/ul,第二十二页，共三十九页。,机器视觉(shju)技术采取的方法,检测：不离心尿液直接(zhji)检测检测体积：大于6.4ul（通过低倍
13、镜大面积扫描定位。高倍镜跟踪识别而实现）实现：低浓度不漏检 灵敏度达到：1个细胞/ul检测报告：个/ul,第二十三页，共三十九页。,必须有两个镜头：高倍镜和低倍镜 两个镜头观察的内容(nirng)不同（大小不同）两个镜头观察的范围不同（体积范围不同）两个镜头观察的细节不同（分辨率不同）,二、标准镜检参考(cnko)方法的基本要求：,第二十四页，共三十九页。,采用两个镜头(jngtu)：高倍镜和低倍镜检测方式完全按照显微镜镜检方法,机器(j q)视觉技术采取的方法,第二十五页，共三十九页。,仪器工作流程 完全参照人工镜检标准(biozhn)参考方法,进样,充池,低倍过筛(u shi)（视野数可设
14、置）,低倍定位(dngwi)分类计数（管型、上皮）,高倍识别分类计数,报告,清洗,阴性,阳性,人工辅判,第二十六页，共三十九页。,统计学精度 低 倍：（管型和上皮）至少计数(j sh)50个CV14%；高 倍：（红、白细胞等）至少计数200个，CV7%；这是在有形成分浓度不低时候的理想统计学精度,三、标准镜检参考方法(fngf)的理想精密度,第二十七页，共三十九页。,通过 低倍镜：大面积扫描定位。高倍镜：跟踪识别而实现 上海检验中心检测认证(rnzhng)：CV为4%临界浓度：分布不均匀，检测体积过大；,机器视觉技术(jsh)采取的方法,第二十八页，共三十九页。,机器视觉目前(mqin)质控的
15、不足：,质控物只有单一红细胞；其他有形成分暂时没有质控商品，期待；所有的有形成分智能分类计数水平有提升空间(kngjin)，在此期间人工审核不能少；标准图库建立和指导意义大，需要增加和加强；实际意义：质控计数准确性；分类计数在人工审核后才具有意义；,第二十九页，共三十九页。,第三节数字图像自动化仪器如何达到(d do)人工镜检标准,第三十页，共三十九页。,自动化数字图像仪器(yq)=人工镜检,条 件是否符合ISLH（2003年）的国际标准条件；是否是使用的具有高、低倍镜的显微镜;拍摄图像是否是真实显微镜下的实景？图像经过处理(chl)否？检测灵敏度能否达到:3-10个细胞/ul;结果有人工审核
16、；审核人员专业知识、经验、能力、责任心；,第三十一页，共三十九页。,仪器技术原因：主要是检测灵敏度达不到要求，不能质控；识别能力不理想，无法(wf)质控；单镜头的局限性，虽有图像，小的看不清，全局面不够；检测体积达不到国际标准要求，精确度较差；,问 题,无质控品的仪器(yq),第三十二页，共三十九页。,第四节如何能是尿液检测(jin c)标准和正确,第三十三页，共三十九页。,如何(rh)能是尿液检测标准和正确,按国际标准文件 ISLH（2003）和GP16-A3 执行，不折扣；尿液检验必须包括：理想、化学和镜检；任何仪器检测(jin c)结果必须与人工镜检相符合；,总原则(yunz),第三十四页，共三十九页。,非形态学自动化仪器检测的阳性结果必须镜检复检（按GP16-A3）；非形态学自动化仪器干扰成分(chng fn)必须镜检区分；自动化仪器灵敏度必须达到：3-10个细胞/ul干化学和流式结合再次过筛不科学；,如何能是尿液检测标准(biozhn)和正确,流式,第三十五页，共三十九页。,以ISLH(2003)考核；镜检自动化仪器(yq)人工审核不能省略；镜检自动化仪器灵敏度必须达到：3-