1、病原菌的采样(ci yn)技术,广州市CDC邓志爱,第一页，共二十二页。,主要(zhyo)内容,如何正确(zhngqu)采集和处理标本选择合适的培养基和培养方法常见病原菌标本的采集食物中毒检材的处理,第二页，共二十二页。,正确采集和处理标本无菌操作血液、脑脊液及穿刺液等-无菌操作粪便、肛拭子和咽拭子等-避免(bmin)杂菌污染盛放容器无菌容器采集时间和部位在使用抗菌药物之前；选择合适的部位,第三页，共二十二页。,送检时间(shjin)和方法做好标记填好送检单立即送检置运送培养基送检4保存运送35-37保温运送安全防护人、标本、环境,第四页，共二十二页。,选择合适的培养基和培养方法(fngf)依
2、据：标本来源、可能存在的病原菌血液、脑脊液 1.部分标本直接涂片染色镜检 2.培养基：血培养瓶/管、BAP（血平板）、MAC（麦康凯平板）/EMB（伊红美蓝平板）、CA（巧克力平板）、SA（沙保培养基）3.培养方法：同时在需氧、厌氧和CO2环境培养,第五页，共二十二页。,粪便、肛拭子 SS、MAC/EMB、TCBS痰、咽拭子 1.可直接涂片染色镜检 2.BAP、CA、SA、BCYE（军团菌培养基）3.在需氧、厌氧和CO2环境培养(piyng)尿 1.做细菌计数 2.BAP、MAC/EMB、CA,第六页，共二十二页。,脓液、分泌物 1.可直接涂片染色镜检 2.EB(增菌肉汤)、BAP、MAC/E
3、MB、CA 3.在需氧、厌氧环境培养生殖道标本(biobn)1.部分标本直接涂片染色镜检 2.EB、BAP、MAC/EMB、CA、SA眼耳口鼻标本 1.部分标本直接涂片染色镜检 2.EB、BAP、MAC/EMB、CA,第七页，共二十二页。,常见病原菌标本的采集血液、脑脊液采血时间(shjin)与次数 用药前24小时内采34次血液标本，可使细菌检出率高达99%；一般在病人发热初期12天内或发热高峰时采集采血部位 一般从肘静脉采血，亚急性细菌性心内膜炎等病人则从肘动脉或股动脉采血,第八页，共二十二页。,采血量 成人(chng rn)510ml/次，婴幼儿15 ml/次脑脊液 采集35ml/次，35
4、-37保温，立即送检,第九页，共二十二页。,粪便标本自然排便采集法 挑取有脓血、粘液或絮状物部分置采便盒/保存(bocn)液/增菌液中送检直肠拭子采集法 置C-B保存液/增菌液中送检,第十页，共二十二页。,呼吸道标本咽拭采集法 尽量避免口腔正常(zhngchng)菌群污染自然咯痰法用清水反复漱口，用力自气管深部咳出当日第一口脓痰，置无菌容器中尽快送检小儿取痰法气管镜采集法,第十一页，共二十二页。,胃内采痰法 结核病人可用此法采集气管穿刺法 主要用于厌氧培养呼吸道标本采集注意事项痰液标本以晨痰为佳，咳前要充分漱口，减少口腔(kuqing)正常菌群的污染采集的痰液标本必须是肺深部的痰液而不是唾液,
5、第十二页，共二十二页。,标本(biobn)采集后及时送检，以防某些细菌在外环境中死亡。作结核分枝杆菌或真菌培养的痰液如不能及时送检，应放入4 冰箱，以免杂菌生长做结核分枝杆菌检查，最好收集24小时痰液有1/4到1/2肺部感染的病人可能发生菌血症，可同时做血培养,第十三页，共二十二页。,尿液标本中段尿采集法肾盂尿采集法 确定菌尿是否来自肾脏膀胱穿刺(chunc)尿采集法 主要用于厌氧菌培养,第十四页，共二十二页。,食物中毒检材的处理肛拭1.采用C-B保存液和液体硫乙醇酸盐培养基运送。2.C-B管：检验人员在接到C-B管样后，应立即用旋涡振荡(zhndng)器充分振荡(zhndng)混匀，然后用无
6、菌吸管分别吸取混悬液0.51ml放入11种增菌液增菌培养，病人肛拭同时接种于11种平板培养基直接分离培养。3.液体硫乙醇酸盐培养基：置厌氧培养箱培养，病人肛拭同时接种血平板/SPS平板直接分离置厌氧培养箱培养。,第十五页，共二十二页。,第十六页，共二十二页。,食品(shpn)应以无菌操作取适量食品，分别放入12种增菌液管中增菌培养。产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌分别按国标GB4789.13、14-2003作菌落计数。,第十七页，共二十二页。,外环境一般不采用直接(zhji)分离培养。分别放入12种增菌液管中增菌培养。,第十八页，共二十二页。,呕吐物 需直接进行金葡肠毒素检测，用Mini VIDAS
7、 全自动荧光免疫(miny)分析仪检测。同时进行细菌学检验。,第十九页，共二十二页。,12种增菌培养液：亚硒酸盐增菌液/MM：培养沙门菌牛肉汤：培养金黄色葡萄球菌(p to qi jn)、蜡样芽胞杆菌1%葡萄糖肉汤：培养链球菌7.5%NaCl肉汤：培养金黄色葡萄球菌嗜盐增菌液：培养副溶血性弧菌,第二十页，共二十二页。,碱性(jin xn)蛋白胨水：培养霍乱弧菌肠道增菌液：培养致泻大肠埃希菌GN增菌液:培养志贺菌、变形杆菌LB1增菌液：培养单核细胞增生李斯特氏菌布氏肉汤：培养空肠弯曲菌硫乙醇酸盐培养液/脑心浸液：培养产气荚膜梭菌,第二十一页，共二十二页。,内容(nirng)总结,病原菌的采样技术。3.培养方法：同时在需氧、厌氧和CO2环境培养。2.BAP、MAC/EMB、CA。一般从肘静脉采血，亚急性细菌性心内膜炎等病人则从肘动脉(dngmi)或股动脉(dngmi)采血。成人510ml/次，婴幼儿15 ml/次。挑取有脓血、粘液或絮状物部分置采便盒/保存液/增菌液中送检。用清水反复漱口，用力自气管深部咳出当日第一口脓痰，置无菌容器中尽快送检。有1/4到1/2肺部感染的病人可能发生菌血症，可同时做血培养,第二十二页，共二十二页。,