1、结核病细菌学检查的结核病细菌学检查的重要重要(zhngyo)(zhngyo)(zhngyo)(zhngyo)作用作用茅敏第一页，共八十三页。结核病细菌学检查(jinch)(jinch)的意义 为了进一步加强结核病控制工作，实现国家结核病控制规划(NTP)目标，加强直接(zhji)(zhji)面视下短程化疗(DOTS)策略和结核病细菌学实验室质量控制，提高肺结核病人的发现率，通过实验室细菌学诊断传染性肺结核是实施DOTS策略的一个关键，而且对结核病控制项目的成功起着重要的影响作用。第二页，共八十三页。结核病细菌学检查的目的(md)(md)和任务在结核病控制工作中痰结核菌检查对于发现传染源、确定诊
2、断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。结核病细菌学检查是国家(guji)(guji)结核病控制规划(NTP)的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用。第三页，共八十三页。实验室网络实验室网络(wnglu)(wnglu)及职能及职能 在国家参比实验室的管理和监督(jind)(jind)之下，以省级参比室为中心实验室，采用自上而下质量保证体系与同级实验室室间质控相结合的方式，建立我国实验室质量控制网络。网络中的各级实验室应有效地发挥各自的职能。第四页，共八十三页。我国参比实验室网络我国参比实验室网络(wnglu)(wnglu)(wnglu)(wnglu)SNRLSN
3、RL：跨国参比实验室：跨国参比实验室NRLNRL：国家：国家(guji)(guji)参比实验室参比实验室PRLPRL：省级参比实验室：省级参比实验室PLLPLL：地市级实验室：地市级实验室CLLCLL：县级实验室：县级实验室SNRLNRLPRLPLLCLL第五页，共八十三页。现代现代(xindi)(xindi)(xindi)(xindi)结核病策略结核病策略 (DOTS)(DOTS)：1.政府承诺2.痰菌检查,发现(fxin)(fxin)病人3.医务人员直接观察下的短程化疗4.定期不间断的药品供应5.信息监测系统承诺承诺(chngnu)痰检痰检督导督导药药品品监测监测第六页，共八十三页。我国结
4、核病疫情 目前有5.5亿的人口感染了结核菌(44.5%)估算全国现有活动性肺结核病人450万,其中(qzhng)(qzhng)传染性肺结核病人（涂阳肺结核）150万 据WHO估算,我国每年新发活动性肺结核病人145万,其中(qzhng)(qzhng)传染性肺结核65万例 每年因结核病死亡13万 第七页，共八十三页。结核病细菌实验室布局原则结核病细菌实验室布局原则一、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得 与其他实验室混用；二、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；三、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍(
5、fn sh)(fn sh)的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。第八页，共八十三页。基层痰检室布局基层痰检室布局(bj)(bj)范例范例染色染色(rns)池池收集标本收集标本(biobn)用的桌子用的桌子工作台工作台采采光光用用窗窗户户（固定）（固定）实验室门实验室门试试剂剂柜柜显微镜显微镜记录用记录用的桌子的桌子可以开关的窗户可以开关的窗户第九页，共八十三页。结核菌检验实验室安全操作(cozu)(cozu)规则 结核菌检验实验室必须具有与其服务级别相应的装备(zhungbi)(zhungbi)，其原则是能满足该级别实验室的需要，使实验室人员得到充分的保护
6、，并避免造成环境污染。第十页，共八十三页。安全(nqun)(nqun)操作规则（1）1、实验室应有合理布局及合适的单向（外排）通风体系；2、实验室应具备相应的防护设备，以保护工作人员的安全和实验工作的顺利进行。分离培养(piyng)(piyng)、药物敏感性测定、菌种鉴定试验等操作应设有生物安全操作柜或接种间和通风橱等；第十一页，共八十三页。安全(nqun)(nqun)操作规则（2）3、实验室工作人员应用正确方式进行技术操作，穿戴隔离衣、口罩和帽子等；4、实验室所有带毒废弃物应灭菌及无害化处理；5、建立清洁消毒(xio d)(xio d)制度，限制非工作人员进入室内，禁止在实验室饮食和吸烟等；
7、第十二页，共八十三页。安全(nqun)(nqun)操作规则（3）6、进行下列(xili)(xili)操作时应严格按照技术规范，防止产生细菌气溶胶：涂片制作；培养液的倾倒和转移；高速混合含菌液；滴加、接种培养物；吸管稀释和混合菌悬液；取样器和震荡器的使用；细菌细胞超声粉碎；感染动物实验等。第十三页，共八十三页。分枝杆菌生物学基础分枝杆菌生物学基础(jch)(jch)(jch)(jch)简简介介结核分枝杆菌是1882年郭霍（Rober-tKoch）从肺结核病人痰标本中发现,是人类结核病的主要病原菌。分枝杆菌属裂殖菌纲,放线菌目,种类甚多,目前已命名的有56多种,一般(ybn)(ybn)可分为缓慢生
8、长和快速生长两大类。第十四页，共八十三页。结核菌生物学基础结核菌生物学基础 生物生物(shngw)(shngw)(shngw)(shngw)特性特性分枝杆菌的形态分枝杆菌的形态:结核分枝杆菌是专性需氧菌,无鞭毛、荚膜,无运动能力。形状：1.5-3.5 0.3-0.6微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠(chunzh)(chunzh)样、链状、索状者。萋-尼氏抗酸染色阳性,镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。第十五页，共八十三页。结核菌生物学基础结核菌生物学基础 生物特性生物特性分枝杆菌的结构分枝杆菌的结构:分枝杆菌由于细胞结构和细胞成分的特殊
