1、细胞工程主要细胞工程主要(zhyo)(zhyo)技术技术第一页，共一百页。2动物细胞工程主要动物细胞工程主要(zhyo)(zhyo)(zhyo)(zhyo)技术技术l第一章第一章 动物细胞转化（诱变）动物细胞转化（诱变）l第二章第二章 细胞融合技术细胞融合技术(jsh)(jsh)l第三章第三章 哺乳动物克隆技术哺乳动物克隆技术l第四章第四章 哺乳动物胚胎培养与移植哺乳动物胚胎培养与移植l利用杂交瘤制备单克隆抗体技术利用杂交瘤制备单克隆抗体技术l干细胞技术干细胞技术第二页，共一百页。3第一章第一章 动物细胞的转化动物细胞的转化(zhunhu)(zhunhu)(zhunhu)(zhunhu)（诱变
2、）（诱变）通通通通过过过过细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养，世世世世界界界界上上上上已已已已建建建建立立立立了了了了大大大大量量量量细细细细胞胞胞胞株株株株，我我我我国国国国业业业业已已已已建建建建立立立立了了了了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。正正正正常常常常(zhngchng)(zhngchng)(zhngchng)(zhngchng)组组组组织织织织的的的的初初初初级级级级培培培培养养养养物物物物，在在在在传传传传代代代代培培培培
3、养养养养过过过过程程程程中中中中，细细细细胞胞胞胞的的的的寿寿寿寿命命命命有有有有一一一一定定定定的的的的限限限限度度度度，只只只只有有有有癌癌癌癌细细细细胞胞胞胞和和和和发发发发生生生生转转转转化化化化的的的的细细细细胞胞胞胞才才才才能能能能无无无无限限限限增增增增殖殖殖殖下去。下去。下去。下去。所所所所谓谓谓谓转化即即即即是是是是指指正正常常细细胞胞在在某某种种因因子子的的作作用用下下发发生生突突变变而而成成为为具具有癌特性的细胞。有癌特性的细胞。第三页，共一百页。4建建立立无无限限(wxin)(wxin)细细胞胞系系的的关关键键就就是是要要千千方方百百计计地地使使培培养养细细胞胞发发生生
4、转转化化，即即用用某某种种因因子子刺刺激激正正常细胞发生突变而具有癌特性。常细胞发生突变而具有癌特性。目目前前，使使正正常常培培养养细细胞胞发发生生转转化化的的刺刺激激因因子子主主要要有有三三大大类类：物物理理因因子子、化化学学因因子子和和生生物物因因子。子。第四页，共一百页。5（一）物理（一）物理(wl)(wl)因因子子能使培养细胞能使培养细胞能使培养细胞能使培养细胞(xbo)(xbo)发生转化的发生转化的发生转化的发生转化的物理因子主要是指物理因子主要是指物理因子主要是指物理因子主要是指一些电离辐射：一些电离辐射：一些电离辐射：一些电离辐射：放射性同位素的射线放射性同位素的射线放射性同位素
5、的射线放射性同位素的射线(shxin)(shxin)：60606060CoCoCoCo、14141414C C C C、131131131131I I I I、32323232P P P P、3 3 3 3H H H HX X 射线射线射线射线紫外线照射紫外线照射紫外线照射紫外线照射物物理理致致癌癌剂剂第五页，共一百页。6（二）化学（二）化学(huxu)(huxu)因子因子对细胞具有对细胞具有对细胞具有对细胞具有(jyu)(jyu)转化作用的转化作用的转化作用的转化作用的化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，其中有无机物，也有有机物。其中有无机
6、物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。无机物：砷砷砷砷、石石石石棉棉棉棉(shmin)(shmin)、铬铬铬铬化化化化合合合合物物物物、镍镍镍镍化化化化合合合合物物物物、镉镉镉镉化化化化合合合合物物物物有机物：苯苯苯苯、联联联联苯苯苯苯胺胺胺胺、杂杂杂杂环环环环烃烃烃烃、煤煤煤煤焦焦焦焦油油油油、黄黄黄黄曲曲曲曲霉霉霉霉素素素素(aflatoxin)(aflatoxin)、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱(nicotine)(nicotine)化化学学致致癌癌剂剂第六页，共一百页。7（三）生物（三）生物(shngw)(shngw)因子因子对对
