1、几种不同(b tn)的胸腺肽药物,刘凯华,第一页，共六十七页。,胸腺激素类免疫(miny)调节剂发展-胸腺肽,胸腺肽最早是由雪兰诺公司从小牛胸腺提取的一种胸腺因子,1980年在意大利上市,尔后在欧美注册和临床。生产厂家已超过百余家，国家食品药品监督管理局（SFDA）已核准下发了389个注射剂生产批文，有8家企业生产口服(kuf)制剂。胸腺肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液、肠溶片、肠溶胶囊和胸腺肽氯化钠注射液5种。,第二页，共六十七页。,胸腺激素类免疫(miny)调节剂发展-胸腺肽,但由于(yuy)胸腺肽有效成分不明确、含量低、含致敏大分子蛋白，不符合WHO对免疫调节剂的五项标准（1、化学成分
2、明确；2、易于降解；3、刺激适中；4、不致癌，致畸变；5、无累积毒性，无不良反应及后继作用），因而疗效低、安全性差，不良反应尤其是严重过敏反应频繁发生，由此引发了国家药品不良反应监测中心对该类药品进行通报。,第三页，共六十七页。,胸腺激素类免疫(miny)调节剂发展-胸腺五肽,在对胸腺素类药物的研制中，科学家通过化学合成的方法制造出了胸腺生成素，并在此基础上进一步开发了胸腺五肽。1985年，胸腺五肽在意大利以商品名“Timunox”上市。1997年，我国研发合成胸腺五肽，随后四川源基制药、北京(bi jn)双鹭药业、丹东医创药业等企业的产品也获准生产。截至2006年6月，SFDA已核准36家企
3、业生产胸腺五肽原料药及其注射剂。胸腺五肽的主要剂型有：冻干粉针剂、注射液,第四页，共六十七页。,胸腺激素类免疫(miny)调节剂发展-胸腺肽1(T1),在上世纪末，意大利赛生公司的产品“胸腺肽1”已进入我国市场，而且(r qi)在国外也已在30多个国家获得批准上市。2002年底，SFDA批准成都地奥九泓、海南双成药业、海南中和药业生产原料药及注射剂。胸腺肽1(T1)的主要剂型有：粉针剂,第五页，共六十七页。,胸腺类制剂(zhj)的发展,普通胸腺肽 安全性大大提高 胸腺五肽 安全性和疗效(lioxio)都实现了质的飞跃 胸腺肽1,被2010版药典收载：安全(nqun)，有效，质量可控,第六页，共
4、六十七页。,胸腺肽1受到高度(god)认可,被2010版中国药典收载胸腺肽、胸腺五肽未被收入进入国家基本医疗保险(boxin)、工伤保险(boxin)和生育保险(boxin)药品目录（2009年版）胸腺肽、胸腺五肽、亮菌甲素、香菇多糖、免疫核糖核酸等均未进入 进入中国国家处方集收录于肿瘤项下,第七页，共六十七页。,神经-内分泌(fnm)系统主要通过神经纤维、神经递质和激素调节免疫系统功能；免疫系统则通过分泌(fnm)多种细胞因子，反馈信息，调节神经-内分泌(fnm)系统。,第八页，共六十七页。,胸腺肽类激素种类(zhngli)及功能,第九页，共六十七页。,（一）氨基酸的结构(jigu)通式,天
5、然(tinrn)氨基酸在结构上的共同特点为：,(1).与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基，因而称为-氨基酸(2).除甘氨酸外,其它所有(suyu)氨基酸分子中的-碳原子都为不对称碳原子,所以：A.氨基酸都具有旋光性。B.每一种氨基酸都具有D-型和L-型两种立体异构体。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。,第十页，共六十七页。,氨基酸的构型和存在(cnzi)形式,构型（用D、L表示(biosh)）：,-氨基酸通式(tngsh),除甘氨酸，天然-氨基酸都是有旋光的，而且都是L型的。,L型-氨基酸,D型-氨基酸,L-甘油醛,第十一页，共六十七页。,+,甘氨酰甘氨酸,肽键(ti jin),（二）肽
