1、乙肝病毒解析(ji x)-HBV large surface protein南昌市第八人民医院,第一页，共二十六页。,病毒血清学检测(jin c)指标,直接(zhji)指标：外膜蛋白(表面抗原）、降解或代谢产物蛋白、病毒核酸DNA或RNA间接指标：各种抗体IgG、IgM等,第二页，共二十六页。,目前乙肝实验(shyn)血清学检测的需要,状况：指标不少，但是缺少以下关键指标1,什么是e-CHB肝炎（e抗原阴性肝炎）血清学指标？、抗病毒治疗没有实验室终点(zhngdin)指标，临床肝炎治疗合理用药指导，避免过度用药特别是阴性后应该持续多长时间用药？,第三页，共二十六页。,目前临床(ln chun)
2、乙肝病毒检测的缺陷,、HBeAg阴性肝炎(小三阳肝炎)的血清学诊断指标缺乏 过去认为大三阳转小三阳即HBeAg的阴转意味着乙肝病毒复制降低，传染性减弱，但是近年国内外的研究发现部分小三阳在血清转化(zhunhu)（或变异）后病毒仍然复制，而且预后更严重。但是目前没有血清免疫学指标可以检测小三阳病毒携带者是否病毒复制！、药物治疗效果评价血清学指标缺乏 由于HBsAg非常难转阴，而HBV DNA转阴停药容易反弹，抗病毒治疗缺乏终点指标！,第四页，共二十六页。,抗病毒治疗(zhlio)效果监测,临床上缺乏评估抗病毒治疗效果的指标。以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当，此时停药病情(bngqng)
3、易反复。,第五页，共二十六页。,小三阳两种预后(yhu),病毒(bngd)休眠不复制预后好,病毒保持(boch)复制水平肝硬化肝癌,什么指标能够分辨开?,第六页，共二十六页。,抗病毒治疗过程(guchng)中病毒颗粒消退顺序,最先消失(xiosh),其次(qc)消失,最后消失,DNA 阳性大蛋白阳性,DNA阴性大蛋白阳性,DNA阴性大蛋白阴性,第七页，共二十六页。,抗病毒治疗(zhlio)效果监测,临床上缺乏评估抗病毒治疗(zhlio)效果的指标。以HBV DNA阴转作为治疗的终点不恰当，此时停药病情易反复。,第八页，共二十六页。,没有指标预示治疗(zhlio)终点,期望HBsAg转阴，带来过
4、高期待，导致过度用药，增加患者负担以及浪费资源；据估计每年20-40左右的治疗是“多余(duy)”的。阴转就停药，导致过早停药，引起病情反弹,第九页，共二十六页。,寻找比外周血DNA检测(jin c)更合适的指标,大部分人熟悉的“乙肝两对半”检测，其实并非乙肝病毒的传染物质和致病物，乙肝两对半”只能反映一个人是否感染过乙肝，却不能直接深入地揭示乙肝病毒在人体内的复制(fzh)和致病情况，也就不能更好地指导临床用药和制订治疗方案。有效的办法乙肝病毒DNA定量试验，但是外周血中DNA阴转已经不能作为治疗终点还有比DNA更好的标志物吗,第十页，共二十六页。,HBeAg阴性(ynxng)活动期肝炎,H
5、BeAg 阴性活动期肝炎(n yn)临床诊断现状：(1)传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度；(2)缺乏指导合理治疗的指标；(3)HBV DNA检测不易于各级医疗机构广泛开展；(4)临床上急需能够反映HBV复制程度及指导治疗的血清学指标。,第十一页，共二十六页。,解决方案,通过研制针对复杂构象结构的大蛋白的单抗直接检测大蛋白反式激活域大蛋白是外周血中唯一可以(ky)检测的病毒反式激活因子大蛋白与肝内病毒复制密切相关，和病情反弹密切相关，是抗病毒治疗的辅助终点指标,第十二页，共二十六页。,大蛋白检测可以弥补(mb)目前项目的不足-检测Dane颗粒、管状病毒颗粒,大蛋白与肝内病毒(bn
