1、大肠菌群检测,第一页，共二十四页。,检验程序,检 样25g(mL)样品+225mL稀释液，均质,10倍系列稀释,选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST肉汤管,不产气,产气,煌绿乳糖胆盐BGLB)肉汤,不产气,产气,大肠菌群阴性,大肠菌群阳性,查MPN表,报告结果,检样,初发酵,复发酵,报告,第二页，共二十四页。,检 样,固体样品：在电子天平上称取25g+225mL0.85%灭菌生理 盐水液体样品：直接取用,固体样品存放罐,第三页，共二十四页。,固体样品称量,用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；翻开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮键，当显示屏上的数字
2、显示为“0时，可开始称量。,去皮键,第四页，共二十四页。,初 发 酵,取带上试管架：单料管9支装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管3支,第五页，共二十四页。,操 作 步 骤,1.用酒精棉消毒操作台,第六页，共二十四页。,操 作 步 骤,2.用酒精棉消毒双手,第七页，共二十四页。,操 作 步 骤,3.点燃酒精灯,第八页，共二十四页。,操 作 步 骤,4.为装有培养基的试管编号,第九页，共二十四页。,为试管编号,编号原那么：固体样品：1、0.1、0.01表示参加的固体样品为1g、0.1g、0.01g液体样品：10、1、0.1表示参加的液体样品为10mL
3、、1mL、0.1mL,双 料,单 料,1,1,1,0.1,0.1,0.1,0.01,0.01,0.01,第十页，共二十四页。,用量筒量取225mL0.85%灭菌生理盐水至稀释瓶中。注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内,固体样品称量后处理,第十一页，共二十四页。,液 体样 品,液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中,1mL,1mL,1mL,注意：加样液后不能振摇试管。,第十二页，共二十四页。,液体样品：吸取25mL液体样品至稀释瓶中，参加225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取1mL被稀
4、释10倍的饮用水至最后三支单料管中。,液 体样 品,25mL,1mL,1mL,1mL,注意：加样液后不能振摇试管。,第十三页，共二十四页。,固体样品：从稀释瓶中吸取1mL样液至装有9mL0.85%灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；从该试管中分别吸取1mL样液至最后三支单料管中。,1mL,1mL,1mL,1mL,注意：将样液参加装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液参加培养基后不能振摇试管。,第十四页，共二十四页。,观察初发酵结果,取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。,第十五页，共二十四页。,根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，那么取几支煌绿乳糖胆盐复
5、发酵管。,内有小倒管,复 发 酵,第十六页，共二十四页。,在有气泡的初发酵管后的相应位置放上复发酵管,用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。注意接种环的灼烧、冷却,第十七页，共二十四页。,将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。注意选择设置为361的培养箱。,361 48h 2h,第十八页，共二十四页。,观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性+，无气泡为阴性-。,+,-,-,+,-,-,-,+,-,注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产气。,第十九页，共二十四页。,查MPN表,1 1 1 11,第二十页，共二十四页。,检验人：检验日期：,固体样品,第二十一页，共
6、二十四页。,检验人：检验日期：,液体样品,第二十二页，共二十四页。,小 结,本次检验操作共取：双料管3支，单料管6支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶1个，装有9mL灭菌生理盐水的试管1支固体样品，复发酵管假设干支根据初发酵结果本次检验操作共用：固体样品：10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环 液体样品：25mL移液管1支，10mL吸量管1支，1mL吸量管2支，接种环,第二十三页，共二十四页。,内容总结,大肠菌群检测。361。装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个。注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内。吸取25mL液体样品至稀释瓶中，参加225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀。从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。将样液参加装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。复 发 酵,第二十四页，共二十四页。,