1、GB/T21319-2007前言本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中国农业大学、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：沈建忠、史为民、万宇平、何方洋、吴聪明、张素霞、冯才伟、彭涛、国伟。GB/T21319-2007动物源食品中阿维菌素类药物残留的测定酶联免疫吸附法1范围本标准规定了动物源食品中阿维菌素类药物残留量的酶联免疫吸附测定法。本标准适用于牛肉和牛肝中阿维菌素、伊维菌素和埃普利诺菌素残留量的测定。本标准的方法检测限：阿维菌素类药物在牛肝组织和牛肉组织中的检测限均为2g/kg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡
2、是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992，nCq1S03696:1987)3原理采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上包被偶联抗原，试样中残留的阿维菌素类药物与酶标板上的偶联抗原竞争阿维菌素抗体，加入酶标记的抗体后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪在450m处测定吸光度，吸光值与阿维菌素类药物残留量成负相关，与标准曲线比较即可得出阿维菌素类药物残留含量。4试剂和
3、材料4.1阿维菌素类药物试剂盒4.1.196孔板(12条8孔)包被有阿维菌素偶联抗原。4.1.2阿维菌素标准溶液（至少有5个倍比稀释浓度水平，外加1个空白）。4.1.3阿维菌素抗体溶液。4.1.4过氧化物酶标记物。4.1.5底物显色溶液A液：过氧化尿素。4.1.6底物显色溶液B液：四甲基联苯胺。4.1.7反应终止液：1mo/L硫酸。4.1.8毁冲液(2倍浓缩液)，4.1.9洗涤液(20倍浓缩液)。4.2乙腈、正己烷、无水硫酸钠（分析纯）。4.3碱性氧化铝柱Sep-Pak Vac12cc(2g)。4.4水：GB/T6682规定的一级水。4.5缓冲液工作液：用水将2倍的浓缩缓冲液按1：1体积比进行
4、稀释(1份2倍浓缩缓冲液十1份水)，用于溶解干燥的残留物，级冲液工作液在4可保存一个月。4.6洗涤液工作液：用水将20倍的浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释(1份20倍浓缩洗涤液十19份水)，用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4可保存一个月。GB/T21319-2007式中：A,一相对吸光度值，%：B一标准（试样）溶液的吸光度值：B。一空白（浓度为0的标准溶液）的吸光度值。将计算的相对吸光度值(%)对应阿维菌素（gL)的自然对数作半对数坐标系统曲线图，对应的试样浓度可从校正曲线算出，见式(2)：X=_AXIn1 4484884484484404864（2）m1000式中：X一试样中阿维菌素类的含量，单位为微克每千克(ug/kg):A一试样的相对吸光度值(%)对应的阿维菌素类含量，单位为微克每升(gL):f一试样稀桥倍数：1一试样的取样量，单位为克(g)。计算结果表示到小数点后两位。阳性结果应用确证法确证。9交叉反应阿维菌素：100%：埃普利诺菌素：130%；伊维菌素：33%；多拉菌素：5%：泰乐荫素：0.1%；替米考星：0.1%。10精密度本方法的批内变异系数30%，批间变异系数45%。