1、2023 年 6 月 20 日 第 32 卷第 12 期Vol.32，No.12，June 20，2023China Pharmaceuticals中图分类号：R917；R927文献标志码：A文章编号：1006-4931（2023）12-0072-04doi:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.12.017肝气犯胃型胃脘痛以上腹部胃脘近心窝处疼痛为主要表现1，情绪宣泄不畅以致积聚成郁气是其主要病因。西医对于胃痛多采取对症治疗，远期疗效欠佳2，而中医治疗胃脘痛历史悠久且效果显著，故可考虑结合中医治疗3-5。柴芍理气和胃合剂是我院临床验方，常用于胃痛的治疗。为建立其较准确、
2、较全面的质量标准，保证临床疗效。本研究中采用薄层色谱（TLC）法对制剂中柴胡、麸炒枳壳、黄芩、浙贝母进行定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法测定芍药苷的含量。现报道如下。1仪器与试药1.1仪器Thermo U-3000型高效液相色谱仪（美国ThermoFisher Scientific 公司）；SQP 型电子天平（德国 Sartorius公司，精度为0.01 mg）；ZF-7N型智能暗箱式三用紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）；KQ-100DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板（青岛谱科分离材料有限公司）。1.2试药柴芍理气和胃合剂（蒙城县中医院制剂室自制，16味组
3、方中药饮片均购于安徽普仁中药饮片有限公司，并经亳州市中医院袁如柏副主任中药师鉴定均为正品；批号分别为 20210501，20210502，20210503，规格为每瓶250 mL）；柴胡、枳壳、浙贝母的对照药材（批号分别为 120992-201509，120981-201605，120972-201906），黄芩苷、芍药苷的对照品（批号分别为110715-201821，110736-201943，含量均大于95%），均购于中*基金项目：安徽省亳州市科技重大专项 bzzd2021003。第一作者：刘信秋，女，硕士研究生，主管中药师，研究方向为医院制剂研发及中药质量标准，（电子信箱）。通信作者：袁
4、如柏，男，大学本科，副主任中药师，研究方向为中药鉴定及质量标准，（电子信箱）。柴芍理气和胃合剂质量标准研究*刘信秋1，李思光1，尹安坤1，牛海军2，李晓亮2，刘旭东3，袁如柏1（1.安徽省亳州市中医院，安徽 亳州236800；2.安徽九方药物研究院有限公司，安徽 合肥230088；3.安徽省亳州市蒙城县中医院，安徽 亳州233500）摘要：目的建立柴芍理气和胃合剂的质量标准。方法采用薄层色谱法对柴胡、麸炒枳壳、黄芩、浙贝母药材进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定芍药苷的含量，色谱柱为 Thermo Syncronis C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-0.2%磷酸水
5、溶液（梯度洗脱），流速为 1.0 mL/min，检测波长为 230 nm，柱温为 30，进样量为 5 L。结果柴胡、麸炒枳壳、黄芩、浙贝母的薄层色谱图斑点清晰，分离度高，专属性强，且阴性对照无干扰；芍药苷质量浓度在 0.008 40.168 9 mg/mL 范围内与峰面积线性关系良好（R2=0.999 0，n=5）；精密度、稳定性、重复性试验结果的 RSD 均小于 1.0%；平均加样回收率为 104.14%，RSD 为 0.45%（n=6）。结论所建立的方法操作简便、专属性强、稳定性及重复性良好，可用于柴芍理气和胃合剂的质量控制。关键词：柴芍理气和胃合剂；薄层色谱法；高效液相色谱法；质量标准Q
6、uality Standard of Chaishao Liqi Hewei MixtureLIU Xinqiu1，LI Siguang1，YIN Ankun1，NIU Haijun2，LI Xiaoliang2，LIU Xudong3，YUAN Rubai1（1.Bozhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Bozhou，Anhui，China236800；2.Anhui Joyfar Pharmaceutical Research Institute Co.，Ltd.，Hefei，Anhui，China230088；3.Mengcheng
7、County Hospital of Chinese Medicine，Bozhou，Anhui，China233500）AbstractAbstract：ObjectiveTo establish a quality standard of Chaishao Liqi Hewei Mixture.MethodsBupleuri Radix，Bran-Fried AurantiiFructus，Scutellariae Radix and Fritillariae Thunbergii Bulbus were identified qualitatively by the thin-layer
8、 chromatography（TLC）method.Thecontentofpaeoniflorinwasdeterminedbythehigh-performanceliquidchromatography（HPLC）method.Thechromatographic column was Thermo Synronis C18column（250 mm 4.6 mm，5 m），the mobile phase was acetonitrile-0.2%phosphoric acid aqueous solution（gradient elution），the flow rate was
9、1.0 mL/min，the detection wavelength was 230 nm，thecolumn temperature was 30，and the injection volume was 5 L.ResultsThe TLC chromatograms of Bupleuri Radix，Bran-Fried Aurantii Fructus，Scutellariae Radix and Fritillariae Thunbergii Bulbus showed clear spots，good separation，strong specificity，and no i
