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转基因产品检测 实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测方法 GBT 19495.5-2018.pdf

1、GB/T19495.5-2018前言GB/T19495转基因产品检测分为如下几部分:一GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义:一GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求:一GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法:一GB/T19495.4转基因产品检测实时荧光定性聚合酶链式反应(PCR)检测方法一GB/T19495.5转基因产品检测实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测方法:一GB/T19495.6转基因产品检测基因芯片检测方法:一GB/T19495.7转基因产品检测抽样和制样方法;一GB/T19495.8转基因产品检测蛋白质检测方法;一GB/T19495.

2、9转基因产品检测植物产品液相芯片检测方法。本部分为GB/T19495的第5部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分代替GB/T19495.5一2004转基因产品检测核酸定量PCR检测方法。与GB/T19495.5一2004相比,除编辑性修改外主要技术变化如下:一修改了标准的适用范围;一增加了分别基于基体标准物质以及质粒标准分子对样品中转基因植物品系进行定量检测的操作规程;一增加了大豆、玉米、油菜、棉花、水稻、马铃薯、甜菜和木瓜等转基因植物品系拷贝数百分含量的定量检测方法。本部分由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本部分起草单位:中国检脸检疫科学

3、研究院、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人:黄新、李想、高宏伟、凌杏园、朱水芳、陈洪俊、潘良文、曹际娟、章桂明。本部分所代替标准的历次版本发布情况为:-GB/T19495.5-2004.GB/T19495.5-20183.1.5Ct值cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的阀值时所经历的循环数。3.1.6定量下限limit of quantification;LOQ在准确度和精确度处于可接受范围内时,样品中可稳定定量的分析物最低量或浓度。3.1.7标准物质reference mate

4、rial具有一种或多种足够稳定、均一和确定的特性值,用以对设备进行校准、对测量方法进行评价或为材料定值的物质或材料。3.1.8基体标准物质matrix reference material来源于植物原材料(如植物种子、叶子、根茎等),通过对转基因品系及与其对应的非转基因品种材料通过一定质量比进行混合而制成的具有一定转基因成分百分比含量的标准物质。3.1.9质粒标准分子plasmid reference molecule一种稳定存在的重组质粒分子,其包含了转基因检测的目标序列片段(如筛选基因片段、功能基因片段或品系特异性片段等),以及物种特异的内标准基因片段,可用于转基因产品定性定量检测。3.2

5、缩略语下列缩咯语适用于本文件。ACPl:酰基载体蛋白基因(acyl carrier protein1)ADHl:乙醇脱氢酵1基因(alcohol dehydrogenase1)BHQ1:黑洞猝灭基团1(black hole quencher1)bp:战基对(base pair)Cf:采用质粒标准分子作为标准物质进行转基因成分定量检测的转换系数(conversion factor)CHY:木瓜凝乳蛋白酶基因(chymopapain gene)CruA:油菜种子储藏蛋白基因(cruciferin A gene)DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid)dATP:脱氧腺苷三磷

6、酸(deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dNTP:脱氧核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)EDTA:乙二肢四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)FAM:羧基荧光素(6-carboxyfluorescein)GS:谷氨酸合酶基因(glutamine synthase gene)Lectin:植物凝集素基因MGBNFQ:小沟结合物无荧光猝灭基团(minor groove binder nonfluorescent quencher)PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)PLD:磷脂酶D家族基因(phospholipase D family gene)ROX:一种荧光染料(carboxy-X-rhodmine).SAH7:类拟兰芥属同源序列7的棉花内源基因(sinapis arabidopsis homolog7gene)

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