1、消毒与灭菌,BEA Confidential.|1,第一页，共二十八页。,微生物控制的意义,防止疾病的发生和传播 防止食品和物品等的微生物污染 防止微生物对原材料的破坏腐败和变质,第二页，共二十八页。,灭菌sterilization杀灭所有的微生物，包括细菌的芽孢；消毒disinfection杀灭病原微生物；防腐antiseptic 抑制微生物的生长繁殖；化疗(Chemotherapy)：化疗是指利用具有选择毒性的化学物质如磺胺、抗生素等对生物体内部被微生物感染的组织进行治疗，以杀死组织内的病原微生物，但对机体本身无毒害作用的治疗措施。无菌asepsis 不含活菌 无菌技术aseptic te
2、chnique 在进行外科手术或别离转接及培养时防止其它微生物污染实验材料或实验材料污染环境的操作方法。,第三页，共二十八页。,消毒、灭菌的方法一般可分为：热力灭菌法 辐射杀菌法 物理学方法 滤过除菌法 超声波杀菌法 枯燥和低温抑菌法等 化学方法 消毒 防腐,第四页，共二十八页。,一 热力灭菌法分类：干热灭菌法 湿热灭菌法1 干热灭菌法 A 燃烧：B 烧灼：C 干烤：D 红外线灭菌：,一 物理消毒灭菌法,第五页，共二十八页。,燃烧动物尸体，废弃物。烧灼金属制品镊子，接种环等。干烤灭菌1160/2h烤箱oven2适用于耐高温物品。3温度下降至90100时方可开启箱门，否那么干烤物品会骤冷，破碎或
3、可燃物燃烧。,第六页，共二十八页。,2.湿热灭菌法 A 巴氏消毒法：63/30min，72/15-30s，82/3s B 煮沸消毒法：100，30min 难以杀灭芽胞 C 流通蒸气消毒法：100，15-30min 难以杀灭芽胞 D 间歇蒸汽灭菌法：100，15-30min，37过夜培养3次 E 高压蒸气灭菌法:1含糖培养基:1138Ib/in2，2030min 2 一般耐高温物品(如培养基)：121.3，103.46kPa15 Ib/in2，1530min,第七页，共二十八页。,高压蒸汽灭菌,Hirayama 高压灭菌锅,全自动高压蒸汽灭菌锅,第八页，共二十八页。,湿热与干热灭菌效果的比较,热
4、型 温度时间 布层内的温度灭菌效果 h 20层 40层 100层湿热 90-105.3 3 101 101 101.5 完 全干热 130-140 4 86 72 70.5 不 完 全,第九页，共二十八页。,湿热比干热灭菌好的原因：1 细菌蛋白质在有水的情况下易于 凝固变性2 湿热穿透力强3 湿热蒸气有潜热存在，水蒸气凝固 成水释放潜热，迅速提高被灭菌物 体的温度,第十页，共二十八页。,湿热对一般营养体和孢子的杀灭条件：多数细菌和真菌的营养细胞：在60左右处理5-10分钟；酵母菌和霉菌的孢子：用80以上温度处理；细菌的芽胞：121处理15分钟以上；,第十一页，共二十八页。,影响热力灭菌法的因素
5、,1、温度与作用时间2、微生物因素3、灭菌对象的性质,第十二页，共二十八页。,二光线与射线的消毒作用1 日光与紫外线机理：细胞DNA吸收能量，形成胸腺嘧啶二聚体，干扰DNA复制和蛋白质合成。特点：穿透力弱,只适用于物体外表和空气；产生对人有害的臭氧,2 电离辐射：包括X射线和射线 机制：干扰DNA的合成；破坏细胞膜；产生过氧化氢等 特点：穿透力强，不升高温度,第十三页，共二十八页。,四超声波的消毒作用 可裂解细菌，尤其对G+更敏感 主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等(五渗透压 高渗引起细胞脱水产生质壁别离。常用盐腌，糖渍来保存食品。,三滤过除菌法 a.适用于不耐热、不能用化学方法处理的
6、液体和气体：抗生素、维生素、酶、血清、病毒溶液、毒素溶液、细胞培养液b.不能除去病毒和支原体c.常用膜滤器：0.220.45m,第十四页，共二十八页。,二化学消毒灭菌法机制：1、使微生物蛋白质凝固变性,发生沉淀.如酒精等.2、破坏菌体的酶系统,影响菌体代谢.如过氧化氢等.3、降卑微生物外表张力,增加细胞膜的通透性,使细胞发生破裂或溶解.如来苏儿等酚类物质.,第十五页，共二十八页。,消毒剂的主要种类、浓度及用途1 酚类：作用：菌体蛋白凝固；损伤细胞膜；灭活酶类浓度：石炭酸为3%-5%、来苏儿为2%用途：地面、器具外表和皮肤的消毒2 醇类：作用机制：使菌体蛋白变性与凝固；干扰细菌代谢浓度：乙醇70