10、nterference from the negative reference.The linear range of paeoniflorin was 0.008 4-0.168 9 mg/mL（R2=0.999 0，n=5）.The RSDs of precision，stability and repeatability tests were all lower than 1.0%.The average recovery rate of paeoniflorin was104.14%with an RSD of 0.45%（n=6）.ConclusionThe established
11、method is simple，specific，stable and repeatable，which canbe used for the quality control of Chaishao Liqi Hewei Mixture.Key wordsKey words：Chaishao Liqi Hewei Mixture；TLC；HPLC；quality standard检验检测Inspection and Test722023 年 6 月 20 日 第 32 卷第 12 期Vol.32，No.12，June 20，2023China Pharmaceuticals国食品药品检定研究
12、院；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。2方法与结果2.1TLC 鉴别柴胡：取样品10 mL，加水饱和正丁醇溶液振摇萃取2次，每次15 mL，合并正丁醇液，依次用等体积的氨试液和正丁醇饱和的水洗涤，弃去水层，正丁醇液蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材 0.5 g，加水 40 mL，加热回流 1 h，滤过，取滤液，按供试品溶液制备方法制备对照药材溶液；按柴芍理气和胃合剂处方及工艺制备不含柴胡的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取上述溶液各5 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水-甲醇-三氯甲烷（2 7 13，V/V/V）10 下静置分层后的下
13、层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以含2%对甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液，70 加热至斑点清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视6-7。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。麸炒枳壳：取样品20 mL，加乙酸乙酯振摇萃取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯，水浴蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为供试品溶液；取枳壳对照药材0.2 g，加甲醇 15 mL，超声（功率 100 W、频率 40 kHz，下同）处理30 min，滤过，滤液蒸干，加甲醇2 mL使残渣溶解，作为对照药材溶液；按柴芍理气和胃合剂处方及工艺制备不含麸炒枳壳的阴性样品，
14、同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取上述溶液各 2 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以水-甲醇-三氯甲烷（2 7 13，V/V/V）静置分层后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铝乙醇溶液，105 加热约5 min，置紫外光灯（365 nm）下检视6，8-9。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。黄芩：取样品 1 mL，加水稀释至 10 mL，加盐酸调pH至2，加乙酸乙酯振摇萃取2次，每次15 mL，合并乙酸乙酯，水浴蒸干，加甲醇2 mL使残渣溶解，作为供试品溶液；取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1 mg/m
15、L的溶液，作为对照品溶液；按柴芍理气和胃合剂处方及工艺制备不含黄芩的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取上述溶液各5 L，分别点于同一硅胶 G薄层板上，以水-甲酸-丙酮-乙酸丁酯（1 1 3 5，V/V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 2%三氯化铁乙醇溶液，置日光灯下检视6，10。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 C。浙贝母：取样品20 mL，加浓氨试液2 mL，加三氯甲烷振摇萃取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷萃取液，水浴蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为供试品溶液；取浙贝母对照药材2.0 g，加浓氨试液2
16、mL，加三氯甲烷20 mL，超声处理 20 min，放冷，滤过，滤液水浴蒸干，加甲醇1 mL使残渣溶解，作为对照药材溶液；按柴芍理气和胃合剂处方及工艺制备不含浙贝母的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取上述溶液各5 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-浓氨试液-乙酸乙酯（2 1 17，V/V/V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，置日光灯下检视6，11-12。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 D。2.2芍药苷含量测定62.2.1色谱条件色谱柱：Thermo Syncronis C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m）；流动相：乙腈（A）-0.2%磷酸水溶液（B），梯度1.阴性对照品溶液2.对照药材溶液3.对照品溶液4-6.供试品溶液A.柴胡B.麸炒枳壳C.黄芩D.浙贝母图1薄层色谱图1.Negative reference solution2.Reference solution of medicinal materials3.Reference solution4-6.Test solut