6、gd)复制（不是外周血）密切相关用于e抗原检测的补充大蛋白晚于血液内消退，早于HBsAg消退大蛋白直接导致肝细胞损伤，直接毒性作用大蛋白具有反式激活增强病毒复制作用,第十三页，共二十六页。,HBV-LHBs临床(ln chun)使用的意义-e抗原的补充,、病毒携带者体内病毒复制的确切血清学指标，特别是e抗原变异或转化后可作为e抗原的补充。2、大蛋白具有反式激活病毒复制的能力，大蛋白存在与否可预测病情反弹，大蛋白转阴是病毒清除(qngch)的最早迹象，可以作为抗病毒治疗终点辅助指标。,第十四页，共二十六页。,HBV的表面抗原的组成(z chn),不存在(cnzi)单独前蛋白，前是大蛋白一部分,第
7、十五页，共二十六页。,乙肝病毒包膜蛋白研究进展,1995-2004年 发现大蛋白前S区有复杂构象结构，是被发现具有拓扑结构的第一个病毒(bngd)外膜蛋白1996年 发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用2002年 发现导致肝细胞病变及凋亡的主要原因是大蛋白（致病性蛋白）2003年Nature发表文章总结其反式激活机理2004年 国际上进行大蛋白特殊拓扑结构研究2004年 成功构建针对构象型表位的单克隆抗体,第十六页，共二十六页。,反式激活蛋白,在同一条核酸链上起调控基因表达作用的核酸序列称为顺式作用元件(yunjin)；反式激活（transactivation）,既某一基因的编码蛋白转而激活同
8、一基因的远离部位，或另一基因的转录和表达。研究发现乙肝病毒的一些组成蛋白具有反式激活作用。,第十七页，共二十六页。,蛋白质,DNA,反式激活(j hu)作用,第十八页，共二十六页。,大蛋白试剂临床(ln chun)研究,1、HBV DNA阳性(yngxng)标本中HBVLP的阳性符合率,注：1 阿德福韦抗病毒治疗患者(hunzh)43例，共检出HBV DNA阳性152次；2 拉米夫定抗病毒治疗患者51例，共检出HBV DNA阳性133次。,第十九页，共二十六页。,2、不同HBV DNA拷贝数中HBVLP阳性率以及(yj)OD值比较,大蛋白试剂(shj)临床研究,注：解放军传染病研究所，HBV
9、DNA拷贝数对数值(shz)与HBVLP OD值的相关系数,r=0.945,第二十页，共二十六页。,大蛋白试剂临床(ln chun)研究,注：北京地坛医院(yyun)与沈阳传染病医院(yyun)汇总，其中北京地坛医院(yyun)为阿德福韦抗病毒治疗患者标本。HBV DNA拷贝数对数值与HBVLP含量（ng）的相关系数,3、不同(b tn)HBV DNA拷贝数中HBVLP阳性率以及含量比较,r=0.935,第二十一页，共二十六页。,大蛋白试剂临床(ln chun)研究,第二十二页，共二十六页。,大蛋白试剂(shj)临床研究,5、HBV DNA、HBeAg与HBVLP三者在乙肝患者中的比较(bji
10、o),第二十三页，共二十六页。,浙江湖州中心医院拉米夫定治疗(zhlio)监测,HBVLP可以(ky)作为一个评估抗病毒治疗效果以及判定治疗终点的指标，能够合理的指导患者的用药，避免过早停药导致的病情反复。,第二十四页，共二十六页。,第二十五页，共二十六页。,内容(nirng)总结,乙肝病毒解析-HBV large surface protein南昌市第八人民医院。直接指标：外膜蛋白(表面抗原）、降解或代谢产物蛋白、病毒核酸DNA或RNA。1,什么是e-CHB肝炎（e抗原阴性肝炎）血清学指标。、HBeAg阴性肝炎(小三阳肝炎)的血清学诊断指标缺乏。但是目前没有血清免疫学指标可以检测小三阳病毒携带者是否病毒复制。病毒保持复制水平肝硬化肝癌。浙江(zh jin)湖州中心医院拉米夫定治疗监测,第二十六页，共二十六页。,