6、：肽键是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水(tu shu)缩合而形成的化学键。,第十二页，共六十七页。,蛋白质的分子结构(fn z ji u)包括 一级结构(primary structure)二级结构(secondary structure)三级结构(tertiary structure)四级结构(quaternary structure),第十三页，共六十七页。,蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列(pili)顺序。,一、蛋白质的一级结构(jigu)(Primary structure）,主要(zhyo)的化学键肽键，有些蛋白质还包括二硫键。,第十四页，共六十七页。,15,2
7、0,25,28,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,-OH,Ac-,胸腺肽1,化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度(chnd)99.8%正常人血清浓度为400-1000pg/ml,10,5,第十五页，共六十七页。,二、蛋白质的二级结构(jigu),主要(zhyo)的化学键：氢键,第十六页，共六十七页。,(二）主链构象的分子(fnz)模型,-螺旋(-helix)-折叠(-pleated sheet)-转角(z
8、hunjio)(-turn)无规卷曲(random coil),第十七页，共六十七页。,1.-螺旋(luxun),左手和右手(yushu)螺旋,第十八页，共六十七页。,2.-折叠(zhdi),在-折叠中，-碳原子总是处于折叠的角上，氨基酸的R基团处于折叠的棱角上并与棱角垂直，两个氨基酸之间的轴心距为0.35nm.-折叠结构的氢键主要是由两条肽链之间形成的；也可以在同一肽链的不同部分之间形成。几乎所有肽键都参与链内氢键的交联，氢键与链的长轴接近垂直。-折叠有两种类型(lixng)。一种为平行式，即所有肽链的N-端都在同一边。另一种为反平行式，即相邻两条肽链的方向相反。,第十九页，共六十七页。,3
9、.-转角(zhunjio),-转角(zhunjio),在-转角部分，由四个氨基酸残基组成.四个形成转角的残基中，第三个一般均为甘氨酸残基弯曲处的第一个氨基酸残基的-C=O 和第四个残基的 N-H 之间形成氢键(qn jin)，形成一个不很稳定的环状结构。这类结构主要存在于球状蛋白分子中。,第二十页，共六十七页。,超二级结构(jigu)；,（三）超二级结构(jigu)和结构(jigu)域,第二十一页，共六十七页。,三、蛋白质的三级结构(jigu),整条肽链中全部(qunb)氨基酸残基的三维空间的排布位置。,四、蛋白质的四级结构(jigu),蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作
10、用，称为蛋白质的四级结构。,第二十二页，共六十七页。,一级结构(jigu)二级结构(jigu)三级结构(jigu)亚基四级结构(jigu),总结(zngji)：蛋白质分子从一级结构到高级结构,第二十三页，共六十七页。,第二十四页，共六十七页。,胸腺肽1与普通(ptng)胸腺肽的比较,注：胸腺肽实际(shj)有效成分就是胸腺肽1，但含量极低（不到0.6%）,第二十五页，共六十七页。,从工艺上说，普通胸腺肽以动物胸腺为原料，经过捣碎、提取、离心、过滤，分装。普通胸腺肽所标示的20mg、50mg等，实际上是总蛋白(dnbi)含量。也就是含氮物质总量。在新的试行标准中，为提高质量，规定必须含有一定比例
11、的胸腺肽1。这实际上从另一方面证明普通胸腺肽中实际真正起作用的是胸腺肽1，但可惜的是普通胸腺肽中胸腺肽1的含量只有0.6%左右。,第二十六页，共六十七页。,胸腺肽1与胸腺五肽的比较(bjio),注：胸腺五肽给药方式和剂量国内外相差(xin ch)极大，缺少循证医学证据支持,第二十七页，共六十七页。,胸腺肽1与胸腺五肽最大的不同在于胸腺肽1是人体内源性物质，与体内的胸腺肽1结构和活性都完全一致，都是28肽。而胸腺五肽却不是人体内源性物质，只是胸腺生成素II的一个片段，胸腺生成素II是49肽，五肽却是只有5个氨基酸的寡肽，连蛋白质的3级结构都不具有，很难说其具有胸腺生成素II的全部活性。可能正因为