9、性,具有经碱性染料染色后能够忍受酸性介质脱色的特征,具有其染色特征的细菌习惯上称为抗酸菌(AFB).AFB菌体细胞结构的完整性与其抗酸染色特性有着密切联系.用电子显微镜观察分枝(fn zh)(fn zh)杆菌,完整的细胞结构主要有以下部分组成:细胞壁、细胞膜、细胞质、核区、细胞器.第十六页，共八十三页。抗酸性k抗酸性是分枝杆菌的重要特征(tzhng)(tzhng)。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。k抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、结核菌的变异型（如L-型菌）可能失去抗酸性。结核菌生物学基础结核菌生物学基础(jch)(
10、jch)(jch)(jch)生物特生物特性性第十七页，共八十三页。结核菌生物学基础结核菌生物学基础(jch)(jch)(jch)(jch)培养特培养特性性生长适宜温度(wnd)(wnd)370C，PH6.8-7.2。营养要求较高。在常用的罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10多小时，根据接种菌量的多少，一般10-30天肉眼可见菌落生长。第十八页，共八十三页。结核菌检验结核菌检验(jinyn)(jinyn)方法方法一、涂片法：直接涂片法 集菌法二、培养法:
11、鸡蛋固体(gt)(gt)培养基法 （Lowenstein-JensenLowenstein-Jensen）快速培养法三、动物试验四、分子生物学诊断（PCR）五、免疫学诊断第十九页，共八十三页。各种方法可检出结核杆菌(jih(jihnjn)njn)数量（个/ml）方法方法 直接直接(zhji)(zhji)涂片涂片 集菌集菌 培养培养 动物试验动物试验 PCRPCR 菌数 10.000 1.000 100 10 1第二十页，共八十三页。一条结核杆菌在体内的繁殖一条结核杆菌在体内的繁殖(fnzh)(fnzh)情况情况结结结结 核核核核 杆杆杆杆 菌菌菌菌(ji(ji h h n n jn)jn)数数
12、数数 天数天数天数天数天数天数天数天数天数天数天数天数 1 1 1 1 2 2 2 29 9 9 9 512512512512 17171717131 072131 072131 072131 072 2 2 2 24 4 4 4 10101010 1 0241 0241 0241 024 18181818262 144262 144262 144262 144 3 3 3 3 8 8 8 8 111111112 0482 0482 0482 048 19191919524 288524 288524 288524 288 4 4 4 416161616 121212124 0964 0964
13、 0964 096 202020201048 5761048 5761048 5761048 576 5 5 5 5 32323232 131313138 1928 1928 1928 192 21 21 21 212097 1522097 1522097 1522097 152 6 6 6 6 64646464 14141414 16 38416 38416 38416 384 28282828268 416268 416268 416268 416 101010103 3 3 3 7 7 7 7 128128128128 15 15 15 15 32 76832 76832 76832 7
14、68 35 35 35 3534 53534 53534 53534 535 101010106 6 6 6 8 8 8 8 256256256256 16161616 65 53665 53665 53665 536 424242424396 8004396 8004396 8004396 800 101010106 6 6 6结核杆菌结核杆菌结核杆菌结核杆菌(ji h n(ji h n jn)jn)数数数数结核杆菌数结核杆菌数结核杆菌数结核杆菌数第二十一页，共八十三页。排菌量排菌量 1ml痰液中含菌量为1000-10.000，其痰涂片(t pin)(t pin)阳性率为40-50发现发现发
15、现发现1 1 1 1个杆菌需个杆菌需个杆菌需个杆菌需 查视野数查视野数查视野数查视野数涂片上的涂片上的涂片上的涂片上的 杆菌数杆菌数杆菌数杆菌数 每每每每mlmlmlml标本中标本中标本中标本中 杆菌数杆菌数杆菌数杆菌数100100100100 100100100100100010001000100010101010 1000100010001000100001000010000100001 110000100001000010000100000100000100000100000第二十二页，共八十三页。痰涂片痰涂片(t pin)(t pin)(t pin)(t pin)检查的意义检查的意义
16、第二十三页，共八十三页。一、痰菌检查一、痰菌检查(jinch)(jinch)(jinch)(jinch)是确定传染源的唯一是确定传染源的唯一方法方法 控制结核病流行以发现和控制传染源为主，痰涂片抗酸杆菌（AFB）阳性的肺结核患者(hunzh)(hunzh)是结核病的主要传染源，因此痰涂片AFB 镜检结果对诊断传染性结核病是一项重要指标。第二十四页，共八十三页。二、痰菌检查是确定化疗(hu lio)(hu lio)的依据 病人是否需要化疗，首先应以痰结果为准，如不查痰或查痰不对，就只能凭X线判断有无活动性，这样就可能将本来(bnli)(bnli)没有活动性、不需治疗的病人进行长期治疗。第二十五页，共八十三页。三、痰菌状况是流行病学重要指标 由于传染性结核病在流行病学中有着特殊的意义，因此在反映(fnyng)(fnyng)某一国家或地区结核病疫情严重程度的指标中，年感染率、涂阳患病率、涂阳发病率被更多关注。第二十六页，共八十三页。四、化疗方案的选择需以查痰四、化疗方案的选择需以查痰 结果为根据结果为根据(gnj)(gnj)(gnj)(gnj)排菌病人：说明在病变中藏有大量繁殖旺盛的结核菌，