1、GB/T3681820185试剂5.1试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。1%次氣酸钠溶液，无水乙醇，75%乙醇、无菌蒸馏水。V8汁、麦芽提取物、马铃薯，琼脂、小麦。5.2培养基V8汁麦芽提取物培养基、小麦培养基、PDA培养基，配方参见附录B。6病原菌鉴定6.1症状检查在芽、针叶、枝条或茎上出现橘色至褐色病斑，受侵严重时会出现细弱、扭曲的橄枝或丛枝，甚至造成枝条枯死，树干上则会形成遗疡斑。在病斑上的黑色小点为病菌的分生孢子器，在茎或针叶上单生或聚生，深褐色至黑色，子座状，有时连成一片，约1m大小。子囊盘一般出现在树皮、死亡枝条或针叶基部，聚生，表面开口，有短柄，在潮湿条件下呈奶油色
2、或浅灰色。将可疑样品带回实验室做进一步检验，记录样品品种、数量、来源国及取样地点、取样人和取样日期等信息。6.2直接镜检将有成熟子实体的病枝或针叶置于体视显微镜下检查，挑取病部子实体制成玻片，置于显微镜下进行镜检及病原菌的分离培养。6.3保湿培养将有上述症状但无子实体的组织，进行保湿培养。将枝条或针叶置于密闭的塑料盒或袋中，1？下每天16h光照/8h黑暗交替培养，待发现子实休时，进行显微镜检及病原菌的分离培养。6.4分离培养6.4.1针叶上病原菌的分离培养将针叶从柯梢上取下，用自来水冲洗30min,1%的次酸钠表面消毒10min,无菌水冲洗3次，在灭菌滤纸上晾干，剪成3mm长小片，置于水琼脂培养基中510黑暗培养3周左右，待长出茵丝后转到V8汁麦芽提取物培养基上17每天16h/8h黑暗交替培养。6.4.2树梢、树枝及茎干上病原菌的分离培养取树梢、树枝及茎干的发病部位，用自来水冲洗30min,1%的次氯梭钠表面消毒10min,无菌水冲洗3次，在灭菌滤纸上晾干，剥去树梢、树枝及茎干的外皮，剪成3mm长小片，置于水琼脂培养基510黑暗培养3周左右，待长出菌丝后转到V8汁麦芽提取物培养基上17每天16/8h黑暗交替培养。如果不产孢，也可将病菌接种到小麦培养基上刺激产孢。
