1、GB/T37746-2019前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会(SAC/TC156)归口，本标准起草单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所。本标准主要起草人：曾伟伟、王庆、吴淑锄、王英英、石存斌、宋新建、李莹莹、赵长臣。GB/T37746-20195试剂和材料5.1水：符合GB/T6682中一级水的规格，核酸抽提和RT-PCR须使用无RNA酶的去离子水。5.2 TRIzol RNA提取试剂或其他商品化的基因组RNA提取试剂盒。5.3氣仿。5.4异丙醇：一20预冷。5.5无水乙醇，5.675%乙醇：用新开启
2、的无水乙醇和DEPC水配制，一20预冷。5.7M-MLV逆转录酶(5U/L):-20保存。5.8 dNTPs:含dCTP、dATP、dGTP、dTTP各10mmol/L.5.9RNA酶抑制剂(RNasin,40U/L):-20保存。5.10 Taq DNA聚合酶(5U/L):-20保存。5.11DNA分子量标准DL1000,100bp.5.121.5%琼脂糖凝胶：按附录A中A.1配制。5.1350TAE缓冲液：按A.2配制。5.14溴化乙锭(EB,10ug/L):按A.3配制。5.15焦炭酸二乙酯(DEPC)处理的灭菌双裘水：按A.4配制。5.16PBS(磷酸盐缓冲溶液)：按A.5配制，5.1
3、7引物：逆转录引物按附录B中的B.1,引物浓度为25pmol/L:PCR引物按B.2,引物浓度为25pmol/L。5.18阳性对照：将3种基因型的GCRV分别接种草鱼性腺细胞(CO)或草鱼吻端成纤维细胞(PSF),将获得的病毒液等量混合作为阳性对照。5.19阴性对照：以CO或PSF细胞液作为阴性对照，6器材和设备6.1PCR扩增仪。6.2高速台式冷冻离心机。6.3掌上离心机。6.4混匀器。6.5冰箱(28、一20和一70的三种)。6.6水浴锅。67电泳仪。6.8电泳槽。6.9紫外观察灯或（和）凝胶成像系统。6.10研钵、剪刀和镊子。6.11微量移液器(2.5L,10L,100L,200L,1000L)和配套无RNA醇的吸头。6.120.2 mL PCR管，1.5mL和0.5mL无RNA酶的Eppendorf管。
