1、试验研究NO.06 202371饲料研究 FEED RESEARCH苦木不同部位生物碱含量的比较研究唐春风1，2 梁洁2 李金花3 张慧晔4 黄华希1*陈荣1（1.玉林师范学院 广西农产资源化学与生物技术重点实验室，广西 玉林 537000；2.广西壮族自治区药用植物园，广西 南宁 530023；3.广西生态工程职业技术学院，广西 柳州 545004；4.广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东 广州 510515）摘要：试验旨在比较苦木不同部位的苦木碱丁、苦木碱己和总生物碱含量差异。试验采用高效液相色谱法检测苦木14个不同部位中的苦木碱己、苦木碱丁含量，利用紫外分光光度法测定总生物碱含量。结果显
2、示，苦木茎心材、主根心材中总生物碱和2种生物碱单体含量均较高，叶中总生物碱含量高，但2种生物碱单体含量均较低；茎皮部、茎边材、主根皮部和主根边材中苦木碱丁含量较高，而苦木碱己含量低，枝皮部、枝木材中苦木碱己含量较高，而苦木碱丁含量较低。研究表明，苦木不同部位的苦木碱丁、苦木碱己和总生物碱含量差异较大，结果可为苦木不同部位资源在禽畜健康养殖中的合理利用提供参考。关键词：苦木；高效液相色谱；总生物碱；苦木碱丁；苦木碱己中图分类号：S 816.7 文献标识码：A 文章编号：1002-2813（2023）06-0071-04 Doi：10.13557/ki.issn1002-2813.2023.06.
3、015Comparative study on alkaloid content in different parts of Picrasma quassioidesTANG Chun-feng LIANG Jie LI Jin-hua ZHANG Hui-ye HUANG Hua-xi CHEN RongAbstract:The experiment was to compare the content of 4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one and 4,5-dinethoxycanthin-6-one and total alkaloids in diffe
4、rent parts of Picrasma quassioides.The content of 4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one and 4,5-dinethoxycanthin-6-one in 14 different parts of Picrasma quassioides were determined by HPLC.The total alkaloid content of each part was measured by ultraviolet spectrophotometry.The results showed that the co
5、ntent of total alkaloids and two alkaloid monomers in stem heartwood and main root heartwood were higher,and the contents of total alkaloids in leaves were high but the content of two alkaloid monomers were lower,The content of 4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one in stem bark,stem sapwood,taproot bark
6、and taproot sapwood was higher but the content of 4,5-dinethoxycanthin-6-one were lower,The content of 4,5-dinethoxycanthin-6-one in branch bark and branch wood was higher but the content of 4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one was lower.The study incicates that the content of 4-methoxy-5-hydroxycanthin
7、-6-one and 4,5-dinethoxycanthin-6-one and total alkaloids in different parts of Picrasma quassioides were different,the results can provide a reference for the rational utilization of different parts of Picrasma quassioides in healthy breeding of poultry and livestock.Key words:Picrasma quassioides;
8、HPLC;total alkaloids;4-methoxy-5-hydroxycanthin-6-one;4,5-dinethoxycanthin-6-one植物提取物饲料添加剂具有抗氧化、抗菌及增强免疫等功效，逐渐成为替抗添加剂的主要类型之一，在畜禽绿色养殖等方面具有重要作用1-4。苦木（Picrasma quassioides）是苦木科苦树属植物5，具抑菌抗炎、抗氧化功能，可作为饲料添加剂使用6。研究表明，苦木加入肉牛饲粮中能够提高肉牛饲料利用率7；苦木饲粮组仔猪日增重、腹泻频率均优于土霉素钙组和维吉尼亚霉素组8。中国兽药典记载苦木具清热、祛湿、解毒功效，可用于治疗畜禽风热感冒、腹泻下痢
