1、UDC636.085B46B中华人民共和国国家标准GB9840-88饲料添加剂维生素D3微粒Feed additive Vitamin D:beadlets1988-09-20发布1989-03-01实施国家技术监督局发布GB9840-885.6.1样品前处理a.称取样品适量，使含维生素D10万1.U.,精确到0.0002g,置皂化瓶中；b.加95%乙醇(GB679)20mL,5mL20%抗坏血酸钠溶液(5.1.4)（临用新配），3mL50%氢氧化钾溶液(5.1.1)（临用新配），置90水浴回流30min,迅速冷却：c,自冷凝管顶端加水25mL,冲洗冷凝管的内壁，将皂化液移至500mL(甲)分
2、液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑油)：d.皂化瓶中用215mL水，210mL无水乙醇(GB678)清洗，洗液并入（甲）分液漏斗中，e,(甲)分液漏斗加入不含过氧化物的乙醚(5.1.5)250mL,每次振摇30s,静置，分层.把水层转移至250mL(乙)分液漏斗中：【.水层用10mL乙醇、50mL乙酰振摇30s,静置，分层，把水层转移至皂化瓶中，把乙酰层转移至(甲)分液漏斗中，用210mL乙醚洗涤（乙）分液漏斗.洗液合并在（甲）分液漏斗中：g.把水层再转移至（乙）分液漏斗中，用50mL乙醚提取一次，弃去水层，乙醚层再并入（甲）分液漏斗中：h.合并后的乙醚液用250mL碱性洗涤液(5.1.6
3、)洗涤，振摇，静置，分层.弃去水层：i.乙醚液用每次50mL水洗涤，直至洗液遇酚酞液(5.1.7)不显红色为止，1.将乙醚层放入250mL量瓶中，用适量乙醚洗涤（甲）分液漏斗，洗液并入量瓶中，用乙酵稀释至刻度并摇匀。5.6.2测定5.6.2.1测试条件a.高压液相色谱仪：b.紫外检测器：波长254nm:c.分析柱：硅胶柱lichrosorb sibo5um;d.流动相：正已烷：正戊障(10003)：e.流速：2.0mL/min:【.灵敏度：0.05AuFS;5.6.2.2测试方法精密吸取乙醚提取液20mL,于100mL茄形瓶中，加数粒2,6-二叔丁基-4甲基苯酚(BHT),将圆底茄形瓶置于真空蒸发器上，60水浴蒸干取下，冷却后，准确加入10mL内标分析液，溶解残留物，过滤。过滤液进样100uL,记录所得色谱蜂。5.6.2.3计算和结果的表示A.样品中VD:含量按式(2)计算：VD,含量(L.U./g)=P0+(=X)X,XWnXF.X4X10Pin X W.X I(2)式中：P。一样品中VD蜂的响应值：P一样品中预VD,峰的响应值：F一预VD转换成VD,的转换因子：F。一一校止因子，W。一内标物称量，g:V、-一一样品稀释倍数：P。一一内标峰的响应值：W。一一样品称量，8；。一内标稀释倍数。3
