1、GB/T27623.1-20113.6实验菌株3.6.1实验菌株应选用来自国家级微生物菌种保藏中心的标准致病菌株或具有资质的菌种保藏机构提供的分类地位明确的致病菌株，也可以使用临床分离的致病菌株，使用临床分离的致病菌株时应至少鉴定至属。其中质控菌株为荧光假单胞菌(AS1.180)和副溶血弧菌(AS1.1614),质控菌株应来自国家级微生物菌种保藏中心或具有资质的菌种保藏机构。3.6.2日常使用的质控菌株荧光假单胞菌应在-H琼脂上，副溶血弧菌应在添加1.5%氯化纳的M-H琼脂上于4一8的冷藏箱中保存：质控菌株的使用代次为3代一14代；质控菌株应至少一个月更换一次，由冻于或超低温冷冻保存菌种移种或
2、购买新菌种。3.7质控药物：盐酸土霉素，含量95%以上，应符合中华人民共和国兽药典(2010年版)要求。4仪器设备4.1恒温箱：可满足281。4.2移液器：量程40L200L、100L1000L、1000L5000L。4.3无菌操作台：可满足无菌要求的洁净工作台、生物安全柜或无菌室等。4.4分析天平：精确至1mg。5操作步骤5.1抗菌药物母液的制备5.1.1抗菌药物母液的浓度抗菌药物母液的浓度应至少为最高测试浓度的10倍，但对于某些溶解性低的抗菌药物可以制备较低浓度的母液。5.1.2溶剂和稀释液用于制备抗菌药物母液的溶剂和稀释液见附录B。除蒸馏水可高压灭菌外，其余应采用0.22m微孔滤膜过滤除
3、菌。5.1.3母液的制备称取不低于0.10g抗菌药物，精确到1mg:在无菌条件下使用5.1.2中溶剂和稀释液配制抗菌药物母液。5.2抗菌药物药液浓度的建立抗菌药物药液的浓度按倍比稀释来建立，试验要在无菌条件下于适宜的玻璃试管中进行。试验中取10支试管排成一列，在第1管中加入适量的渔用抗菌药物母液和-H肉汤（总体积以2mL10mL为宜)，使其浓度为试验的最高农度。第2一10管均加入第1管总休积二分之一的M-H肉汤。第1管混匀后取二分之一的量加入第2管中，混匀后从第2管中取二分之一的量加入第3管中，依次类推到第8管，混匀后第8管吸取二分之一的量弃掉，第9、10管不加药物，第9管作为细菌生长情况对照
4、，第10管作为无菌控制对照。GB/T27623.1-20115.3菌液接种5.3.1起始培养菌落接种的菌落由新鲜的M-H琼脂培养基平板划线待测菌的单菌落来制备，孵育温度为28，除非是缓慢生长菌株，否则平板培养时间不应超过24。5.3.2接种菌液的制备接种菌液通过在0.85%无菌生理盐水中，乳化至少3个起始培养单菌落来制备。用0.85%无茵生理盐水校正菌液浓度与0.5麦氏单位标准比浊管相同（标准比浊管见附录C),即菌液浓度为1X108CFU/mL2X108CFU/mL。然后用M-H肉汤稀释至所需浓度。5.3.3菌液接种菌液接种后的最终浓度约为5105CFU/mL。一旦接种菌液在M-H肉汤中被稀释
5、，则15min内，接种菌液应加入每个试管中，但作为无菌控制的试管除外。5.4期育接种菌液后应尽快放入28恒温箱中孵育，标淮孵育时间为24h,但对缓慢生长菌株（如爱德华氏菌)孵育时间为48h。5.5读取试验结果抗菌药物敏感性试验结果用最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)表示，即肉眼观察试管中细菌生长完全被抑制时的最小抗菌药物浓度记录为MC:同时测定质控药物对质控菌株的MIC,6质量控制6.1最小抑菌浓度(MC)的控制限值根据实验菌株的特性，选用荧光假单胞菌(AS1.180)或副溶血弧菌(AS1,1614)为质控菌株，使用盐酸土霉素为质控药物。盐酸土霉素对荧光假单胞菌的M1C质控范围均为2.0mg/L8.0mg/L:对刷溶血弧菌的MIC质控范围均为1.0mgL,4.0mg九；当质控药物对质控菌株的MIC超出质控范围时，MIC结果需舍弃重做。6.2污染和细菌生长控制无菌控制的培养基试管出现污染或不含抗菌药物的试管细菌未见明显生长时需舍弃全部MC结果，任何一列（排）出现跳管现象时，该列（排）MC结果应舍弃。7结果报告试验结果的报告包括受试药物对实验菌株的MIC、质控药物对质控菌株的MIC和实验菌株的名称、来源、孵育时间。