7、%-75%用途：用于皮肤的消毒和体温计等的 浸泡,第十六页，共二十八页。,3 重金属盐类：使细菌发生变性和沉淀；酶活性丧失 12%红汞：皮肤、粘膜和小创伤 20.05-0.01%升汞：非金属器皿 4 氧化剂：氧化作用；使蛋白质变性 10.1%高锰酸钾：皮肤、尿道、水果 23%过氧化氢：创伤、皮肤粘膜 32%-2.5%碘酒：皮肤消毒 40.2ppm-0.5ppm氯：饮水和游泳池 510%-20%漂白粉：地面、厕所等,第十七页，共二十八页。,5 外表活性剂：损伤细胞膜；灭活氧化酶等酶的活性；蛋白质沉淀10.05%-0.1%新洁尔灭：皮肤粘膜、手术器械2 0.05%-0.1%杜灭芬：伤口冲洗，金属器
8、械、塑料、橡皮类6 烷化剂：使菌体蛋白和核酸的烷基化110%甲醛：物品外表、空气22%戊二醛：精密仪器、内窥镜等 缺点：有一定的毒性,第十八页，共二十八页。,消毒剂的应用 1 病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石炭酸或2%来苏儿、搅拌均匀，作用2小时 2 皮肤：2.5%碘酒、70%酒精、2%红汞 3 粘膜：1%硝酸银、3%过氧化氢、0.1%高锰酸钾等 4 饮水:氯气、漂白粉 5 厕所：生石灰 6 空气：甲醛熏蒸 7 手：2%来苏儿、2%碘酊、70%酒精,第十九页，共二十八页。,影响消毒剂灭菌的因素,消毒剂的性质、浓度与作用时间微生物的种类与数量温度酸碱度有机物,第二十页，共二十八页。,三、
9、化学疗剂一抗代谢物有些化合物在结构上与生物体所必需的代谢物很相似，以至可以和特定的酶结合，从而阻碍了酶的功能，干扰了代谢的正常进行，这些物质称为抗代谢物(Antimetabolite)。,叶酸对抗物磺胺、嘌呤对抗物6-巯基嘌呤、苯丙氨酸对抗物对氟苯丙氨酸、尿嘧啶对抗物5-氟尿嘧啶胸腺嘧啶对抗物5-溴胸腺嘧啶等等,第二十一页，共二十八页。,二氢蝶啶+对氨基苯甲酸 二氢叶酸 四氢叶酸 辅酶F磺胺药 核酸合成,二氢叶酸合成酶,二氢叶酸复原酶,细菌需要利用对氨基苯甲酸合成生长所需的叶酸：,第二十二页，共二十八页。,二抗生素(Antibiotic)是由某些生物合成或半合成的一类次级代谢产物或衍生物，它们
10、在很低浓度时就能抑制或影响它种生物的生命活动，如杀死微生物或抑制其生长。,最小抑菌浓度MIC:表示抗生素的抗菌活性，单位是g/ml，MIC可以在液体试管或固体平板上测定抗菌谱：抗生素的作用对象有一定范围，这种作用范围称该抗生素的抗菌谱。广谱：对多种微生物有作用如：土霉素、四环素；窄谱：仅对某一类微生物有作用如：多粘菌素,第二十三页，共二十八页。,抑制细胞壁的合成；如：青霉素 破坏细胞膜功能；如：多粘菌素可作用于膜磷脂使膜溶解 抑制蛋白质合成；如：氯霉素，四环素、链霉素等干扰核酸代谢；如：利福霉素、新生霉素、丝裂霉素、灰黄霉素,抗生素作用机制,第二十四页，共二十八页。,抗菌药物的使用与细菌的耐药
11、性的关系 无直接关系，抗菌药物只起到一种选择和扩大耐药菌株的作用,第二十五页，共二十八页。,控制耐药性的策略(1)第一次使用的药物剂量要足；(2)防止在一个时期或长期屡次使用同种抗生素；(3)不同的抗生素(或与其他药物)混合使用；(4)对现有抗生素进行改造或筛选新的更有效的抗生素，这样既可以提高治疗效果，又不会使细菌产生抗药性。,第二十六页，共二十八页。,思考题,1.控制微生物生长繁殖的主要方法及原理有哪些?2.消毒、灭菌、防腐、无菌的概念;3.干烤灭菌、巴氏消毒法、高压蒸汽灭菌法的条件及适用性；4.紫外线灭菌原理及适用性；5.滤过除菌法适用性。,第二十七页，共二十八页。,内容总结,消毒与灭菌。主要用于粉碎细胞，提取细胞组分或制备抗原等。1、使微生物蛋白质凝固变性,发生沉淀.如酒精等.。2、破坏菌体的酶系统,影响菌体代谢.如过氧化氢等.。3、降卑微生物外表张力,增加细胞膜的通透性,使细胞发生破裂或溶解.如来苏儿等酚类物质.。胸腺嘧啶对抗物5-溴胸腺嘧啶。广谱：对多种微生物有作用如：土霉素、四环素。窄谱：仅对某一类微生物有作用如：多粘菌素。(3)不同的抗生素(或与其他药物)混合使用,第二十八页，共二十八页。,