1、SDS尿蛋白电泳,王连升法国Sebia公司上海代表处,第一页，共三十九页。,肾病的现状,第二页，共三十九页。,肾单位的生理结构和各类生理蛋白,第三页，共三十九页。,尿里的蛋白,第四页，共三十九页。,尿蛋白含量增加的原因,间歇性的 生理因素：食高蛋白饮食后，精神冲动、剧烈运动、长时间受 寒，站立过久,病理性的：,第五页，共三十九页。,溢出性蛋白尿,血浆中相对分子质量较小或阳性电荷蛋白异常增多经肾小球滤过，超过肾小管重吸收能力形成蛋白尿。肾小球滤过、肾小管重吸收均正常。,第六页，共三十九页。,7,常见蛋白种类及疾病 游离轻链 见于多发性骨髓瘤 2微球蛋白 见于淋巴组织增生综合征 溶菌酶 见于局部急
2、性粒细胞白血病 血红蛋白 溶血性疾病,血型不合输血 1酸性糖蛋白 见于支气管肺癌 肌红蛋白 挤压伤,心肌梗死,肾前性(溢出)蛋白尿,第七页，共三十九页。,肾后性蛋白尿,来源于肾小管代谢产生的、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质，进入尿液而形成的蛋白尿。,第八页，共三十九页。,肾性蛋白尿,肾小球性蛋白尿 肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜孔径增大、断裂和或静电屏障作用减弱。根据滤过膜损伤程度及尿蛋白的组分，尿蛋白分为2类：1选择性蛋白尿selective proteinuria：相对分子质量中等的清蛋白为主 2非选择性蛋白尿non-selective protein
3、uria：以相对分子质量较大和中等的蛋白质同时存在为主。反映肾小球毛细管壁有严重断裂和损伤。肾小管性蛋白尿 肾小管在受到感染、中毒损伤或继发于肾小球疾病时，因重吸收能力降低或抑制，而出现的以相对分子质量较小的蛋白为主的蛋白尿。,第九页，共三十九页。,肾小球过滤,大分子量蛋白主要为67kDa无法透过肾小球进入肾小管其他决定各种蛋白被过滤的因素:分析形状,带电量,血浆浓度.还有一些血液动力学因素可影响蛋白的过滤.,第十页，共三十九页。,肾小球损伤,原因糖尿病感染性损伤(细菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,单核白血球增多症,)其他系统性疾病(自动免疫系统,癌症,)中毒现象(重金属,药物中毒,)此时,我们
4、可以在尿蛋白中发现白蛋白和其他大分子量蛋白(大于 67kDa)。,第十一页，共三十九页。,肾小管的再次吸收功能,在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白，分子量小于67kDa,将会在肾小管内被重新吸收(内吞作用).99%的在肾小球内被过滤的蛋白,都将会被重新吸收利用.例如,18g/24-h 白蛋白将会被过滤掉;30mg/24-h 白蛋白在人的尿液中被发现.,第十二页，共三十九页。,肾小管损伤,肾小管损伤将会改变其对小蛋白分子的重新吸收能力(小于67kDa的蛋白)产生原因遗传原因(Fanconi syndrome)代谢性疾病(糖尿病,草酸中毒)免疫球蛋白单克隆扩增(myeloma,Waldenstrm)药
5、物作用(氨基甙类抗生素)中毒(金属中毒,氨基甙类)白蛋白(30%)及其它小分子蛋白(小于 67kDa)都将会在尿液中被找到。,第十三页，共三十九页。,混合性损伤,混合性蛋白尿 肾脏病变同时或相继累及肾小球和肾小管时而产生的蛋白尿。各组分所占比例因病变损害部位不同而不一致。,第十四页，共三十九页。,尿液的收集和保存,尿液收集:-24小时尿-晨尿中段 要注意是否为间歇性蛋白尿保存-新鲜尿液-4C保存最多一周-注意防腐，防止反复冻融导致IgG浓度降低-检测前离心(10min 3000 rpm,第十五页，共三十九页。,尿蛋白检测,初级分析是否有蛋白增加-直接进行总尿蛋白浓度测定进一步分析:蛋白尿类型本
6、周氏蛋白类型特异蛋白定量,第十六页，共三十九页。,定量分析蛋白尿,筛查-溴酚蓝试纸条检测(150-200 mg/L):蛋白尿阳性变蓝，本周氏蛋白时会产生假阴性定量检测方法-比浊法不建议使用-建议采用比色法焦性没食子酚红，考马斯蓝,第十七页，共三十九页。,尿中总蛋白的定量分析无法检测到低浓度的本周氏蛋白,第十八页，共三十九页。,特异蛋白测定,免疫法定量测定肾小球性标志蛋白:Albumin,IgG,Transferrin肾小管性标志蛋白:b 2 microglobulin,RBP,a1 microglobulin如果需要更多的特异蛋白信息，需要更多的测试,第十九页，共三十九页。,尿蛋白电泳提供更全