12、如此(rc)，五肽仅在中国和意大利被批准上市。,第二十八页，共六十七页。,15,20,25,28,Ala,Asp,Ala,Ala,Val,Asp,Thr,Ser,Ser,Glu,Thr,Thr,Lys,Asp,Leu,Lys,Lys,Glu,Val,Val,Glu,Glu,Ala,Glu,Asn,Ile,Lys,Glu,-OH,Ac-,ZADAXIN(胸腺肽1)注射液,化学合成的28个氨基酸组成的多肽,纯度 99.8%正常人血清(xuqng)浓度为400-1000pg/ml,10,5,第二十九页，共六十七页。,T1在活体(hu t)外的免疫调节功能,细胞因子及受体方面(fngmin),T细胞(
13、xbo)的增生及分化方面,白介素2（IL2）的浓度 干扰素（IFN）的浓 度 高亲和力IL2受体的表达 干扰素（IFN）的浓 度,CD3，CD4及CD8细胞的增生 由地塞大米松诱发的胸腺细胞凋亡激活NK细胞活性 CFU的前体细胞数目,第三十页，共六十七页。,第三十一页，共六十七页。,第三十二页，共六十七页。,胸腺肽1增加(zngji)Th1 亚型,Andreone et al(2001)Journal of Viral Hepatitis 8:194-201,*p 0.05,CD4,Th1 细胞分泌(fnm)IL-2,INF g,Th2 细胞分泌(fnm)IL-4,IL-1,*,*,*,*,*
14、,*,HCV阳性病人的外周单核细胞经胸腺肽1培育,Th1在抗肝炎治疗中是清除病毒所必需,第三十三页，共六十七页。,第三十四页，共六十七页。,胸腺肽1增加NFkB转录因子(ynz)表达,第三十五页，共六十七页。,胸腺肽1(胸腺肽1)启动人体(rnt)免疫机制来抗病毒、抗癌,增加靶细胞MHC-I类抗原的表达直接(zhji)抑制病毒的复制直接抑制肿瘤细胞生长的作用,增产(zng chn)NK,CD4+,CD8+,Th1,增加IL-2,INF-,IL-2R,胸腺肽1的双重作用机制,免疫调节机制,直接抗病毒、肿瘤机制,第三十六页，共六十七页。,STEM CELL,NK CELL,胸腺肽1作用(zuyng
15、)机制,靶细胞,靶细胞,CD4+T-CELL,CD8+T-CELL,IL-2,INF-,Th1,CTL,间接(jin ji)作用促进T细胞的增生和分化促进细胞因子的表达(IL-2、INF、IL2R）,直接作用增强MHC-I类抗原表达(biod)直接抑制病毒的复制增强谷胱苷肽的水平,第三十七页，共六十七页。,胸腺肽1的作用(zuyng)机制,第三十八页，共六十七页。,胸腺肽1的临床(ln chun)应用,1、在慢性病毒性肝炎治疗中的应用2、在肿瘤治疗中的应用3、在免疫功能低下人群中作为疫苗增强(zngqing)剂的 应用4、在其他领域中的应用 各种免疫功能缺陷和异常患者往往伴随有免疫功能低下,因
16、此胸腺素1在临床上已开始被应用于治疗重症感染、慢性肾炎、红斑狼疮、风湿或类风湿性关节炎及艾滋病等疾病的治疗中,且均表现出不同程度的临床疗效.,第三十九页，共六十七页。,胸腺肽a1的合成(hchng)工艺,胸腺肽a1是一条由28个氨基酸构成的肽链，人工合成时，是将首个氨基酸固定于固体树脂上，通过28步反应(含末端乙酰化一步)，将其他27个氨基酸一个个分别按序列接上，然后将整条肽链自树脂上“切割”下来，得到的粗品再进入纯化阶段，经多级次色谱柱分离，最终得到纯度极高的胸腺肽a1单体。以上是对采用固相多肽合成技术生产胸腺肽a1的最简单描述。首先，任何化学反应均受化学平衡常数的制约，每一步反应收率均100；假设肽合成反应的每一步收率均达到90，则连续28步反应之后终产品收率仅5(09的28次方)；其次，在经历如此多步合成反应之后，终产品中混杂的各步反应中间体种类近乎(jn hu)天文数字，为得到高纯度胸腺肽a1单体，势必进行多级多次纯化，每次纯化过程又都涉及产品收率问题，目标肽分子在纯化过程中的损失在所难免。,第四十页，共六十七页。,进口胸腺肽1具有(jyu)独特的二维空间结构,磁共振成像（MR