1、第三章第三章 细菌细菌(xjn)(xjn)(xjn)(xjn)感染的病原学诊断感染的病原学诊断褚云卓褚云卓第一页，共五十四页。2023/6/201本章本章(bn zhn(bn zhn)内容内容第一节第一节 标本的采集和处理原则标本的采集和处理原则第二节第二节 细菌的形态学检查细菌的形态学检查第三节第三节 细菌的分离培养和鉴定细菌的分离培养和鉴定第四节第四节第四节第四节 细菌的非培养检测细菌的非培养检测(jin c)(jin c)(jin c)(jin c)方法方法第二页，共五十四页。2023/6/202第一节第一节 标本的采集和处理标本的采集和处理(ch(ch l l)原则原则一、标本采集的一
2、般原则一、标本采集的一般原则1 1早期早期(z(z oq)oq)采集采集 2无菌采集 3 3根据目的菌的特性用不同的方法采集根据目的菌的特性用不同的方法采集4采集适量标本 5安全采集 第三页，共五十四页。2023/6/203第一节第一节 标本标本(biobn)(biobn)的采集和处理原则的采集和处理原则二、标本的处理二、标本的处理1.1.对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检感嗜血杆菌等应保温并立即送检2.2.其他所有的标本采集后最好在其他所有的标本采集后最好在2h2h之内送到实验室之内送到实验室3.3.若不能
3、及时若不能及时(jsh)(jsh)送检，标本应置于一定环境中保存送检，标本应置于一定环境中保存4.一般情况下，用于细菌培养的标本保存时间不应超过24h第四页，共五十四页。2023/6/204.病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护病人标本中可能含有大量致病菌，必须注意安全防护.标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出.对于烈性传染病标本运送时更要特别严格，必须按规定包装，由专人运送.厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管(shgun)(shgun)内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送第五页，共五十四页。2023/6/205第二节第二节 细菌细菌(xjn
4、)(xjn)的形态学检查的形态学检查1.1.包括不染色标本检查法和染色标本检查法包括不染色标本检查法和染色标本检查法2.2.镜检可以镜检可以(ky)(ky)了解有无细菌及大致的菌量了解有无细菌及大致的菌量3.3.根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别根据细菌形态、结构和染色性有助于对病原菌的初步识别和分类和分类4.4.通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗通过形态学检查可得到初步诊断，对临床早期诊断和治疗疾病有一定的参考意义疾病有一定的参考意义第六页，共五十四页。2023/6/206第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查一、不染色一、不染色(
5、r(r ns)ns)标本标本1.1.细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌细菌不经染色直接镜检，主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况的动力及运动状况2.2.常用的方法有压滴法和悬滴法常用的方法有压滴法和悬滴法 有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显 的方向性位移 无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无 位置的改变位置的改变第七页，共五十四页。2023/6/207第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查3.有些病原菌通过不染色标本的动力检查可作出初步鉴定(jindng)(jindng)如疑似霍乱患者，镜下
6、观察到来回穿梭似流星状如疑似霍乱患者，镜下观察到来回穿梭似流星状运动的细菌，运动的细菌，制动试验阳性，可初步推断为制动试验阳性，可初步推断为“疑似疑似O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌”。第八页，共五十四页。2023/6/208第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查二、染色标本（一）常用染料（一）常用染料1 1碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等碱性染料：碱性复红、结晶紫、美蓝等2 2酸性染料酸性染料(sun xn rn lio)(sun xn rn lio)：有伊红、刚果红等：有伊红、刚果红等3 3复合染料（中性染料）及荧光染料：复合染料有瑞氏复合染料（中性染料）及荧光染
7、料：复合染料有瑞氏染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料（伊红美蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料有荧光标记的抗体染料有荧光标记的抗体 第九页，共五十四页。2023/6/209第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查（二）常用的染色方法（二）常用的染色方法1 1革兰染色（革兰染色（gram staingram stain）革兰阳性革兰阳性(yngxng)(yngxng)球菌球菌 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌第十页，共五十四页。2023/6/2010第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查2抗酸染色 （acid-fast sta
8、in）可将细菌(xjn)(xjn)分为两大类：即-抗酸性细菌 -非抗酸性细菌第十一页，共五十四页。2023/6/2011第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查3荧光染色（1 1）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，）荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。（2 2）主要）主要(zh(zh yo)yo)用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。第十二页，共五十四页。2023/6/2012第二节第二节