7、面的蛋白信息,第二十页，共三十九页。,a2-巨球蛋白(MW:900 kDa),注:(Cystatin C),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C,第二十一页，共三十九页。,5 PROTEINURIE,14.3 KDa,26.6 KDa,150 KDa,67 KDa,第二十二页，共三十九页。,肾小球性蛋白尿,血清,Glomerular proteins(67kDa)肾小球性蛋白,第二十三页，共三十九页。,肾小管性蛋白尿,Ser,Ser,Tubular proteins肾小管性蛋白(67kDa),第二十四页，共三十九页。,临床病例,2:Light chain myeloma轻链性骨髓瘤4:Macroscop
8、ic Hematuria肉眼血尿,MW,第二十五页，共三十九页。,5:Overload Proteinuriawith polymerised BJ 本周氏蛋白多聚体,第二十六页，共三十九页。,非浓缩尿蛋白电泳的优点,第二十七页，共三十九页。,本周氏Bence-Jones蛋白检测,第二十八页，共三十九页。,本周氏蛋白Bence-Jones Proteins,BJP),Henry Bence Jones 于1844年在一个骨髓瘤患者尿中发现的一种具有特殊凝溶性质的蛋白该种蛋白4060发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀。后被证明是单克隆的免疫球蛋白轻链二聚体。大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白,
9、第二十九页，共三十九页。,本周氏蛋白,浆细胞增生症,影响,血液中出现游离轻链,尿液中出现,起因,结果,骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.,肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病,第三十页，共三十九页。,本周氏蛋白阳性患者,多表现为肾脏损害极易误诊为慢性肾炎轻链有3种形式出现在血清或尿中正常的轻链过剩 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病伴随轻链单一轻链,第三十一页，共三十九页。,本周氏蛋白免疫固定电泳方法,仪器：Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪试剂：本周氏蛋白电泳试剂 方法：点样，电泳，加抗体反响，条带检测,ELP 泳道:固定液GAM 泳道：抗IgG.A.M重链抗血清K 泳道：抗 轻链抗血清L
10、泳道：抗 轻链抗血清Kfree 泳道：抗游离 轻链抗血清L free 泳道：抗 游离轻链抗血清,第三十二页，共三十九页。,免疫球蛋白,免疫球蛋白是机体的正常生理成分多克隆分类重链：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE轻链：、10种类型,第三十三页，共三十九页。,本周氏蛋白检测结果解析,游离kappa复合kappa,游离lambda,第三十四页，共三十九页。,Lambda Bence Jones protein,(G,A or M)kappa kappa Bence Jones2 different levels of polymerization,第三十五页，共三十九页。,Bence Jon
11、es suspectedNo Bence Jones suspectedBence Jones suspectedBences Jones suspected,BenceJones?,Bence Jones lambda(polymerized)No Bence Jones Bence Jones lambdaBences Jones kappa(polymerized),第三十六页，共三十九页。,本周氏蛋白电泳检测对象,肾病不明原因水肿尿蛋白阳性血清蛋白电泳提示“M蛋白尿SDS蛋白电泳提示“轻链存在骨髓瘤患者其他淋巴系统恶性增殖性疾病淋巴细胞白血病浆细胞型白血病,第三十七页，共三十九页。,谢 谢,第三十八页，共三十九页。,内容总结,SDS尿蛋白电泳。慢性肾功能衰竭（CRF）是各种慢性肾脏病（CKD）的最终结果。肾单位的生理结构和各类生理蛋白。肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜孔径增大、断裂和或静电屏障作用减弱。1选择性蛋白尿selective proteinuria：相对分子质量中等的清蛋白为主。例如,18g/24-h 白蛋白将会被过滤掉。中毒(金属中毒,氨基甙类)。浆细胞型白血病,第三十九页，共三十九页。,