9、等9。在兽医临床上，苦木具有改善猪生长性能、预防保育猪腹泻10、改善动物消化性能、提高免疫力、预防仔猪腹泻等作用11。关于苦木药用部位的记载和实际应用方法较为复杂12-13，多部典籍记载苦木的根、根皮、木材（去皮茎木）、茎皮、叶乃至花、果全株均可作为药材使用，且不同部位用量标准存在差异12-15。虽然苦木资源利用部位及其用量记载多样，但各药用部位的总生物碱含量，以第一作者：唐春风，硕士，主管中药师，研究方向为中兽药和植物饲料添加剂检测分析。通信作者：黄华希，硕士，高级实验师。基金项目：国家自然科学基金资助项目（项目编号：31660090）；广西科技基地和人才专项（项目编号：桂科AD201590
10、90）；玉林师范学院2022年度高层次人才科研启动基金项目（项目编号：G2022ZK18）收稿日期：2022-08-26试验研究NO.06 202372饲料研究 FEED RESEARCH及部分生物碱单体含量的变化规律等资料尚不完整，比如仅检索到苦木茎、枝的总生物碱含量的报告16，缺乏根皮、茎皮、果实等部位部分生物碱单体含量报道数据17-18。因此，本研究选择苦木现行标准中的限量指标成分13,19，即总生物碱、苦木碱己和苦木碱丁为定量测定指标，比较分析苦木主根（主根皮部、主根边材、主根心材）、侧根（侧根皮部、侧根木材）、须根、茎（茎皮部、茎边材、茎心材）、侧枝（侧枝皮部、侧枝木材）、叶、雄花、
11、果共14个部位中总生物碱、苦木碱己和苦木碱丁含量，从而探究苦木各部位中3种成分的变化规律，以期为苦木资源的合理使用提供参考。1材料与方法1.1试验材料苦木采集自广西河池市东兰县石山区，经广西药用植物园彭玉德高级工程师鉴定为苦木科苦树属植物苦木（Picrasma quassioides），其中雄花在 2021 年 4 月采收，根、侧根、须根、茎（树干）、枝（侧枝）、叶于2021年6月采收自同一株系，同一时间地点不同株系采收果实。采收后及时分为皮部（树皮）、木材，木材中有心材的分出心材。共分出茎皮部、茎边材、茎心材，枝皮部、枝木材，主根皮部、主根边材、主根心材，侧根皮部、侧根木材，须根、雄花、果、
12、叶共14个部位；枝为3年生的木质化硬枝，阴干冻藏。1.2仪器与试剂Agilent 1260 型高效液相色谱仪（DAD 检测器，Agilent Chemstation 化学工作站）、KQ5200DE数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）、Sartorius电子分析天平（德国赛多利斯公司）、Milli-Q型超纯水机（美国Millipore公司）、101-1B电热恒温鼓风干燥箱（绍兴市易诚仪器制造有限公司）、UV-5100B紫外分光光度仪（上海精密科学仪器有限公司）、HH-4数显恒温水浴锅（金坛区西城新瑞仪器厂）、SHB-循环水多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）、RZ01C旋转蒸发器（郑州长城
13、科工贸有限公司）、pH-25型pH计（上海越平科学仪器有限公司）。苦木碱己（4-甲氧基-5-羟基铁屎米酮，简称苦木酮或苦木碱F）对照品购自四川省维克奇生物科技有限公司（批 号 为：wkq20101401，含 量 98%），苦 木 碱 丁（4，5-二甲氧基铁屎米酮，简称苦木碱D）对照品购自四川省维克奇生物科技有限公司（批号为：wkq20101005，含量98%），水为自制超纯水，乙腈为色谱纯。1.3苦木不同部位的2种生物碱单体含量测定1.3.1对照品溶液的制备生物碱单体定量分析的具体方法参考文献18进行。精密称取苦木碱己6.64 mg，加甲醇定容至 10 mL 制成650.72 mg/L 苦 木
14、 碱 己 储 备 液；精 密 称 取 苦 木 碱 丁6.60 mg，加入甲醇定容至50 mL制成12.936 mg/L苦木碱丁储备液。分别精密量取苦木碱己（650.72 mg/L）、苦木碱丁（12.936 mg/L）各1 mL，置于100 mL容量瓶，加甲醇至刻度，配制成含苦木碱己浓度为6.507 2 mg/L，苦木碱丁浓度为1.293 6 mg/L的混合对照品溶液，4 条件下冷藏备用。1.3.2色谱条件Kromasil 100-5 C18 色 谱 柱（4.6 mm250 mm，5 m），乙腈（A）-乙酸铵（B，质量浓度为25 mmol/L，冰乙酸调节 pH 值为 4.0）为流动相，采用梯度洗
15、脱（06 min，15.0%19.5%A；67 min，19.5%22.5%A；714 min，22.5%23.0%A；1420 min，23.0%30.0%A；2025 min，30.0%40.0%A；2540 min，40.0%50.0%A），流速1.0 mL/min，柱温30，检测波长254 nm，进样量10 L。在此条件下，苦木混合标准品和药材中各色谱峰分离良好，见图1。1.3.3供试品溶液的制备方法精密称取苦木各不同部位粉末0.5 g（过三号筛），置于具塞锥形瓶中，精密加入85%乙醇25 mL，超声处理30 min，放冷后补重，摇匀，过滤，取续滤液，使用0.45 nm微孔滤膜（PTF
16、E）过滤。1.4苦木不同部位的总生物碱含量测定1.4.1对照品溶液的制备苦木总生物碱含量测定方法参考文献16进行。取苦木碱己对照品适量，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加80%乙醇制成质量浓度为0.1 g/L溶液。精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加入2%盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，以2%盐酸溶液为空白，采用紫外-可见分光光度法在318 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标（y），质量浓度为横坐（a）苦木对照品（b）苦木药材图1苦木对照品及苦木药材高效液相色谱图试验研究NO.06 202373饲料研究 FEED RESEARCH标（x），绘制标准曲线，得回归方程y=15.786x+0.007 1，R=0.995 5，表明对照品在0.0040.02 g/L范围内与吸光度线性关系良好。1.4.2供试品溶液的制备方法精密称取过四号筛的不同部位的苦木粉末各0.5 g，使用滤纸包好，置于索氏提取器中，提取管规格为250 mL，10个样品一批，使用300 mL石油醚回流提取1.5 h去除色素；将苦木粉末置于具塞锥形瓶中，加 80%乙醇25