9、细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查4.鞭毛染色(r(r ns)ns)可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在可观察到菌体上有无鞭毛、鞭毛的位置及数量，在细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。细菌鉴定中，特别是非发酵菌的鉴定中很重要。5.5.异染颗粒染色异染颗粒染色 用于白喉棒状杆菌染色。第十三页，共五十四页。2023/6/2013第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查6.芽胞染色(rns)：绿色部分 为芽胞第十四页，共五十四页。2023/6/2014第二节第二节 细菌细菌(xjn)(xjn)的形态学检查的形态学检查7.墨汁染色墨汁染色:一般
10、一般(ybn)(ybn)用于新型隐用于新型隐球菌检查球菌检查第十五页，共五十四页。2023/6/2015第三节 细菌的分离培养(piy(piy ng)ng)和鉴定一、一、培养基的种类和选择培养基的种类和选择培养基的种类和选择培养基的种类和选择 培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择培养基的组成成分、培养基种类、培养基的选择二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养二、分离及培养 细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法细菌的分离、细菌培养方法三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴
11、定三、生化反应和鉴定三、生化反应和鉴定 碳水化合物的代谢碳水化合物的代谢碳水化合物的代谢碳水化合物的代谢(dixi)(dixi)试验试验试验试验 蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验蛋白质和氨基酸的代谢试验 碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验碳源和氮源利用试验第十六页，共五十四页。2023/6/2016第三节第三节 细菌细菌(xjn)(xjn)的分离培养和鉴定的分离培养和鉴定一、培养基的种类和选择一、培养基的种类和选择 培养基（培养基（culture mediumculture medium）是由人工方法是由人工方法(fngf(fngf)
12、配制而成配制而成的，专供微生物生长繁殖使的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。用的混合营养物制品。第十七页，共五十四页。2023/6/2017第三节第三节 细菌的分离培养细菌的分离培养(piy(piy ng)ng)和鉴定和鉴定(一一)培养基的组成成分培养基的组成成分1营养物质 蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖类、醇类、血液、无机盐类、鸡蛋和动物血清生长因子2凝固物质(wzh)(wzh)琼脂、明胶、卵白琼脂、明胶、卵白3抑制剂和指示剂第十八页，共五十四页。2023/6/2018第三节第三节 细菌细菌(xjn)(xjn)的分离培养和鉴定的分离培养和鉴定（二）培养基种类（二）培养基种类1基础培养基（
13、based medium）2 2营养培养基（营养培养基（nutrient mediumnutrient medium）3鉴别(jinbi)(jinbi)培养基（diferential medium）4 4选择培养基（选择培养基（selective mediumselective medium）5 5特殊培养基（特殊培养基（special mediumspecial medium）第十九页，共五十四页。2023/6/2019第三节第三节 细菌的分离培养细菌的分离培养(piy(piy ng)ng)和鉴定和鉴定1 1基础培养基基础培养基 含有基础生长所需的基本含有基础生长所需的基本(jbn)(jbn
14、)营养成分，最常用的是肉浸液，营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（俗称肉汤（brothbroth），主要成分），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。含牛肉浸液和蛋白胨。第二十页，共五十四页。2023/6/2020第三节第三节 细菌的分离培养细菌的分离培养(piy(piy ng)ng)和鉴定和鉴定2营养培养基（nutrient medium）最常用(chn(chn yn yn)的是血琼脂平板、巧克力血平板等第二十一页，共五十四页。2023/6/2021第三节第三节 细菌细菌(xjn)(xjn)的分离培养和鉴定的分离培养和鉴定 3鉴别(jinbi)(jinbi)培养基（diferential mediu
15、m）糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-镁蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。第二十二页，共五十四页。2023/6/2022第三节第三节 细菌的分离培养细菌的分离培养(piy(piy ng)ng)和鉴定和鉴定4选择培 （selective medium）SS琼脂使致病的沙门(shmn)(shmn)菌、志贺菌容易分离到第二十三页，共五十四页。2023/6/2023第三节第三节 细菌的分离细菌的分离(fnl)(fnl)培养和鉴定培养和鉴定5特殊(tsh)(tsh)培养基 （special medium）疱肉培养基、巯基乙醇酸纳培养基第二十四页，共五十四页。2023/6/2024第三节
16、第三节 细菌的分离细菌的分离(fnl)(fnl)培养和鉴定培养和鉴定（三）培养基的选择 根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选革兰阴性(ynxng)(ynxng)杆菌。第二十五页，共五十四页。2023/6/2025第三节第三节 细菌的分离细菌的分离(fnl)(fnl)培养和鉴定培养和鉴定（三）培养基的选择（三）培养基的选择 从血液、骨髓(su su)中分离病原菌用血液增菌培养基 第二十六页，共五十四页。2023/6/2026第三节第三节 细菌的分离细菌的分离(fnl)(fnl)培养和鉴定培养和鉴定1平板划线分离法2 2斜面斜面(ximin)(ximin)接种法接种法3液体接种法二、分离及培养(piyng)（一）细菌的分离4穿刺接种法5倾注平板法6涂布接种法第二十七页，共五十四页。2023/6/2027第三节第三节 细菌的分离细菌的分离(fnl)(fnl)培养和鉴定培养和鉴定（二）细菌（二）细菌(xjn)(xjn)培养方法培养方法 1需氧培养法 2 2二氧化碳培养法二氧化碳培养法 3厌氧培养法 第二十八页，共五十四页。2023/6/2028第三节