1、GB/T7628-2008前言本标准参考了AACC Method86-80 Thiamine-一Thiochrome Method(2o00年英文版)。本标准是对GB/T7628一1987谷物维生素B,测定方法的修订。本标准与GB/T7628一1987的主要差异如下：一规定了实验用水应符合GB/T6682中三级水的规格：一规定了扦样、分样方法：一盐酸水解改为硫酸水解；一增加了硅酸盐离子交换树脂的使用：一将正丁醇溶剂改为异丁醇溶剂：一提取液色泽浅、无干扰物质时，不需进行提纯步骤：一取消以干基计算测定结果的要求：一增加了未通过提纯的试样中维生素B,含量的计算公式：一增加了谷物中维生素B低含量时的测
2、定重复性的要求。本标准由国家根食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。本标准起草单位：国家粮食局武汉粮油饲料质量监督检验中心。本标准主要起草人：杨林、刘小敏、屈利文、何一帆、钱防。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-GB/T7628-1987.GB/T7628-2008谷物中维生素B,测定1范围本标准规定了用荧光分光光度计测定谷物中维生素B,的原理、试剂和材料、仪器设备、试样制各、分析步骤、结果计算及重复性。本标准适用于谷物中维生素B,的测定。本标准检出限为0.05g。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包
3、括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB5491粮食、油料检验扦样、分样法GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682一1992，ncq1S03696:1987)3原理试样经稀硫酸、淀粉酶分解后，溶液中维生素B,(硫胺素，C2H:ON:SC)在威性条件下被铁伍化钾氧化生成硫色素，即荧光色素。硫色素在异丁醇中的荧光强度与试样中维生素B,的含量成正比，依此测定维生素B,含量。4试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中三级水的规
4、格。4.1盐酸4.2乙酸钠溶液c(CHCO0Na)=2.5mol/L取205g无水乙酸钠或340g水合乙酸钠(CH3 COONa3H2O)溶于水中，稀释至1000mL。4.3乙酸溶液c(CHCO0HD=3%(体积分数)取30mL冰乙酸用水稀释至1000mL。4.4氯化钾溶液c(KC)=0.25g/mL称取250g氯化钾溶解于水中，稀释至1000mL。4.5硝酸银溶液c(AgNO)=0.01g/mL称取1g硝酸银溶解于水中，稀释至100mL。4.6淀粉酶悬浮液c=0.06g/mL取6g淀粉酶制剂(takadiastase),其活性为1：250或相当活性的其他磷酸酯酶，用2.5mol/L乙酸钠溶液
5、(4.2)制成悬浮液，稀释至100L,当日制备当日使用。4.7硅酸盐离子交换剂4.7.1活性沸石将沸石按规定筛层进行筛选，称取通过上层筛（孔径0.297mm,50目）、留存在下层筛（孔径0.177mm,80目)上的沸石100g于布氏漏斗中，用3%的热乙酸(4.3，约50C)溶液洗涤15min,应使乙酸与沸石保持接触10min15min,用真空东减压抽滤乙酸；再用0,25g/mL的热氯化钾溶液(4.4,约50C)250mL进行洗涤：最后用热水（约50C)洗涤，直至洗出液用硝骏银(4.5）检查时不出现1GB/T7628-2008氣离子。在室温或低于100烘箱中将沸石干燥后，在干燥器中冷却至室温，储
6、存于磨口瓶中备用。4.7.2硅酸盐离子交换树脂，Bio-Rex70(H型)将硅酸盐离子交换树按规定筛层进行筛选，称取通过上层筛（孔径0.297mm,50目）、留存在下层筛（孔径0.149mm,100目）上的硅酸盐离子交换树脂50g,加入300mL盐酸(4.1)，振摇10min15min,将酸倒出，再加300mL水，振摇1min,将水倒出。重复数次，直至树脂的pH为4.57.0，抽滤或离心除去多余的水分，冷藏储存(4)。当时使用，可以不除去多余的水分。4.8氢氧化钠溶液c(Na0H)=0.15g/mL将15g氢氧化钠溶于水中，冷却，稀释至100mL。4.9铁氰化钾溶液cK,Fc(CN)6=0.0
7、1g/mL将1g铁氰化钾溶于水中，稀释至100mL,贮存在具塞棕色瓶中，置于阴凉处保存。4.10碱性铁氰化钾用取0.01g/mL铁氰化钾溶液(4.9)3mL,用0.15g/mL氢氧化钠溶液(4.8)稀释定容至100mL,现配现用。也可以按每3mL氢氧化钠溶液(4.8)加入1滴铁氰化钾溶液(4.9)混合配制。4.11异丁醇(CH)2CHCH,OH空白荧光值应低于硫胺素标准工作溶液（）(4.12.3)的荧光值的1%。否则，应将异丁醇在全玻璃仪器上蒸馏，或加入活性炭振摇除去荧光杂质。4.12硫胺素溶液4.12.1硫胺素标准储备溶液(I)c(CzHm0N,SC)=100g/mL将硫胺素盐酸盐放在装有五
8、氧化二磷的干燥器中至少24h,然后，精确称取100mg溶于25%乙醇(4.14)中，并用25%乙醇稀释定容至1000mL。储存于棕色瓶中冷藏(4)，可保存数月。4.12.2硫胺素标准溶液(I)c(CzH,0N,SCI)=5g/mL准确量取5mL硫胺素标准储备溶液(1)(4.12.1)，用25%乙醇(4.14)稀释，定容至100mL.4.12.3硫胺素标准工作溶液（）c(CzH,ON4SCI)=0.2gmL准确量取4mL硫胺素标准溶液（）(4.12.2)，用0.1mol/L硫酸(4.15)稀释定容至100mL,现配现用。4.13硫酸查宁溶液4.13.1硫酸查宁储备液精确称取100mg硫酸奎宁，溶
9、于0.1mol/1硫酸(4.15)中，用0.1mol/1硫酸稀释至1000mL,储存于棕色瓶中冷藏保存。若溶液混浊则不可使用。4.13.2硫酸查宁工作液准确量取3mL硫酸奎宁储备液(4.13,1)，用0.1mol/L硫酸(4.15)稀释至1000mL,储存于棕色瓶中冷藏保存。4.14乙醇溶液25%（体积分数）将25mL无水乙醇加人到水中，稀释定容至100mL,摇匀。4.15硫酸溶液c(1/2H,S04)=0.1m0l/L将2.8mL浓硫酸加人到水中，稀释定容至1000mL。5仪器设备5.1荧光分光光度计。5.2电热恒温水浴：100C。5.3实脸室用直空泵。5.4电热恒温箱：37C40C。5.5吸附分离柱（见图1）：容器全长约235mm:上端储液槽（外径长度）30mm70mm,容量为50mL:中部吸附管（外径长度）8mm130mm;下端为35mm的毛细管，其孔径在液体通过时的流2