7、对对细细细细胞胞胞胞具具具具有有有有转转转转化化化化作作作作用用用用的的的的生生生生物物物物因因因因子子子子为为为为肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤病病病病毒毒毒毒(tumor(tumor virus)virus)，又称，又称，又称，又称致癌病毒致癌病毒致癌病毒致癌病毒(bngd)(bngd)(oncogenic virus)(oncogenic virus)。现现现现已已已已发发发发现现现现有有有有许许许许多多多多种种种种病病病病毒毒毒毒可可可可引引引引起起起起动动动动物物物物或或或或植植植植物物物物发发发发生生生生肿肿肿肿瘤瘤瘤瘤。肿瘤病毒中有肿瘤病毒中有肿瘤病毒中有肿瘤病毒中有DNADNA病毒，也有病毒
8、，也有病毒，也有病毒，也有RNARNA病毒。病毒。病毒。病毒。第七页，共一百页。8RousRous肉瘤病毒(Rous(Rous sarcoma sarcoma virus)virus)：一一一一种种种种RNARNA病病病病毒毒毒毒，其其其其基基基基因因因因组组组组含含含含有有有有一一一一个个个个癌癌癌癌基基基基因因因因srcsrc，编编编编码码码码产产产产物物物物为为为为具具具具有有有有蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质激激激激酶酶酶酶活活活活性性性性的的的的pp60pp60srcsrc蛋蛋蛋蛋白白白白，可可可可使使使使许许许许多多多多蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质磷磷磷磷酸化，通过酸化，通过酸化，通过酸化，
9、通过(tnggu)(tnggu)级联反应，诱发细胞癌变。级联反应，诱发细胞癌变。级联反应，诱发细胞癌变。级联反应，诱发细胞癌变。pp60pp60srcsrc蛋蛋蛋蛋白白白白是是是是一一一一种种种种膜膜膜膜蛋蛋蛋蛋白白白白，结结结结合合合合在在在在质质质质膜膜膜膜的的的的内内内内表表表表面面面面，它它它它可可可可催催催催化化化化磷磷磷磷酸酸酸酸根根根根转转转转移移移移到到到到一一一一些些些些蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质的的的的酪酪酪酪氨氨氨氨酸酸酸酸残残残残基基基基上上上上，使磷酸化酪氨酸在细胞中的含量提高了使磷酸化酪氨酸在细胞中的含量提高了使磷酸化酪氨酸在细胞中的含量提高了使磷酸化酪氨酸在细胞中的
10、含量提高了1010倍。倍。倍。倍。第八页，共一百页。9(Src(Src蛋白蛋白蛋白蛋白(dnbi)(dnbi),Tyr,Tyr激酶激酶激酶激酶)P PTyrTyr蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化细胞癌变细胞癌变无活性无活性无活性无活性pp60pp60srcsrcRSV病毒中病毒中v-src基因的致癌机制基因的致癌机制(jzh)图图解解质膜质膜质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白细胞外配体细胞外配体细胞外配体细胞外配体活性活性活性活性p pp60p60srcsrc质膜质膜质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白磷酸化酪氨酸两种作用：磷酸化酪氨酸
11、两种作用：一是使细胞的正常调节机制一是使细胞的正常调节机制失调失调,细胞增殖细胞增殖(zngzh)(zngzh)失去失去控制；控制；二是使细胞的粘着性丧失二是使细胞的粘着性丧失,易发生扩散和转移。易发生扩散和转移。第九页，共一百页。10虽虽虽虽然然然然动动动动物物物物细细细细胞胞胞胞在在在在培培培培养养养养皿皿皿皿、培培培培养养养养瓶瓶瓶瓶、培培培培养养养养板板板板中中中中均均均均可可可可生生生生长长长长，但但但但在在在在体体体体外外外外利利利利用用用用培培培培养养养养罐罐罐罐进进进进行行行行大大大大量量量量培培培培养养养养就就就就不不不不象象象象培培培培养养养养细细细细菌菌菌菌和和和和酵酵酵
