1、1CS13.300:13.020.40A80GB中华人民共和国国家标准GB/T21812-2008化学品蜜蜂急性经口毒性试验Chemicals-Honeybees,acute oral toxicity test2008-05-12发布2008-09-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会发布GB/T21812-2008开始。尽量避免在早春或晚秋采集蜜蜂。如果在此期间进行试验，则应经孵化器使蜜蜂羽化，并用花粉和蔗糖溶液饲养1周。如果使用经抗生素、抗螨剂等化学物质处理过的蜜蜂，自最后一次处理后的4周内不能用于毒性试验。5.2试验笼使用易于清洁，通风性良好的笼子。可
2、采用任何合适的材料，如不锈钢、金属丝、塑料、一次性木笼等。试验笼的大小要与蜜蜂的数量相适应，以提供足够的空间。5.3操作和喂养条件白天（光照下）进行的处理和观察：以最终浓度为500g/L的蔗糖水溶液作为食物。在给予试验剂量后，可不受限制提供食物，并对每笼的食物摄入量进行记录。喂食采用长50mm,宽10mm,底端开口处直径为2mm的玻璃管。5.4蜜蜂的准备将采集的蜜蜂随机分配到实验室里随机放置的试验笼中。试验开始前使蜜蜂饥饿2，以保证在试验开始时蜜蜂腹内食物含量相同。试验前用健康的蜜蜂替换出垂死的蜜蜂。5.5受试物剂量的准备如果受试物是易于与水混溶的化学品，则可以直接分散到500g/L的蔗糖水溶
3、液中。对于有技术要求的产品和一些水溶解性较低物质，可以使用毒性较低的有机溶剂、分散剂或乳化剂（如丙酮、二甲亚砜、二甲基甲酰胶)作为助溶剂。助溶剂的浓度可根据受试物的溶解性来决定，并且各个浓度组的助溶剂浓度应一致。但助溶剂的浓度一般不应超过1%。应准备适当的溶剂对照，即当使用了助溶剂和分散剂时，应分别准备两组溶液对照，一组为水溶液对照，一组为含溶剂的蔗糖溶液对照，溶剂浓度与受试组中的浓度相同。6试验程序6,1试验组和对照组试验浓度以及平行试验数量的设置应满足在95%置信限下确定LD,的统计需要。通常在进行试验时，要求在含有LD的浓度范围内，至少设置5个按几何级数排列的浓度，浓度组距比值不应超过第
4、4章中规定范围。另外，稀释因子和受试物浓度数量的设置，还应考虑以浓度对死亡竿表示的毒性曲线斜革的相关性，以及进行结果分析所选用的统计分析方法。应先进行预试验，以确定正式试验的浓度范围，最低要求：每个浓度组设三个平行，每一试验容器各放10只蜜蜂。对照组最少设3个平行，各10只蜜蜂，与处理组同时进行。对照组还应该包括助溶剂或载体对照。6.2参比物参比物应该包括在测试系列里。参比物浓度至少应选择覆盖预期LD值的3个剂量。每个剂量3个平行，各10只蜜蜂。首选的参比物是乐果，其报道的24h急性经口毒性LDs值的范围为：0.10g(a.i.)/只蜜蜂0.35g(a.i.)/只蜜蜂，见参考文献7。若有充分的
5、数据来证明预期的剂量反映，也可以接受其他的参比物，6.3暴露6.3.1剂量处理在每个蜜蜂试验组中，加入100L200L含有一定浓度受试物500g/L的蔗糖水溶液。对于低溶解度的物质则要求加大体积，如果受试物为低溶解性、低毒或在制剂中浓度较低，则要求使用较高比例的蔗糖水溶液。对每组经处理食物消耗量进行监测。食物通常在3h4内消耗完。一旦食物消耗完，将食物容器从笼中取出，换上只含有蔗糖的食物，不限量。对于一些受试物，在较高试验剂量下，蜜蜂拒绝进食，从而导致食物消耗很少或几乎没有消耗。最长到6后，用蔗糖溶液将剩余的经处理的食物换掉。对经处理食物的消耗数量进行估算（即检测经处理的食物残存的体积或质量）。