12、酵母母母母(jiom)(jiom)那那那那样样样样容容容容易，是动物细胞培养的技术难题之一。易，是动物细胞培养的技术难题之一。易，是动物细胞培养的技术难题之一。易，是动物细胞培养的技术难题之一。目目目目前前前前这这这这一一一一问问问问题题题题已已已已经经经经解解解解决决决决，人人人人们们们们在在在在微微微微生生生生物物物物培培培培养养养养用用用用的的的的发发发发酵酵酵酵罐罐罐罐的的的的基基基基础础础础上上上上研研研研制制制制出出出出一一一一种种种种用用用用于于于于哺哺哺哺乳乳乳乳动动动动物物物物细细细细胞胞胞胞培培培培养养养养的的的的反反反反应应应应罐罐罐罐，用用用用以以以以大大大大量量量量培
13、培培培养养养养悬悬悬悬浮浮浮浮细细细细胞胞胞胞（1 1个个个个振振振振动动动动搅搅搅搅拌拌拌拌器器器器：可可可可以以以以使使使使细细细细胞胞胞胞得得得得到到到到充充充充足的营养和氧气）。足的营养和氧气）。足的营养和氧气）。足的营养和氧气）。转化转化(zhunhu)(zhunhu)动物细胞的规模化培养动物细胞的规模化培养第十页，共一百页。11细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合(Cell(Cell fusion)fusion)又又又又称称称称为为为为细细细细胞胞胞胞杂杂杂杂交交交交(Cell(Cell hybridization)hybridization)，现现现现多多多多统统统统称称称称为为为为
14、细细细细胞胞胞胞杂杂杂杂交交交交，是是是是指指指指2 2个个个个或或或或2 2个个个个以以以以上上上上的的的的细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合成成成成1 1个个个个细胞的过程细胞的过程细胞的过程细胞的过程。人人人人工工工工的的的的细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合开开开开始始始始于于于于1950s1950s，此此此此后后后后(c(c hu)hu)作作作作为为为为一一一一门门门门新新新新兴兴兴兴技技技技术术术术发发发发展展展展非非非非常常常常快快快快，应应应应用用用用范范范范围围围围也也也也极极极极为为为为广广广广泛泛泛泛，不不不不仅仅仅仅同同同同种种种种类类类类细细细细胞胞胞胞间间间间可可可可以
15、以以以融融融融合合合合，种间远缘细胞也能融合。种间远缘细胞也能融合。种间远缘细胞也能融合。种间远缘细胞也能融合。细胞工程的发展细胞工程的发展细胞工程的发展细胞工程的发展(fzhn)(fzhn)(fzhn)(fzhn)是建立在细胞融合基础上的是建立在细胞融合基础上的是建立在细胞融合基础上的是建立在细胞融合基础上的。第二章第二章 细胞融合技术细胞融合技术(jsh)(jsh)(jsh)(jsh)第十一页，共一百页。12细细细细胞胞胞胞融融融融合合合合不不不不仅仅仅仅可可可可用用用用于于于于生生生生物物物物学学学学的的的的基基基基础础础础理理理理论论论论研研研研究究究究，而而而而且且且且在在在在生生生
16、生产产产产实实实实践践践践上上上上还还还还有有有有重重重重要要要要的的的的应应应应用用用用价价价价值值值值，如如如如目目目目前前前前在在在在单单单单克克克克隆隆隆隆抗抗抗抗体体体体的的的的制制制制备备备备、核核核核质质质质关关关关系系系系、体体体体细细细细胞胞胞胞的的的的遗遗遗遗传传传传和和和和发发发发育育育育、新新新新品品品品种种种种的的的的培培培培养养养养、免免免免疫疫疫疫作作作作用用用用、疾疾疾疾病病病病(jbng)(jbng)的的的的治治治治疗疗疗疗和和和和性性性性状状状状的的的的改改改改良良良良、潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。潜伏病毒的研究等，已取得了显著的成绩。其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备其中最突出的就是在制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体方面方面方面方面(fngmin)(fngmin)(fngmin)(fngmin)的应用！的应用！的应用！的应用！第十二页，共一百页。13根根根根据据据据所所所所用用用用促促促促融融融融剂剂剂剂的的的的不不不不